宋春麗

(邯鄲市中心醫(yī)院婦一科，河北 邯鄲 056000)

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FHIT、C-myc基因在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義

宋春麗

(邯鄲市中心醫(yī)院婦一科，河北 邯鄲 056000)

目的 檢測(cè)脆性組氨酸三聯(lián)體基因(FHIT)、C-myc基因在宮頸癌中的表達(dá)，分析兩者之間的相關(guān)性。方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)50例宮頸浸潤癌組織(CC)、70例宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)和30例正常宮頸組織中FHIT和C-myc的表達(dá)、分析其與宮頸癌臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系及兩者之間的相關(guān)性。結(jié)果 (1) FHIT在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達(dá)分別為93.3%、67.1%、22%，C-myc在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達(dá)分別為16.7%、47.1%、76%。(2)FHIT的表達(dá)率隨FIGO分期升高、病理學(xué)分級(jí)升高而逐漸降低(P<0.05),在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中逐漸降低(P>0.05)。C-myc陽性表達(dá)隨FIGO分期升高、病理學(xué)分級(jí)升高而升高(P<0.05)，在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中逐漸升高(P>0.05)。(3)FHIT與C-myc的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論 同時(shí)檢測(cè)FHIT、C-myc基因可能有助于對(duì)宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)，并且有望成為對(duì)宮頸癌治療效果評(píng)價(jià)及預(yù)后分析的有效方法，兩者結(jié)合可作為宮頸癌預(yù)后判斷的指標(biāo)。

脆性組氨酸三聯(lián)體基因； C-myc基因； 宮頸癌； 宮頸上皮內(nèi)瘤變； 免疫組化

脆性組氨酸三聯(lián)體基因(FHIT)是一種抑癌基因,位于 3P14.2 區(qū)域,該基因跨越人類染色體脆性部位 FRA3B，在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和凋亡中發(fā)揮作用。C-myc基因是一種可使細(xì)胞無限增殖、獲永生化功能、促進(jìn)細(xì)胞分裂的基因，與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。FHIT、 C-myc在多種腫瘤組織中呈表達(dá)異常,但兩者在宮頸癌中相互作用的關(guān)系目前國內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化方法對(duì)宮頸癌組織中FHIT和C-myc的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),結(jié)合臨床病理資料,探討兩者在宮頸癌中的表達(dá)及相互關(guān)系,為患者的預(yù)后估計(jì)提供參考。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源及處理 本研究資料取自邯鄲市中心醫(yī)院從2012年1月至2015年9月手術(shù)切除及活檢的宮頸組織石蠟包埋標(biāo)本150例為研究對(duì)象，其中30 例正常宮頸標(biāo)本取自因子宮良性病變行子宮切除術(shù)的患者，宮頸上皮內(nèi)瘤變70例，其中CINⅠ15 例、CINⅡ20例、CINⅢ35例，宮頸癌50例，按FTGO 臨床分期標(biāo)準(zhǔn): Ⅰ期 16 例[其中Ⅰa1期3例，Ⅰa2期4例，Ⅰb1期 5例，Ⅰb2期4例，患者年齡19～45歲,平均年齡(33.9±5.94)歲]。Ⅱ期24 例[其中Ⅱa期10例，Ⅱb期14例，患者年齡22～58歲,平均年齡(46.4±9.94)歲]。Ⅲ期～I(xiàn)V期 10 例，患者年齡40～52歲,平均年齡(44.9±6.79)歲。宮頸癌患者均為宮頸鱗狀細(xì)胞癌，按腫瘤分化程度: 角化性大細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌14例，非角化性大細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌26 例，小細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌10例。在手術(shù)的宮頸癌患者中，有淋巴轉(zhuǎn)移5例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例。全部標(biāo)本均經(jīng)過病理科診斷，術(shù)前未經(jīng)過放、化療及腫瘤藥物治療。

1.2 主要試劑 FHIT兔抗人多克隆抗體、C-myc鼠抗人單克隆抗體、SP試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。DAB顯色試劑購自武漢博士德生物工程公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色 采用免疫組織化學(xué)S-P法，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，以檸檬酸緩沖液高溫高壓進(jìn)行抗原修復(fù)，DAB顯色，自來水充分沖洗;梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。PBS代替一抗作空白對(duì)照，陽性對(duì)照為隨試劑盒附帶的陽線切片。每張切片選取5個(gè)高倍(400倍)視野，每視野觀察100個(gè)細(xì)胞。

1.4 結(jié)果判定 所有切片的觀察均經(jīng)3名病理科醫(yī)生獨(dú)立在光鏡下完成。FHIT蛋白的表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞漿，C-myc蛋白的陽性表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞核,以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。按染色強(qiáng)度計(jì)分,0分為無色,1分為淡黃色,2分為黃色,3分為棕黃色；按陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分,陽性細(xì)胞數(shù)為≤10%為0分(-)，陽性細(xì)胞數(shù)>10%～≤25%為1分(+)，陽性細(xì)胞數(shù)>25%～≤50%為2分(++)，陽性細(xì)胞數(shù)>50%～≤75%為3分(+++)，陽性細(xì)胞數(shù)>75%為4分(++++)。0～<3分為表達(dá)陰性，≥3分為表達(dá)陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05(雙側(cè))。

