基于微衛(wèi)星的胭脂魚養(yǎng)殖群體遺傳多樣性及人工放流監(jiān)測的分析

胡新艷，劉雄軍，周幼楊，吳小平,2，歐陽珊

(1.南昌大學生命科學學院，南昌 330031；2.南昌大學生命科學研究院流域生態(tài)研究所，南昌 330031)

基于微衛(wèi)星的胭脂魚養(yǎng)殖群體遺傳多樣性及人工放流監(jiān)測的分析

胡新艷1，劉雄軍1，周幼楊1，吳小平1,2，歐陽珊1

(1.南昌大學生命科學學院，南昌 330031；2.南昌大學生命科學研究院流域生態(tài)研究所，南昌 330031)

利用13個微衛(wèi)星分子標記研究了我國重慶、江西永豐、江西新干三個胭脂魚(Myxocyprinusasiaticus)繁殖基地子一代群體的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，13個微衛(wèi)星位點均呈現(xiàn)多態(tài)性，等位基因數(shù)目為8～17個，多態(tài)信息含量為0.35～0.84，Shannon多樣性指數(shù)為1.61～1.64，觀測雜合度為0.108 1～0.825 5，期望雜合度為0.384 6～0.856 8，Hard-Weinberg遺傳偏離指數(shù)(D)為-0.718 9～0.072 5，表明三個養(yǎng)殖群體遺傳多樣性均較高。從群體間的遺傳結(jié)構(gòu)看，三個養(yǎng)殖群體間存在遺傳分化，其中江西新干胭脂魚養(yǎng)殖群體內(nèi)具有顯著的遺傳分化。野外采自贛江的5尾胭脂魚的遺傳結(jié)構(gòu)分析推斷其可能來自永豐和新干胭脂魚繁殖基地的子一代個體，其結(jié)果對胭脂魚的人工放流監(jiān)測有指導意義。

微衛(wèi)星；胭脂魚(Myxocyprinusasiaticus)；遺傳多樣性；放流監(jiān)測

胭脂魚(Myxocyprinusasiaticus)，隸屬于鯉形目(Cypriniformes)亞口魚科(Catostomidae)胭脂魚屬(Myxocyprinus)，是亞洲大陸唯一分布的單型屬、種。主要分布于我國的長江和閩江流域[1]。近年來，由于過度捕撈、水域污染，水利工程建設(shè)等影響，胭脂魚資源量急劇下降[2]。目前閩江胭脂魚已絕跡，長江胭脂魚種群的資源也日趨枯竭，同時，長江的胭脂魚可能是現(xiàn)存胭脂魚的唯一野生種群[3-4]。因此，胭脂魚被列入我國二級重點保護動物[5]。

隨著胭脂魚的保護和野生種群資源恢復關(guān)注度的提高，了解養(yǎng)殖和野生的種群資源狀況是必要的。人工增殖放流是維持胭脂魚種群資源的有效途徑，但目前胭脂魚增殖放流效果評估還沒有準確的方法。此外, 增殖放流效果無法得到完整的評估結(jié)果, 同時缺乏增殖放流對野生群體遺傳多樣性和生態(tài)系統(tǒng)平衡的負面影響等的評價內(nèi)容[6]。微衛(wèi)星分子標記符合孟德爾遺傳規(guī)律, 多態(tài)性高且為共顯性遺傳, 是一種極具應(yīng)用價值的遺傳分子標記。在瀕危動物種群特別是保護遺傳學上得到越來越多的應(yīng)用[7], 如微衛(wèi)星遺傳多樣性檢測[8]、個體/家系溯源[9]、遺傳圖譜構(gòu)建[10]等。近年來，國內(nèi)對胭脂魚研究工作較多，但大多數(shù)是關(guān)于在形態(tài)解剖[11]、繁殖育種[12]、細胞遺傳學分析[13]等方面的研究。而利用微衛(wèi)星分子標記分析胭脂魚種群遺傳特性以及評估人工放流檢測效果的研究較少[14-15]。本實驗基于微衛(wèi)星分子標記對長江中下游主要胭脂魚繁殖基地及野生胭脂魚個體的遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)，以期為監(jiān)測其群體遺傳資源的變動水平及利用其優(yōu)良遺傳資源提供指導，為人工放流監(jiān)測提供有效方法。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

