韓映晨 崔鉉 安賢蘭 高杰

淺談藥品微生物檢驗(yàn)用菌種保藏方法

韓映晨 崔鉉 安賢蘭 高杰

微生物檢驗(yàn)用菌種具有變異快的特點(diǎn)，保藏的基本是降低微生物的活性，對(duì)不同菌種的保藏方法進(jìn)行研究。隨著操作難度和技術(shù)難度的提升，菌種的保存期限也在不斷的延長(zhǎng)。本文對(duì)微生物檢驗(yàn)菌種保藏方法的保藏原理以及不同方法的優(yōu)劣及其效果進(jìn)行探究和分析。根據(jù)不同菌種的具體特征，選擇恰當(dāng)?shù)谋２胤椒?，以確保保藏的效果，實(shí)現(xiàn)保藏的目的。選恰當(dāng)?shù)谋２胤椒ㄟM(jìn)行保藏，充分保證菌種的活性以及純度，發(fā)揮菌種在微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中的價(jià)值，提高研究的準(zhǔn)確性。

藥品微生物；檢驗(yàn)用菌種；保藏方法

微生物檢驗(yàn)用菌種作為一種輔助檢驗(yàn)菌種，其對(duì)于檢驗(yàn)藥物的原材料、輔助材料以及生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量具有重要的價(jià)值。菌種的保藏是研究過(guò)程中的一項(xiàng)重要的工作，研究和選擇良好的保藏方法一直以來(lái)是一項(xiàng)重要的工作[1]。為了保證菌種在檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果，保持菌種的活性、純度，控制菌種的變異具有重要的作用和價(jià)值[2]。

1 菌種保藏的目的和原理

菌種保藏的主要目的就是菌種能夠在保持原有活力和形狀的基礎(chǔ)上，更好完成微生物檢驗(yàn)的作用。從這個(gè)目的出發(fā)，對(duì)菌種進(jìn)行保藏的最終目標(biāo)就是降低菌種的死亡、變異、污染，保持菌種的活性[3]。菌種保藏的主要原理就是選取優(yōu)良的菌種，將其代謝水平降低到最低的活躍狀態(tài)或是保持在一種相對(duì)靜止的狀態(tài)。這樣能夠保證菌種不會(huì)發(fā)生變異，保持相應(yīng)的活性。

菌種保藏方法的選用除了上述的保證菌種原有的優(yōu)良性狀不變的考量因素，還應(yīng)考慮到保藏方法本身的簡(jiǎn)便和經(jīng)濟(jì)，主要是操作成本、保存條件需求的苛刻度以及生產(chǎn)推廣使用的可行性[4]。

2 幾種菌種保藏方法的介紹

不同的菌種具有不同的遺傳特性，這導(dǎo)致不同菌種的保存方法也存在差異。良好的保藏方法不僅應(yīng)該確保將菌種的活性保持在最佳的狀態(tài)，同時(shí)還應(yīng)該保證方法的操作簡(jiǎn)單，流程簡(jiǎn)化，避免復(fù)雜的流程帶來(lái)污染等情況的發(fā)生。下面對(duì)幾種菌種保藏方法進(jìn)行簡(jiǎn)要介紹。

2.1 斜面低溫保藏法

該種方法是一種比較常用的保藏法，其主要從操作就是將菌種培養(yǎng)到斜面培養(yǎng)基中，等到菌種覆蓋整個(gè)斜面之后，將其放到溫度為4℃的冰箱中保藏[5]。一定時(shí)間之后對(duì)菌種按照相同的方法進(jìn)行轉(zhuǎn)培養(yǎng)，通過(guò)這種不斷進(jìn)行轉(zhuǎn)培養(yǎng)和保藏的方法進(jìn)行菌種的保藏。這種方法的優(yōu)勢(shì)就是適用于多種菌種的短期保藏，具有操作簡(jiǎn)單、設(shè)備要求低、菌種存活率高的特點(diǎn)。但是這種方法的保存期間只有1～6個(gè)月，不適合需要長(zhǎng)期保藏的菌種，溫度控制在4℃，菌種通常還具有一定的代謝水平，會(huì)降低菌種的活性。同時(shí)，對(duì)菌種進(jìn)行反復(fù)多次的培養(yǎng)，容易導(dǎo)致菌種發(fā)生變異，誘發(fā)感染等[6]。

2.2 石蠟油封藏法

這種方法主要是將培養(yǎng)成熟的菌種斜面，采用已經(jīng)進(jìn)行無(wú)菌處理并且采用蒸發(fā)方式去掉水分的石蠟，將斜面封起來(lái)[7]。保證石蠟層的厚度高出培養(yǎng)斜面頂端大約1 cm，確保培養(yǎng)的菌種與空氣完全的隔絕。封存完畢之后，使用硅膠或者是固體石蠟，將口部封住，將其垂直擺放在溫度為4℃的冰箱中。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)考慮了低溫和阻斷氧氣，從兩個(gè)方面降低了培養(yǎng)菌種的活性，能夠延長(zhǎng)菌種的保存時(shí)間。適合保存年限為1～2年的菌種。

