劉立恒 ， 姚美蘭 ， 王 萍 ， 李 麟 ， 吳家斌

(1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 江西 南昌 330045 ； 2.江西省吉安市新干縣大洋鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合站 ， 江西 新干 331317)

鼠鐮形艾美耳球蟲(chóng)致病性試驗(yàn)

劉立恒1， 姚美蘭2， 王 萍1， 李 麟1， 吳家斌1

(1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 江西 南昌 330045 ； 2.江西省吉安市新干縣大洋鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合站 ， 江西 新干 331317)

小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在多種醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用。其需求量日益增多，并且對(duì)質(zhì)量的要求越來(lái)越高[1]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染寄生蟲(chóng)可使實(shí)驗(yàn)研究受到干擾，甚至影響結(jié)論的正確性，從而降低科研的科學(xué)性、準(zhǔn)確性及穩(wěn)定性[2]。多發(fā)易發(fā)的鼠球蟲(chóng)病是由艾美耳球蟲(chóng)寄生于鼠的腸道而引起小鼠消化不良和腹瀉甚至死亡癥狀的寄生蟲(chóng)病，危害較為嚴(yán)重。據(jù)報(bào)道，寄生于小鼠的艾美耳球蟲(chóng)有12種，其生活史清楚且具有一定致病性的鐮形艾美耳球蟲(chóng)(E.falciformis)及蠕形艾美耳球蟲(chóng)(E.vermiformis)兩種[3]，為了解小鼠感染E.falciformis蟲(chóng)株后出現(xiàn)的臨床癥狀及寄生部位組織病理變化，筆者進(jìn)行鼠鐮形艾美耳球蟲(chóng)致病性試驗(yàn)，旨為共同提高對(duì)小鼠鐮形艾美耳球蟲(chóng)病的認(rèn)識(shí),防制小鼠球蟲(chóng)病的發(fā)生，保障實(shí)驗(yàn)小鼠質(zhì)量提供臨床理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 卵囊 鐮形球蟲(chóng)卵囊由本實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 動(dòng)物 球蟲(chóng)病陰性小鼠40只(南昌某實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供)。

1.3 藥品 飽和食鹽水和5%重鉻酸鉀液(實(shí)驗(yàn)室提供)，無(wú)水乙醇，二甲苯，福爾馬林，H.E.染液。

1.4 器械 離心機(jī)，顯微鏡，電冰箱，生化培養(yǎng)箱，電熱恒溫干燥箱，KD-1508A 輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，生物組織標(biāo)準(zhǔn)攤烤片機(jī)，ZT-12J 生物組織自動(dòng)脫水機(jī)，電子天平等全套寄生蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)常規(guī)器皿。

1.5 小鼠分組 蟲(chóng)株復(fù)壯、增殖、感染、對(duì)照4組各為10只小鼠。

1.6 小鼠飼養(yǎng) 小鼠飼養(yǎng)在專(zhuān)用塑料盒內(nèi)，標(biāo)注組別，飼喂新鮮鼠料和潔凈清水，常換墊料保持衛(wèi)生。

1.7 蟲(chóng)株復(fù)壯、增殖 清水離心洗凈卵囊，經(jīng)口感染小鼠，第8天收集新鮮糞，用飽和鹽水漂浮、離心分離收集卵囊，保存于2.5%重鉻酸鉀液青霉素瓶?jī)?nèi)，置28 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24～30 h備用。先復(fù)壯收集卵囊再增殖，收集大量的卵囊，以保障足夠的卵囊數(shù)。

1.8 感染致病 以4×104個(gè)孢子化卵囊/只，經(jīng)口感染小鼠，感染后每天觀察小鼠臨床癥狀并于第6～10天每天剖檢2只小鼠，觀察腸道病變、拍照；取小鼠病變腸段H.E.染色制片，顯微鏡下觀察，記錄。

1.9 染色片的制作 手術(shù)剪橫截長(zhǎng)約3 mm的盲(結(jié))腸組織3段，用紗布包好放入燒杯中，自來(lái)水沖洗12～24 h取出，經(jīng)脫水機(jī)上梯度乙醇自動(dòng)脫水后經(jīng)二甲苯透明，用鑷子將組織快速夾于30 ℃恒溫箱已制好的小紙盒里溶解的石蠟中。取出蠟盒里凝固的蠟塊裝在KD-1508A輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)上，調(diào)整8 μm切片厚度，勻速緩慢搖柄切片，切片置生物組織標(biāo)準(zhǔn)攤烤片機(jī)45 ℃恒溫水槽中，用潔凈的載玻片撈取蠟帶，再用生物組織標(biāo)準(zhǔn)攤烤片機(jī)烤片至干燥。蘇木精和H.E.染色[4]，封片。