胭脂魚幼魚于2015年12月采自重慶萬州胭脂魚原種場和江西新干胭脂魚養(yǎng)殖場子一代各50尾；仔魚于2014年4月采自江西永豐胭脂魚良種場子一代，47尾。2015年7月至10月，采自江西贛江胭脂魚樣本5尾。所有標本取鰭條保存于-80 ℃冰箱中備用。

1.2 方法

1.2.1 基因組DNA提取

取鰭條組織50 mg剪碎，用試劑盒(北京天根生化科技有限公司)提取基因組DNA，分光光度計檢測DNA濃度。

1.2.2 PCR反應(yīng)及產(chǎn)物的檢測

PCR反應(yīng)體系參照成為為等[15，16]，并做了優(yōu)化 。利用13對多態(tài)性微衛(wèi)星標記[16-17]，合成熒光引物(HEX和FAM以及TAMRA)，在合適的退火溫度下進行PCR擴增。PCR引物和熒光引物均由上海生物工程有限公司合成。

PCR擴增產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，并在紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察和拍照。具有目的條帶的PCR產(chǎn)物送上海生物工程公司進行STR檢測，STR分型結(jié)果用GeneMapper v4.0軟件分析。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析

微衛(wèi)星位點的等位基因數(shù)目(Na)、有效等位基因數(shù)目(Ne)、Shannon 多樣性指數(shù)(I)、觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)和Nei’s遺傳距離用POPGENE 1.32軟件計算[18]； PIC-CALC 0.6軟件計算多態(tài)信息含量(PIC)，Cervus3.0軟件計算無效等位基因頻率(F)及檢驗哈迪-溫伯格平衡(HWE)。Hardy-Weinberg 平衡偏離指數(shù)(D)按公式: D=(Ho -He)/He計算[19]。Structure2.3.4軟件計算種群間的遺傳結(jié)構(gòu)并聚類分析[20]。

2 結(jié)果

2.1 微衛(wèi)星位點多態(tài)性分析

對三個養(yǎng)殖群體和江西贛江野生胭脂魚的13個微衛(wèi)星標記分析檢測得到154個等位基因，其中等位基因數(shù)目范圍為8～17個，平均等位基因數(shù)目為12個。等位基因數(shù)目最少的位點為Mas16、 Mas18和Mas34，均為8個；最多的位點為Mas11，檢測到17個；其中Mas6和Mas16的微衛(wèi)星測序圖如圖1。期望雜合度范圍為0.384 6～0.856 8，平均期望雜合度為0.764 1。觀測雜合度范圍為0.108 1～0.825 5，平均觀測雜合度為0.637 8。多態(tài)信息含量(PIC)范圍為0.35～0.84，平均多態(tài)信息含量為0.74。通過Hardy-Weinberg平衡檢測，位點Mas5、Mas13偏離Hardy-Weinberg平衡，位點Mas34、Mas18、Mas43顯著偏離Hardy-Weinberg平衡，其余位點均處于平衡狀態(tài)(表1)。

表1 胭脂魚微衛(wèi)星位點特征Tab.1 Characteristics of microsatellite loci in M.asiaticus

續(xù)表1

注: NS 表示未顯著偏離Hardy-Weinberg 平衡(P>0.05)；*表示顯著偏離Hardy-Weinberg 平衡(P<0.05)；**表示極顯著偏離Hardy-Weinberg 平衡(P<0.01)

圖1 多態(tài)微衛(wèi)星位點Mas6(上)和Mas16(下)Fig.1 Analysis pattern of STR typing for polymorphic SSR locus Mas6 and Mas16 PCR product

