杜鍇

實時熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA的價值分析與研究

杜鍇

目的探討選擇實時熒光定量PCR法對乙肝病毒DNA實施檢測的臨床價值。方法250例乙型肝炎患者作為此次實驗對象,臨床選擇血清學標志物的方法實施疾病檢測后最終有效確診。對所有乙型肝炎患者臨床均選擇實時熒光定量PCR法實施疾病檢測,對最終檢測結果進行分析。結果乙型肝炎患者分別選擇熒光PCR法以及血清學標志物方法實施疾病檢測,最終獲得的檢測結果基本表現一致。臨床選擇實時熒光定量PCR法完成疾病檢測后,最終獲得的病毒DNA數據更為準確。實時熒光定量PCR法對大三陽臨床最終檢測陽性率達到了96%；對小三陽,臨床最終檢測陽性率達到了69%；而對HbsAg(-)、乙型肝炎表面抗體(HbsAb)(-)以及HbeAb(-)以及乙型肝炎E抗原(HbeAg)(-)最終檢測陽性率只為2.21%。對于大三陽患者以及小三陽患者的血清PCR檢測結果進行觀察發(fā)現,均表現出較高的拷貝數。結論乙型肝炎患者臨床選擇實時熒光定量PCR法實施疾病檢測,針對乙肝病毒以及相關數據完成檢測后可以獲得準確結果,從而證明對乙型肝炎患者在實施疾病檢測的過程中,選擇實時熒光定量PCR法以及乙肝病毒DNA方法均可以獲得較為理想的效果,臨床均可以廣泛普及應用。

實時熒光定量PCR法；乙肝病毒；臨床價值

乙型肝為被歸屬為感染性疾病的一種,主要因為患者出現了乙肝病毒感染的情況后,對患者的肝臟出現炎性病變的情況,最終表現出的一種綜合性疾病。此種疾病傳播較為廣泛,對患者會造成極為嚴重的危害,較易表現出持續(xù)性帶病毒狀態(tài)的情況,最終出現慢性感染的現象［1］。少數患者會表現出原發(fā)性肝細胞癌以及出現肝硬化的情況。以往臨床在對乙型肝炎病毒攜帶者進行疾病檢測的過程中,主要選擇血清學標志法實施疾病檢測,其主要通過對患者的血液實施檢測,最終有效完成檢測［2］。但是在實施血清學檢測的過程中,如果操作方式出現了失誤,最終較易導致工作人員出現感染的情況。為確保乙型肝炎患者的乙肝病毒DNA可以獲得準確檢測結果,本次研究主要將本院收治的乙型肝炎患者作為主要對象,臨床分別選擇實時熒光定量PCR法以及血清學標志物方法展開乙肝病毒DNA檢測,具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2014年3月～2016年5月收治的乙型肝炎患者250例作為此次實驗對象；患者年齡16～53歲,平均年齡(36.39±5.71)歲。

1.2 方法 所有乙型肝炎患者臨床分別實施實時熒光定量PCR法檢測以及血清學標志法針對乙肝病毒DNA數據實施檢測。之后針對兩種方法的檢測結果進行對比。主要選擇廣州達安PCR熒光分析儀對所有乙型肝炎患者的乙肝病毒DNA數據展開實時熒光定量PCR檢測。臨床需要做好一次性真空采血管的準備工作,清晨抽取患者5 ml靜脈血,對血清實施離心分離,于-20℃的環(huán)境中進行凍存?zhèn)溆茫恢髮λ幸倚透窝谆颊邔嵤┘袡z測。臨床主要選擇分辨熒光免疫分析技術完成乙肝標志物檢測；臨床選擇實時熒光定量PCR法完成乙肝病毒DNA(HBV-DNA)檢測［3］。

1.3 療效判斷標準［4］顯效：臨床選擇實時熒光定量PCR法對乙肝病毒完成檢測的數據,同血清學標志法檢驗結果進行對比,檢測結果較為一致,并且選擇實時熒光定量PCR法完成檢測后,能夠獲得更為準確的乙肝病毒檢測數據,大三陽者［乙型肝炎表面抗原(HbsAg)(+)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)(+)及乙型肝炎核心抗體(HbcAb)(+)］以及小三陽者［HbsAg(+)、HbcAb(+)及乙型肝炎肝炎E抗體(HbeAb)(+)］表現出更高的拷貝數；效果不明顯：臨床選擇實時熒光定量PCR法對乙肝病毒完成檢測的數據,同血清學標志法檢驗結果進行對比,表現出少許的差別,并且實時熒光定量PCR法完成檢測后,在最終獲得的準確度以及其他方面無突出表現。無效：臨床選擇實時熒光定量PCR法對乙肝病毒完成檢測的數據,同血清學標志法檢驗結果進行對比,表現出的差別較大,并且選擇實時熒光定量PCR法完成檢測后的數據更為準確。