2.3 定期移植法

定期移植法，顧名思義是通過(guò)不斷地傳代培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)保藏的目的，而培養(yǎng)方法包括斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、液體培養(yǎng)（主要針對(duì)厭氧菌）等，根據(jù)不同的菌種的生存特性選擇不同的培養(yǎng)方法，因此該種保藏方法具有普遍的適用性。將菌種接種于適宜的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，一般選擇最適條件培養(yǎng)，避免環(huán)境因素的改變誘發(fā)菌種遺傳物質(zhì)的改變導(dǎo)致性狀改變，待生長(zhǎng)充分后于4～6℃進(jìn)行間隔一定時(shí)間的保存，再進(jìn)行傳代培養(yǎng)，保藏時(shí)間根據(jù)不同菌種或微生物不同而不同。

此類(lèi)保藏方法操作簡(jiǎn)便，便于提取，但需要經(jīng)常移種培養(yǎng)，且培養(yǎng)過(guò)程中微生物和菌種難免與外部環(huán)境接觸因此無(wú)法排除變異的可能，而如果需要長(zhǎng)期保藏，該保藏方法的人力成本較高，因此如果僅僅出于實(shí)驗(yàn)需要或其他特殊需求，短期內(nèi)的保藏可以采取此方法。

3 小結(jié)

本文對(duì)幾種菌種保存方法進(jìn)行了闡述，其中操作最為簡(jiǎn)單和常用的方法為斜面低溫保藏法，保存難度和技術(shù)要求比較高的是冷凍真空干燥保藏方法。隨著操作難度和技術(shù)難度的提升，菌種的保存期限也在不斷的延長(zhǎng)[8]。同時(shí)，每種方法都存在自身的優(yōu)點(diǎn)和不足，在時(shí)間的應(yīng)用過(guò)程中，應(yīng)該針對(duì)不同的菌種保藏目的，選取恰當(dāng)?shù)姆椒ā?/p>

已有的研究成果資料顯示，不同的菌種具有不同特性，在實(shí)際的保藏過(guò)程中，應(yīng)該在充分分析菌種特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，選取恰當(dāng)?shù)姆椒?。比如，?duì)于枯草芽孢桿菌而言，如果傳代培養(yǎng)次數(shù)過(guò)多，就會(huì)使它們變異成光滑型。這種類(lèi)型會(huì)影響桿菌的抗生效果，不能夠滿足實(shí)驗(yàn)的要求；對(duì)于真菌而言，由于其遺傳的穩(wěn)定性，變異難度大，在保藏的過(guò)程中不用考慮特別的要求，沒(méi)有必要進(jìn)行經(jīng)常的傳代，可以采用中長(zhǎng)期的方法進(jìn)行保存。

綜上，在實(shí)際的保藏過(guò)程中應(yīng)該充分的考慮菌種自身的特點(diǎn)、特性以及保存的目的，實(shí)驗(yàn)室的保藏設(shè)備條件等。選恰當(dāng)?shù)谋２胤椒ㄟM(jìn)行保藏，充分保證菌種的活性以及純度，發(fā)揮菌種在微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中的價(jià)值，提高研究的準(zhǔn)確性和可靠性。

[1] 穆婷，封艷艷，宋珉，等． 藥品微生物檢驗(yàn)用菌種保藏方法簡(jiǎn)論[J]． 母嬰世界，2015，3（6）：361-362．

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[3] 劉文麗，程池，姚粟，等． 韓國(guó)食品用微生物菌種管理現(xiàn)狀[J]．食品與發(fā)酵工業(yè)，2015，46（11）：237-242．

[4] 劉春蘭，盧洪生． 藥物生產(chǎn)或檢驗(yàn)用菌種培養(yǎng)中微生物生長(zhǎng)繁殖的影響及控制[J]．北方藥學(xué)，2016，13（3）：149，184．

[5] 陳進(jìn)林，梅承芳，高亮，等． 標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試中不同食物濃度對(duì)大型溞生長(zhǎng)和繁殖的影響[J]． 生態(tài)科學(xué)，2015，34（6）：42-47．

[6] 宋文光，楊建勇，牛曉霞，等． 標(biāo)準(zhǔn)菌種在微生物檢查法中的應(yīng)用 [J]． 機(jī)電信息，2017，17（8）：6-10．

[7] 王一昊． 微生物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)菌種的管理[J]． 醫(yī)藥衛(wèi)生（文摘版），2016，12（6）：124．

[8] 于麗萍，王玉霞，甄濤，等． 黑龍江省微生物菌種保藏中心的現(xiàn)狀及展望[J]．黑龍江科學(xué)，2015，6（13）：17-19．

Discussion on Methods of Bacteria Preservation for Microbiological Examination of Drugs

HAN Yingchen CUI Xuan AN Xianlan GAO Jie Yanbian Institute for Food and Drug Detection, Yanbian Jilin 133000, China

Microbial strains used for microbiological testing have the characteristics of rapid variation, and the preservation is basically to reduce microbial activity and study the preservation methods of different strains. With the difficulty of operation and the increase of technical difficulty, the storage period of bacteria is extended constantly. In this paper, the principle of preservation of microorganisms, the advantages and disadvantages of different methods and their effects were investigated and analyzed. According to the specif i c characteristics of different strains,select the appropriate preservation methods to ensure the preservation effect and achieve the purpose of preservation. Select appropriate preservation methods for preservation, fully guarantee the activity and purity of bacteria,bring into play the value of bacteria in microbiological test, and improve theaccuracy of research.

pharmaceutical microorganism; test bacteria; preservation method

R97

A

1674-9316（2017）20-0104-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．20．054

吉林省延邊州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延邊 133000

崔鉉