2.2 三個胭脂魚養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性分析

三個胭脂魚養(yǎng)殖群體遺傳多樣性分析結(jié)果顯示，新干養(yǎng)殖群體多態(tài)信息含量、平均期望雜合度、Shannon 多樣性指數(shù)以及平均有效等位基因數(shù)最高(PIC=0.73, He=0.77, I=1.64, Ne=4.5)，重慶養(yǎng)殖群體居于中間水平(PIC=0.69, He=0.73, I=1.62, Ne=4.49)，永豐養(yǎng)殖群體最低(PIC=0.62, He=0.66, I=1.41, Ne=3.58)。由此可見，三個養(yǎng)殖群體的平均PIC值具有高度多態(tài)性(PIC>0.5)，遺傳多樣性較豐富，群體的遺傳多樣性水平?jīng)]有明顯差異(表2)。

表2 三個胭脂魚養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性信息Tab.2 Genetic diversity of three M.asiaticus populations

2.3 三個胭脂魚養(yǎng)殖群體遺傳分化

從三個胭脂魚養(yǎng)殖群體遺傳分化系數(shù)(Fst)和基因流(Nm)來看：Mas6、Mas4、Mas13、Mas34、Mas43和Mas11共6個位點的遺傳分化系數(shù)大于0.05，其余位點的遺傳分化系數(shù)均小于0.05，各位點的遺傳分化均值為0.075(表3)。

表3 三個胭脂魚養(yǎng)殖群體在13個微衛(wèi)星位點的遺傳分化系數(shù)與基因流Tab.3 Genetic differentiation coefficient and gene flow of 13 microsatellite loci in the three populations of M.asiaticus

通過Popgene1.32軟件計算3個養(yǎng)殖群體的Nei氏遺傳距離和遺傳相似指數(shù)，結(jié)果顯示，永豐和重慶的胭脂魚養(yǎng)殖群體相似度最高(0.803 4)，遺傳距離最近(0.218 9)，重慶和新干的胭脂魚養(yǎng)殖群體相似度最低(0.690 5)，遺傳距離最遠(0.370 3)(表4)。上述結(jié)果表明，永豐和重慶群體遺傳分化小，新干和重慶群體遺傳分化大。

表4 三個胭脂魚養(yǎng)殖群體的遺傳距離和遺傳相似度指數(shù)Tab.4 Genetic distance and genetic similar index in the three populations of M. asiaticus

注：表中右上角區(qū)為群體間的相似度，左下角區(qū)為群體間的遺傳距離

2.4 微衛(wèi)星標記在胭脂魚人工放流中的應(yīng)用

利用Structure軟件對三個養(yǎng)殖群體和采自贛江的胭脂魚的13個微衛(wèi)星位點遺傳信息進行分析，結(jié)果顯示所有個體分為4 個簇。新干胭脂魚養(yǎng)殖群體Cluster1和Cluster4占了大部分；重慶胭脂魚養(yǎng)殖群體Cluster2占了大部分，永豐胭脂魚養(yǎng)殖群體Cluster3占大部分。表明三個養(yǎng)殖群體的遺傳結(jié)構(gòu)相對獨立，存在較小程度的混雜現(xiàn)象，同時，新干養(yǎng)殖群體內(nèi)遺傳結(jié)構(gòu)分化明顯。野外采集胭脂魚YSC1、YSC2和YH1個體Cluster1和Cluster4占大部分，顯示出與新干養(yǎng)殖群體具有很大相似性，表明遺傳關(guān)系較其它兩個種群關(guān)系近；YXJ1和YH2個體大部分為Cluster3，遺傳信息與重慶胭脂魚養(yǎng)殖群體表現(xiàn)出相似性(圖2)。

3 討論

3.1 三個胭脂魚繁殖基地群體間的遺傳多樣性

雜合度(H)和多態(tài)信息含量(PIC)分別是衡量種群變異程度和位點多態(tài)性的重要指標[21-22]。本研究的三個胭脂魚養(yǎng)殖群體中，平均等位基因數(shù)目和雜合度分別為4.80和0.70，同時，每個基因位點多態(tài)信息含量(PIC)范圍為0.35-0.84，其中12個位點是高度多態(tài)的(PIC>0.5)，位點Mas34則是中度多態(tài)水平(0.25