2 結(jié) 果

2.1 FHIT、 C-myc在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達(dá) FHIT在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達(dá)分別為93.3%、67.1%、22%，其中正常宮頸組與CIN組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CIN組與宮頸癌組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，正常宮頸組與宮頸癌組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C-myc在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達(dá)分別為16.7%、47.1%、76%，其中正常宮頸組與CIN組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CIN組與宮頸癌組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，正常宮頸組與宮頸癌組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 三組FHIT、 C-myc表達(dá)

2.2 FHIT、C-myc表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系 FHIT蛋白在宮頸癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期的表達(dá)分別為43.8%、12.5%、10%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在角化性大細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌、非角化性大細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌及小細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)分別為50%、11.5%、10%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌中，表達(dá)分別為42.9%、20%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。C-myc蛋白在宮頸癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期的表達(dá)分別為43.8%、87.5%、90%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在角化性大細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌、非角化性大細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌及小細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)分別為71.4%、76.9%、80%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌中，表達(dá)分別為76.2%、100%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 FHIT和C-myc蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床特征的關(guān)系

2.3 宮頸癌組織中FHIT與C-myc表達(dá)的相關(guān)性 在50例宮頸癌中，F(xiàn)HIT與C-myc同時(shí)表達(dá)陽性有10例，同時(shí)表達(dá)陰性有5例，應(yīng)用spearman相關(guān)分析，F(xiàn)HIT與C-myc的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 FHIT和C-myc蛋白在宮頸癌中表達(dá)的相關(guān)性

注：r=-0.622，P=0.000。

3 討 論

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種雙鏈DNA病毒,其核心含有約7 800～7 900個(gè)堿基對(duì)高危型人乳頭瘤病毒的持續(xù)感染,是子宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮頸癌發(fā)生的最主要因素[1]。但僅有HPV感染對(duì)宮頸癌的發(fā)展是不夠的，其他宿主因素包括改變腫瘤抑制基因的活動(dòng)可能導(dǎo)致致癌過程[2]。到目前為止，多種人類原發(fā)腫瘤組織和細(xì)胞系中，尤其是暴露于環(huán)境致癌物的器官上皮腫瘤中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有FHIT基因高比例的缺失，包括胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、宮頸癌和頭頸部腫瘤等。近年來，人們從轉(zhuǎn)錄、翻譯等不同水平研究了FHIT與宮頸癌的關(guān)系。在宮頸癌中有44%～71%的FHIT基因的轉(zhuǎn)錄異常和表達(dá)異常，而且在宮頸癌前病變和原位癌中也有FHIT的異常轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，表明FHIT基因的異常改變參與了宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展。研究[2]表明FHIT基因CpG島甲基化是FHIT基因失活的主要機(jī)制，是與宮頸癌的發(fā)生有密切關(guān)系的早期事件。本研究顯示FHIT在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達(dá)分別為93.3%、67.1%、22%，在宮頸癌中的表達(dá)明顯低于CIN組及正常宮頸組，三組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明FHIT在宮頸癌中發(fā)生了缺失，與其他研究結(jié)果一致[3]。且發(fā)現(xiàn)FHIT表達(dá)與臨床分期、病理分級(jí)關(guān)系密切，F(xiàn)HIT的低表達(dá)主要見于期別較高、小細(xì)胞型鱗狀細(xì)胞癌及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者中，提示它與宮頸癌潛在的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起重要作用。有研究表明，人乳頭狀瘤病毒16感染、FHIT基因甲基化和葉酸缺乏可能促進(jìn)宮頸癌的進(jìn)展，F(xiàn)HIT基因可能是一個(gè)有效的目標(biāo)子宮頸癌的預(yù)防和治療[4]。

C-myc基因是myc基因家族的重要成員之一，C-myc基因既是一種可易位基因，又是一種多種物質(zhì)調(diào)節(jié)的可調(diào)節(jié)基因，也是一種可使細(xì)胞無限增殖，獲永生化功能，促進(jìn)細(xì)胞分裂的基因，與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)。C-myc基因的擴(kuò)增和過度表達(dá)可能是某些宮頸癌發(fā)生中的早發(fā)事件，約1/3的早期浸潤性癌和某些宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變3級(jí)出現(xiàn)C-myc的過度表達(dá)，但并未在正常宮頸上皮和低級(jí)別非典型增生中發(fā)現(xiàn)，有研究[5]表明，在早期癌中C-myc的擴(kuò)增和預(yù)后較差有關(guān)。研究[6]證明，在宮頸癌中，C-myc蛋白的表達(dá)在有周圍組織浸潤、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時(shí)顯著升高，其陽性表達(dá)隨期別的增加而升高。何志連[7]等研究結(jié)果顯示：C-myc在正常宮頸組織、CIN及宮頸癌中陽性表達(dá)率分別為20%(2/10),45%(9/20)和66.7%(20/30), 且隨FIGO分期、病理學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而升高。本研究顯示，C-myc在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達(dá)分別為16.7%、47.1%、76%，且隨FIGO分期、病理學(xué)分級(jí)而升高。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中的表達(dá)，說明C-myc參與了宮頸癌的發(fā)展，對(duì)預(yù)后起預(yù)測(cè)作用。

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邯鄲市科技局科技計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：1323108087-13)

R737.33

B

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2015-11-02)