2 結果

選擇熒光PCR方法對乙型肝炎患者的病毒DNA數據實施檢測,同選擇普通方法血清學標志法實施檢測的乙型肝炎病毒DNA數據結果進行比較,較為一致,但是選擇實時熒光定量PCR法獲得的檢測結果準確性更高。對大三陽臨床最終檢測陽性率達到了96%；對小三陽,臨床最終檢測陽性率達到了69%；而對HbsAg(-)、乙型肝炎表面抗體(HbsAb)(-)以及HbeAb(-)以及乙型肝炎E抗原(HbeAg)(-)最終檢測陽性率只為2.21%。從而證明在實施乙肝病毒DNA檢測的過程中,實時熒光定量PCR法的應用可以獲得更為顯著的效果。

3 討論

乙型肝炎屬于消化內科較為普遍的一種疾病。其主要于患者的肝臟位置出現,此種疾病的出現對人們會造成嚴重的影響。作為一種嚴重的傳染病,在眾多傳播途徑中血液傳播屬于較為常見的一種,對此需要禁止同患者的血液進行接觸；此外還能夠通過母嬰傳播,所有乙型肝炎患者禁止生育,避免新生兒為乙肝病毒攜帶者。此外皮膚黏膜破損傳播以及性傳播均會導致乙型肝炎患者出現乙肝傳染的情況。依據疾病病程的長短,主要將乙肝疾病分為急性乙型肝炎疾病以及慢性乙型肝炎疾病。于字面意思進行解釋發(fā)現,同慢性乙型肝炎進行比較,急性乙型肝炎對患者造成的影響更為嚴重,甚至會對患者的生命安全產生較為嚴重的影響。依據患者疾病的嚴重程度,主要分為乙肝攜帶者、活動性乙型肝炎患者、重型肝炎患者以及肝炎肝硬化患者［5-9］。

當前在對血清HBV-DNA實施檢測的過程中,選擇實時熒光定量PCR法實施檢測可以獲得顯著效果,表現出較優(yōu)的檢測重復性,其針對抗病毒藥物療效在實施觀察過程中的相關問題可以加以有效解決。此種方法臨床應用檢測原理為：對于PCR反應體系,除了包括普通PCR需要的引物、還包括熒光染料以及熒光基團,對于此類熒光物質存在特定波長,可以有效作為臨床檢測過程中的熒光探針［10-15］。對于儀器能夠有效自動檢出,通過將熒光信號進行積累,針對PCR進程可以做到實時監(jiān)測。在PCR循環(huán)過程中對測量的信號可以作為實驗熒光閾值的坐標。選擇實時熒光定量PCR檢測的方法,即使患者表現出微量HBV-DNA的情況,則也可以獲得準確的檢測結果［16］。

綜上所述,對于乙型肝炎患者的乙肝病毒DNA選擇實時熒光定量PCR的方法實施檢測,同選擇血清學標志法檢測結果進行分析發(fā)現,可以獲得更為顯著的測定結果,并且獲得的綜合內容更為全面,進而為乙型肝炎疾病患者臨床治療方案的研究提供可靠依據,從而證明對乙型肝炎患者臨床選擇實時熒光定量PCR法完成乙肝病毒DNA檢測,最終可以為檢測結果的準確性做出有效保證。

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Analysis and research of value by real-time fluorescence quantification PCR method in detection of hepatitis B virus DNA

DU Kai.Department of Nuclear Medicine,Henan Nanyang City First People’s Hospital,Nanyang 473000,China

ObjectiveTo investigate clinical value by real-time fluorescence quantification PCR method in detection of hepatitis B virus DNA.MethodsThere were 250 patients with hepatitis B as study subjects.All patients received real-time fluorescence quantification PCR method for disease detection,and their final detection outcomes were analyzed.ResultsThe hepatitis B patients received real-time fluorescence quantification PCR method and serologic markers for disease detection,with basically the same outcomes.Clinical implement of real-time fluorescence quantification PCR method showed more accurate data on virus DNA.Realtime fluorescence quantification PCR method had final positive detection rate of big three positive as 96% and 69% of small three positive,while its final positive detection rate was 2.21% of HbsAg(-),hepatitis B surface antibody(HbsAb)(-),HbeAb(-) and hepatitis B e antigen(HbeAg)(-).Serum PCR detection in patients with big three positive and small three positive all showed high copy number.ConclusionClinical selection of real-time fluorescence quantification PCR method for disease detection in hepatitis B patients can provide accurate outcome after complete detection of hepatitis B virus and related data.Therefore,implement of real-time fluorescence quantification PCR method and hepatitis B virus DNA for disease detection in hepatitis B patients can both show ideal effect,and they are worth widely clinical promotion and application.

Real-time fluorescence quantification PCR method; Hepatitis B virus; Clinical value

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.01.022

2016-12-06］

473000 河南省南陽市第一人民醫(yī)院核醫(yī)學科