止咳化痰片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李乃智

摘 要：為了確定止咳化痰片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)選取已上市的止咳化痰片，在此選樣中，其主要的成分有遠(yuǎn)志、桔梗、貝母、甘草、半夏、連翹等，在此研究中將利用薄層色譜法對(duì)選樣配方中的幾種藥材進(jìn)行鑒別，并通過(guò)高效液相色譜法對(duì)藥材中的橙皮苷的含量進(jìn)行數(shù)據(jù)測(cè)定，利用檢測(cè)結(jié)果中的內(nèi)線性、平均回收率及RSD來(lái)制定較為準(zhǔn)確的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而控制止咳化痰片的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：止咳化痰片；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法

現(xiàn)利用TLC及HPLC對(duì)止咳化痰片中的半夏、連翹、甘草進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)藥材中橙皮苷的含量進(jìn)行準(zhǔn)確的測(cè)定，以下是止咳化痰片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的詳細(xì)方法。

一、儀器與試藥

在實(shí)驗(yàn)中采用的儀器有Agilent1100型號(hào)高效液相色譜儀、定量毛細(xì)管、超聲波清洗器。選用已上市的某止咳化痰片作為實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品，并選取半夏、連翹、甘草所用的對(duì)照藥材，確定藥材通過(guò)國(guó)家藥品檢定標(biāo)準(zhǔn)。準(zhǔn)備硅膠G、硅膠GF254、重蒸水、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

二、方法與結(jié)果

1、薄層鑒別

（1）半夏

首先取樣止咳化痰片5片，研磨至細(xì)粉狀，向選樣中加入15ml甲醇溶液，進(jìn)行超聲處理，20min后進(jìn)行過(guò)濾，對(duì)過(guò)濾后的溶液進(jìn)行蒸干處理，對(duì)蒸干所得殘?jiān)尤?5ml水，保證其得到充分溶解，之后利用乙醚進(jìn)行提取工作，共兩次，每次加如乙醚溶液10ml進(jìn)行振搖提取，析離出的乙醚層棄用，水層用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，分取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液A；氫氧化鈉溶液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值為1—2，再用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次10ml，分取正丁醇層，用水洗滌2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液B。另取半夏對(duì)照藥材1g，加甲醇20ml，超聲處理30min，作為對(duì)照藥材溶液。吸取供試品溶液A1—5μL，對(duì)照藥材溶液2μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸（5：1：0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴磷鉬酸試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，至少顯1個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)。

（2）甘草

首先選用半夏試驗(yàn)中所得供試品溶液B作為甘草試驗(yàn)中的供試品。取用甘草對(duì)照藥材1g，向其中加入8ml甲醇溶液，對(duì)溶液進(jìn)行10min的超聲處理，在超聲處理后對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾，處理后的濾液作為對(duì)照溶液進(jìn)行試驗(yàn)。吸取供試品溶液B2—5μl，對(duì)照藥材溶液3μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（5：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)。

（3）連翹苷

選用半夏試驗(yàn)中所得供試品溶液A作為連翹實(shí)驗(yàn)中的供試品。取用連翹對(duì)照藥材0.5g，向其中加入甲醇溶液，保證所制成的對(duì)照溶液每1ml中含有連翹苷1mg，作為對(duì)照品溶液備用。吸取供試品溶液A10—15μl、對(duì)照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（13：2：0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2、含量測(cè)定

（1）色譜條件

色譜柱：WatersSymmetryC18色譜柱（4.6mm×150mm，5μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（20：80），流速為1.0ml/min；理論板數(shù)以橙皮苷峰計(jì)不低于2000。

（2）對(duì)照品溶液制備

首先需選用適量的橙皮苷對(duì)照品，并對(duì)對(duì)照品的含量進(jìn)行精準(zhǔn)的稱量，之后向其中加入標(biāo)準(zhǔn)為70%的甲醇溶液，制成每1ml含有橙皮苷17μg的溶液，并進(jìn)行搖勻處理。

（3）供試品溶液制備

精細(xì)稱量止咳化痰片并進(jìn)行研磨，準(zhǔn)確取用0.5g樣品，向其中加入甲醇溶液并進(jìn)行超聲處理，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，上聚酰胺柱吸附，水10ml沖洗，棄去；再用30ml30%甲醇洗脫至50ml量瓶中，用30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm濾膜過(guò)濾，即得。

（4）檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

對(duì)橙皮苷對(duì)照品溶液進(jìn)行光譜檢測(cè)，可見(jiàn)283nm處均有最大吸收，所以選擇283nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取濃度為17.98μg/ml橙皮苷對(duì)照品溶液5，10，20μl和濃度為107.88μg/ml對(duì)照品溶液10，15μl注入高效液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程：Y=1.8252X-14.6831，r=0.99998，表明橙皮苷進(jìn)樣量在89.9—1618.2ng內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

（6）穩(wěn)定性

吸取供試品溶液，于0，2，6，12，22h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果供試品峰面積的RSD為0.11%，說(shuō)明22h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

（7）回收率

采用加樣回收試驗(yàn)，取同一批樣品9份，分3組，分別加入高、中、低3種濃度的橙皮苷對(duì)照品溶液，按“（3）”項(xiàng)下方法處理后，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果橙皮苷的平均回收率為97.86%，RSD為1.30%（n=9），結(jié)果見(jiàn)表1。