圖2 基于微衛(wèi)星數(shù)據(jù)的胭脂魚養(yǎng)殖種群遺傳結(jié)構(gòu)圖Fig.2 Population genetic structure of M.asiaticus sampled based on microsatellite analysis.1.新干胭脂魚養(yǎng)殖群體，2.重慶胭脂魚養(yǎng)殖群體，3.永豐胭脂魚養(yǎng)殖群體，4.野外采集胭脂魚YSC1，5.野外采集胭脂魚YSC2，6.野外采集胭脂魚YXJ1，7.野外采集胭脂魚YH1，8.野外采集胭脂魚YH2。

依據(jù)Hardy-Weinberg平衡檢測顯示，5個位點(Mas5、Mas13、Mas34、Mas18、Mas43)偏離HWE平衡，其他位點均符合HWE平衡。由于本次試驗中選擇的樣本主要為人工繁殖子一代群體，并非自然種群，親代的人工選擇可能干擾實驗結(jié)果，導致雜合子過剩或缺失，從而偏離HWE平衡。Hard-Weinberg 遺傳偏離指數(shù)(D)反映了He和Ho二者之間的平衡關(guān)系，D值越接近0，表明基因型分布越接近于平衡狀態(tài)，當D為正時，表明雜合子過剩；反之，雜合子缺失，數(shù)值大小反映過?；蛉笔У某潭萚24]。本研究D值分析顯示，只有Mas11位點為雜合子過剩，其他位點均為雜合子缺失。雜合子過剩現(xiàn)象一般出現(xiàn)在研究對象為相對較小群體，如有限的親本繁殖子代會導致連鎖不平衡現(xiàn)象，從而導致雜合子過剩[25]。雜合子缺失現(xiàn)象主要是由無效等位基因引起的，也可能是由非隨機交配、自然選擇或小種群中的一個或多個因素造成[26]。研究結(jié)果顯示，在胭脂魚養(yǎng)殖群體中，為了防止近交衰退現(xiàn)象，應(yīng)盡量控制家系的遺傳背景。

3.2 三個胭脂魚繁殖群體間遺傳結(jié)構(gòu)

種群間的遺傳變異與基因流是研究物種種群歷史和動態(tài)的重要手段[27]。遺傳分化指數(shù)是衡量群體間遺傳分化程度的重要參數(shù)。Wright[28]認為Fst在0～0.05時，群體間無分化；在0.05～0.15時，群體間中度遺傳分化；在0.15～0.25時，高度遺傳分化；當大于0.25時，表示遺傳分化極大。本研究中，三個胭脂魚養(yǎng)殖群體間的遺傳分化系數(shù)(Fst)均值為0.075，具有中度遺傳分化，其中7.5%的遺傳分化來自種群間，92.5%的遺傳分化來自種群內(nèi)。說明群體間遺傳分化微弱。這可能由于群體分化程度對所在的生態(tài)條件相適應(yīng)的結(jié)果，環(huán)境作用強度及方向大體相同，則會造成各分布區(qū)的種群遺傳分化不顯著；其次是由于重慶和永豐的親本存在部分相互引種現(xiàn)象，導致遺傳分化程度低；同時，胭脂魚養(yǎng)殖群體間地理隔離的時間較短，并未發(fā)生顯著遺傳分化。本研究中，三個胭脂魚養(yǎng)殖群體的基因流(Nm)范圍0.634 5～11.102 7，均值為4.982 5。從Nm值來看，通常Nm大于1，表明群體間的基因流水平高；當Nm小于1時，說明群體可能由于遺傳漂變而發(fā)生分化[29]。由此可見，三個胭脂魚養(yǎng)殖群體間基因交流充分，而Structure分析結(jié)果顯示三個地理種群存在分化，因此歷史上的基因交流沒有制約地理種群間的遺傳分化。