2 結(jié)果

2.1 寄生部位 鐮形艾美耳球蟲(chóng)主要寄生于小鼠大腸段的盲腸及結(jié)腸。

2.2 感染組小鼠臨床表現(xiàn) 感染第5～8天小鼠飲食、活動(dòng)量逐減，精神沉郁，被毛逆亂，采食量減少，消化不良，稀糞并有大量鐮形艾美耳球蟲(chóng)卵囊排出，消瘦，甚至死亡(見(jiàn)中插彩版圖1)。

2.3 病變 肉眼觀察結(jié)腸逐漸萎縮變短，內(nèi)含大量黏液并有少量干酪樣物質(zhì)；盲腸開(kāi)始腫脹后盲端萎縮變硬，質(zhì)地變脆，盲腸黏膜上有粟粒大的灰白色的壞死灶，無(wú)出血。

2.4 病理組織 顯微鏡下觀察腸絨毛、腸腺、固有膜及黏膜下層等結(jié)構(gòu)具有相當(dāng)程度的損傷和破壞； 腸上皮細(xì)胞凋亡，絨毛脫落。細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大量裂殖體、裂殖子的和大小不等的合子，但黏膜下未見(jiàn)出血(見(jiàn)中插彩版圖2)。

3 分析與討論

3.1 鐮形艾美耳球蟲(chóng)蟲(chóng)株的一般生物性 卵囊形態(tài)類(lèi)圓形，無(wú)色，平均大小22.5×18.2 μm，卵囊壁光滑、兩層，無(wú)微孔，形狀指數(shù)1.24，有內(nèi)外殘?bào)w，孢子化時(shí)間為20～24 h，潛隱期為7 d，寄生部位在盲腸或結(jié)腸，有一定的毒性。目前在我國(guó)小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的多是鐮形艾美耳球蟲(chóng)(E.falciformis)[5],此試驗(yàn)提出鐮形艾美耳球蟲(chóng)的致病性，防制小鼠球蟲(chóng)病的發(fā)生，對(duì)控制小鼠的微生物學(xué)質(zhì)量具有指導(dǎo)意義,

3.2 小鼠感染寄生蟲(chóng)的原因及預(yù)防 實(shí)驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)在窄小的籠具中，排泄物和污濁的空氣易造成呼吸道、消化道疾病的傳播；物質(zhì)條件的低劣、食物供應(yīng)不穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)鼠體質(zhì)下降，抵抗力降低。小鼠身體素質(zhì)下降及實(shí)驗(yàn)小鼠管理不當(dāng)?shù)奶攸c(diǎn)，是小鼠感染寄生蟲(chóng)的主要原因。建議加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，合理安排換窩時(shí)間，加強(qiáng)墊料消毒管理，減少感染。有條件的可通過(guò)生物凈化手段引進(jìn)清潔級(jí)以上小鼠并在屏障系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行飼養(yǎng)和繁殖；定期對(duì)飲水、飼料、墊料及紫外燈、消毒鍋等的消毒效果進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)室內(nèi)落下菌及菌群進(jìn)行分析，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量。

[1] 楊曉野，劉珍蓮,郭媛華，等. 實(shí)驗(yàn)小鼠寄生蠕蟲(chóng)及外寄生蟲(chóng)種類(lèi)分析[J]. 內(nèi)蒙古畜牧科學(xué)，1994,03:38-40.

[2] 李超，鄭安潔,張強(qiáng)，等. 實(shí)驗(yàn)小鼠體內(nèi)寄生蟲(chóng)感染情況調(diào)查[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)病防治雜志，2005，02:163-164.

[3] 徐彩云,張大維,邴國(guó)強(qiáng)，等. 實(shí)驗(yàn)小動(dòng)物艾美球蟲(chóng)概述[J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2004,05:318-320.

[4] 劉世新，實(shí)用生物組織學(xué)技術(shù)[ M ]，北京：科學(xué)出版社，2004：74-75．

[5] 張西臣，楊舉，尹繼剛，等.費(fèi)氏艾美爾球蟲(chóng)(E.ferrisi)某些生物學(xué)特性的研究[J]. 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué),1997.17(2):64-66.

S852.72+3

B

0529-6005(2017)08-0035-01

2016-09-29

江西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20151BA204017)

劉立恒(1974-)，男，講師，博士，從事動(dòng)物寄生蟲(chóng)學(xué)研究，E-mail:lihengliu0714@163.com

吳家斌，E-mail:okwjb123@163.com