遺傳距離是研究物種遺傳多樣性的基礎(chǔ)，Crawford等[30]指出由微衛(wèi)星得出的遺傳距離更能反映分化時間的長短，能客觀反映品種間的遺傳變異和分化。本研究中，永豐和重慶胭脂魚養(yǎng)殖群體遺傳距離最小為0.218 9。表明重慶與永豐胭脂魚養(yǎng)殖群體具有較近的親緣關(guān)系，這可能與永豐一部分胭脂魚親本是引進重慶胭脂魚親本有關(guān)，由此可見，對于今后的育種，可以考慮將新干胭脂魚繁殖基地的親本與重慶和永豐的親本進行進一步雜交育種，增加群體基因交流，防止近交衰退現(xiàn)象。

Structure聚類分析結(jié)果顯示，三個胭脂魚養(yǎng)殖群體間存在遺傳分化以及少量基因交叉和滲透，推測可能為早期生活的胭脂魚在群體間的自然游動、繁殖所致的基因交流。新干胭脂魚養(yǎng)殖群體遺傳分化最大，可能與新干養(yǎng)殖群體親本的遺傳結(jié)構(gòu)有關(guān)，由于地理的隔離及人工繁殖的影響，從而在新干養(yǎng)殖群體內(nèi)形成兩種相對獨立的遺傳結(jié)構(gòu)。

3.3 人工放流監(jiān)測

五尾野生胭脂魚個體Structure聚類分析顯示，YSC1、YSC2和YH1可能來自于新干胭脂魚繁殖基地群體；YXJ1和YH2雖然與重慶胭脂魚繁殖基地群體具有很大相似性，但因部分永豐胭脂魚親本是由重慶親本引種而來，存在基因交流，同時胭脂魚采集地點和人工放流地點均在贛江，距離較近，而距離重慶放流地點較遠，并且在贛江人工放流工作開展前，歷年文獻中并未在贛江發(fā)現(xiàn)胭脂魚記錄種。因此，推斷YXJ1和YH2個體出自于重慶胭脂魚繁殖基地群體的可能性不大，更可能出自于永豐胭脂魚繁殖基地群體。然而胭脂魚人工放流增殖效果的更有效評估，需要對野外采集個體更加準確追溯其是野生種群還是人工放流群體，對于Structure遺傳結(jié)構(gòu)分析，具有一定局限性，因此，在接下來的人工放流評估工作中，利用微衛(wèi)星分子標記位點的多態(tài)性，構(gòu)建胭脂魚人工養(yǎng)殖群體家系指紋圖譜，依據(jù)親本基因型進行親子鑒定和譜系鑒定識別出該家系的后代，可為今后野外采集到的胭脂魚判斷其母系信息，同時為人工放流的胭脂魚個體追溯到親本提供依據(jù)，對人工放流群體與自然群體進行評價。

由于胭脂魚野生資源日益下降，人工放流工作是恢復和保護野生瀕危物種的有效途徑，因此對其種質(zhì)遺傳資源監(jiān)測，選擇對多變環(huán)境具有更強的適應(yīng)性和生存能力的遺傳多樣性高的群體進行人工放流尤為重要。本次實驗研究結(jié)果表明，三個養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性豐富，對選育優(yōu)質(zhì)苗種進行人工放流的工作具有理論的指導意義。人工放流效果的評估一般采用傳統(tǒng)的標志重捕法，但此方法只限制于數(shù)量少的群體。自2013至2015年漁政局向贛江干流共人工放流15.13萬尾胭脂魚冬片魚種，每年胭脂魚放流量較大，標志重捕法是無法滿足的。分子標記逐漸成為人工增值放流評估的有效手段，微衛(wèi)星能提供精確的遺傳信息，為動物保護管理以及為動物行為生態(tài)學提供依據(jù)。本次研究通過野外采集的胭脂魚個體與三個養(yǎng)殖群體遺傳結(jié)構(gòu)的聚類分析，對人工放流進行了初步監(jiān)測。因此，在未來的胭脂魚保護工作中應(yīng)進一步加強其分子水平監(jiān)測，同時結(jié)合人工傳統(tǒng)方法監(jiān)測，這對胭脂魚人工增殖放流效果評估起到關(guān)鍵作用。

[1]張春光,趙亞輝,康景貴.我國胭脂魚資源現(xiàn)狀及其資源恢復途徑的探討[J].自然資源學報,2000,15(2):155 -159.

[2]吳國犀,劉樂和,王志玲,等.葛洲壩水利樞紐壩下宜昌江段胭脂魚的年齡與生長[J].淡水漁業(yè),1990(2):3-8.

[3]張春光,趙亞輝.長江胭脂魚的洄游問題及水利工程對其資源的影響[J].動物學報,2001,47(5):518-521.

[4]汪 松,樂佩琦,陳宜瑜.中國瀕危動物紅皮書魚：類[M]. 北京:科學出版社,1998.

[5]伍獻文,楊干榮,樂佩琦,等.中國經(jīng)濟動物志-淡水魚類(第二版)[M].北京:科學出版社,1979:32 -33.

[6]梁維波,于深禮.遼寧近海漁場海蜇增殖放流情況回顧與發(fā)展的探討[J].中國水產(chǎn),2007,26(7):72-74.

[7] Raquel G, Teresa A, Susana L, et al. Conservation genetics of the endangered Dorcas gazelle (Gazelladorcasspp.) in Northwestern Africa [J]. Conserv Genet, 2012, 13(4):1003-1015.

[8] Hulak M, Kaspar V, Kohlmann K, et al. Microsatellite-based genetic diversity and differentiation of foreign common carp (Cyprinuscarpio) strains farmed in The Czech Republic [J]. Aquaculture, 2010, 298(3): 194-201.

[9] Borrell Y J, Alvarez J, Blanco G, et al. A parentage study using microsatellite loci in a pilot project for aquaculture of the European anchovy Engraulis encrasicolus L [J]. Aquaculture, 2011, 310(3): 305-311.

[10] Ruan X H, Wang W J, Kong J, et al. Genetic linkage mapping of turbot (ScophthalmusmaximusL.) using microsatellite markers and its application in QTL analysis [J]. Aquaculture, 2010, 308(3): 89-100.

[11]何舜平,樂佩琦,陳宜瑜.鯉形目魚類咽齒形態(tài)及發(fā)育的比較研究[J].動物學報,1997,43(3):255-262.

[12]周劍光,楊德國,吳國犀,等.胭脂魚仔幼魚發(fā)育及苗種培育技術(shù)[J].華中農(nóng)業(yè)大學學報,1999,18(3):263-267.

[13]祝東梅,楊 坤,王衛(wèi)民,等.中國胭脂魚的細胞遺傳學分析[J].中國水產(chǎn)科學,2013,20(3):682-688.

[14]楊 鐘,史 方,闕延福,等.長江胭脂魚人工放流子一代遺傳多樣性初步研究[J].水生態(tài)學雜志,2010,3(5):17-20.

[15]成為為,汪登強,危起偉,等.基于微衛(wèi)星標記對長江中上游胭脂魚增殖放流效果的評估[J].中國水產(chǎn)科學,2014,21(3):574-580.

[16] Cheng W,Wang D,Du H,et al.Isolation and characterization of 23 microsatellite loci in the Chinese sucker(Myxocyprinusasiaticus)[J].Conserv Geneti Resour,2012,5(2):375-377.

[17] Li P, Zhang Y, Peng Z. Development of 34 new microsatellite markers for the endangered Chinese sucker (Myxocyprinusasiaticus) using 454 sequencing [J]. Conserv Genet Resour, 2013, 5(2): 441-444.

[18] Raymond M, Rousset F. GENEPOP (version 1.2): population genetics software for exact tests and ecumenicism[J]. J Hered, 1995, 86(3): 248-249.

[19]王長忠,梁宏偉,鄒桂偉,等.長江中上游兩個鰱群體遺傳變異的微衛(wèi)星分析[J].遺傳,2008,30(10):1341-1348.

[20] Evanno G, Regnaut S, Goudet J. Detecting the number of clusters of individuals using the software structure : a simulation study[J].Mol Ecol, 2005, 14(8): 2611-2620.

[21]李 莉,孫振興,楊樹德,等.用微衛(wèi)星標記分析皺紋盤鮑群體的遺傳變異[J].遺傳,2006,28(12):1549-1554.

[22] Botstein D, White R L, Skolnick M, et al. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms [J]. Am J Hum Genet, 1980, 32(3): 314-331.

[23]季維智,宿 兵.遺傳多樣性研究的原理與方法[M].杭州:浙江科學技術(shù)出版社,1999.

[24] Sophie Hubert D H. Linkage maps of microsatellite DNA markers for the pacific oyster crassostrea gigas [J]. Genetics, 2004, 168(1): 351-362.

[25] Cordeiro G M, Maguire T L, Edwards K J, et al. Optimisation of a microsatellite enrichment technique inSaccharumspp [J]. Plant Mol Biol Rep, 1999, 17(3): 225-229.

[26] Thorpe J P. The molecular clock hypothesis: biochemical evolution, genetic differentiation and systematics [J]. Annual Rev Ecol Systematics, 2003, 13(4): 139-168.

[27] Sunnucks P. Efficient genetic markers for population biology [J]. Trends in Ecology & Evolution, 2000, 15(15): 199-203.

[28] Wright S. Evolution and the genetics of populations [M]. Variability within and among natural populations. Chicago:University of Chicago Press, 1978.

[29] Boivin T, Bouvier J C, Beslay D, et al.Variability in diapause propensity within populations of a temperate insect species: interactions between insecticide resistance genes and photoperiodism [J]. Biol J Linn Soc, 2004, 83(3): 341-351.[30] Crawford A M, Littlepohn R P. The use of DNA marker in deciding conservation priorities in sheep and other livestock [J]. Anim Genet Resour Inf, 1998, 23(1): 21-26.

(責任編輯：張瀟峮)

Genetic diversity of Myxocyprinus asiaticus cultured population based on microsatellite molecular marker and analysis of the artificial release monitoring

HU Xin-yan1, LIU Xiong-jun1, ZHOU You-yang1, WU Xiao-ping1,2, OUYANG Shan1

( 1.SchoolofLifeSciences,NanchangUniversity，Nanchang330031,China; 2.CenterforWatershedEcologyInstituteofLifeScience,NanchangUniversity,Nanchang330031,China)

Study was conducted on genetic diversity and genetic structure of first filial generation based on microsatellite molecular marker for Chongqing, Yongfeng and Xingan breeding bases, China. The results showed that 13 microsatellite loci was polymorphism and the number of allele was 8～16. The range of PIC, Shannon diversity index, observed heterozygosity, expected heterozygosity, Hard-Weinberg genetic deviation index were 0.35～0.84, 1.61～1.64, 0.108 1～0.825 5, 0.384 6～0.856 8, 0.718 9～0.072 5, respectively. The results indicated three cultured population had higher genetic diversity. Genetic structure of population analysis showed that the three populations had genetic divergence, and cultured population in the Xingan city was conspicuous. Analysis of genetic structure of 5 samples collected from the Ganjiang River inferred that they come from the first filial generation in Yongfeng and Xingan breeding base, and the result provided basis for artificial releasing monitoring.

microsatellite;Myxocyprinusasiaticus; genetic diversity; releasing monitoring

2016-06-04；

2016-09-08

江西省科技重點項目(12003890)；贛鄱英才“555”工程領(lǐng)軍人才培養(yǎng)計劃(18000041)；科技基礎(chǔ)性工作專項“羅霄山脈地區(qū)生物多樣性綜合科學考察”(2013FY111500)

胡新艷, (1991- ),女,碩士,專業(yè)方向為水生生物學。E-mail: huxinyan1234@163.com

歐陽珊。E-mail: ouys1963@qq.com

S917.4

A

1000-6907-(2017)01-0035-07