杜俊潮+程建明+劉睿+王欣之+張倩+張文英+吳皓

[摘要]該文通過(guò)研究各輔料對(duì)提取物的吸濕性影響，對(duì)制劑內(nèi)多糖測(cè)定的干擾以及對(duì)小鼠血糖值的影響篩選了輔料種類，采用單因素試驗(yàn)法，以吸濕性，成型性和流動(dòng)性為指標(biāo)，測(cè)定了吸濕量，顆粒得率以及休止角，結(jié)合物料外觀性狀，篩選了輔料配比及用量，并測(cè)定了顆粒的相對(duì)臨界濕度。優(yōu)選的銀桑降糖顆粒最佳輔料為桑葉清膏微晶纖維素四角蛤蜊粗多糖10∶9∶167，所得顆粒成型性，流動(dòng)性好，且不易吸潮液化，其相對(duì)臨界濕度為73%。經(jīng)研究?jī)?yōu)選所得銀桑降糖顆粒制劑工藝和處方科學(xué)可行，可以明顯改善提取物易吸濕液化的性質(zhì)，提高制劑穩(wěn)定性，適合工業(yè)化生產(chǎn)，并為其他制劑篩選輔料提供借鑒。

[關(guān)鍵詞]銀桑降糖顆粒； 輔料； 吸濕性； 液化

Optimize excipients for Yinsang hypoglycemic granules by using multiple indexes

DU Junchao1，2， CHENG Jianming1，2， LIU Rui1，2， WANG Xinzhi1，2， ZHANG Qian1，2， ZHANG Wenying1，2， WU Hao1，2*

（1Jiangsu Key Laboratory of Research and Development in Marine Bioresoure Pharmaceutics， Nanjing University of

Chinese Medicine， Nanjing 210023， China；

2Jiangsu Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization， Nanjing 210023， China）

[Abstract]Optimal excipients were screened by studying the effect of different excipients on the hygroscopicity of the extract， testing polysaccharide in the preparation and blood glucose value Single factor tests were performed with hygroscopicity， formability and fluidity as the indexes， and the moisture content， granule yield and angle of repose were combined with physical characters of the materials to screen the proportioning and dosage of excipients Then the critical relative humidity of preferred Yinsang granules were measured The optimum excipients for Yinsang hypoglycemic granules were mulberry leaf pastemicrocrystalline cellulosemactra veneriformis crude polysaccharides （10∶9∶167） The obtained granules had good formability and fluidity， which were not easy to absorb moisture for liquefaction， with a critical relative humidity of 73% This formation process was reasonable and feasible， suitable for industrial production， which can significantly improve hygroscopicity and liquefaction properties of extracts， improve stability of Yinsang granules， and provide reference for screening of excipients for other preparations

[Key words]Yinsang granules； excipients； hygroscopicity； liquefaction

桑葉做為藥食兩用品，自古就有治療糖尿病的記載，如《本草備要》[1]中：桑葉“代茶止消渴”?，F(xiàn)代研究表明其降糖活性成分為生物堿類和黃酮類物質(zhì)[2]。銀桑降糖顆粒是基于傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論，將具有降血糖活性的海洋中藥四角蛤蜊粗多糖[3]與桑葉提取物[4]進(jìn)行配伍，制成用于治療糖尿病的新藥，目標(biāo)劑型定為顆粒劑，其中間體的制備工藝和配伍比例已經(jīng)確定，前期考察了不同干燥方式，發(fā)現(xiàn)桑葉提取物表面易形成膜化物，遇熱即軟很難干燥，干燥后提取物容易吸潮發(fā)黏液化，不易粉碎，不適用干浸膏粉和輔料混合制粒，故考慮采用清膏加輔料得軟材制粒法，由于該制劑是含有多糖用來(lái)治療糖尿病的藥物，因此輔料需要滿足幾個(gè)條件：①能防止提取物吸潮液化；②不對(duì)血糖值產(chǎn)生影響；③不干擾多糖含量的測(cè)定。由于制劑中多糖加入量相對(duì)較少，且吸潮液化主要是由于桑葉提取引起，故先通過(guò)考察各輔料對(duì)桑葉提取物吸濕性影響，以及各輔料對(duì)多糖含量測(cè)定的干擾篩選出備選輔料，再對(duì)其是否影響血糖值進(jìn)行研究，進(jìn)一步考察制劑中輔料比例及用量，并對(duì)最終所得顆粒的相對(duì)臨界濕度進(jìn)行測(cè)定以驗(yàn)證制劑工藝。

1材料

桑葉（安徽協(xié)和城中藥飲片，批號(hào)2015040801），經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)吳啟南教授鑒定為?？浦参锷orus alba L的干燥葉，符合《中國(guó)藥典》2015年版一部桑葉項(xiàng)下規(guī)定。四角蛤蜊粗多糖（課題組在江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司中試所得，批號(hào)20141028）?？扇苄缘矸郏ㄎ麟]化工股份有限公司）。微晶纖維素，糊精，乳糖，β環(huán)糊精（上海瑞永生物科技有限公司）。甘露醇，聚維酮K30（國(guó)藥集團(tuán)工業(yè)股份有限公司）。ICR小鼠（上海杰斯捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司），動(dòng)物許可證SCXK（滬）20130006，合格證編號(hào)2010002609331。其余試劑均為分析級(jí)。

2方法與結(jié)果

21桑葉清膏的制備

稱取桑葉（切碎），先醇提，再水提，分別濾過(guò)[5]。濃縮液合并至含有生藥濃度08 g·mL-1，加入乙醇使得含醇量達(dá)到80%，靜置24 h，抽濾得醇沉上清，60 ℃減壓濃縮至一定相對(duì)密度136（50 ℃），得桑葉提取物清膏。

22輔料對(duì)提取物吸濕性影響

221樣品制備取桑葉清膏（相對(duì)密度136，50 ℃）7份，每份5 g，按照清膏輔料1∶1，加入甘露醇，乳糖，聚維酮，可溶性淀粉，β環(huán)糊精，糊精，微晶纖維素?cái)噭?，?0 ℃鼓風(fēng)干燥，粉碎過(guò)80目篩網(wǎng)，得提取物粉末，置于干燥器內(nèi)。

222吸濕率的測(cè)定取約2 g 粉末平攤于干燥至恒重的稱量瓶中。將底部盛有過(guò)飽和氯化鈉溶液的干燥器在25 ℃放置24 h，使其內(nèi)部相對(duì)濕度為75%。將裝有樣品的稱量瓶精密稱重后置于干燥器中（稱量瓶蓋打開），于05，1，2，4，6，8，10，18，24 h后精確稱量瓶與藥物的質(zhì)量，平行做2 份，按下式計(jì)算吸濕率，取均值。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸濕率為縱坐標(biāo)繪制吸濕曲線。記錄各粉末性狀，吸濕率=（吸濕后藥粉質(zhì)量-吸濕前藥粉質(zhì)量）/吸濕前藥粉質(zhì)量×100%。

223數(shù)據(jù)處理對(duì)各樣品的吸濕時(shí)間曲線進(jìn)行二項(xiàng)式回歸處理，得到吸濕二項(xiàng)式方程y=ax2+bx+c，x為時(shí)間，y為吸濕率，求導(dǎo)可得吸濕速率方程r=dy/dx=2ax+b，對(duì)r求導(dǎo)可得吸濕加速度，r′=dr/dx=2a。x為時(shí)間，r為吸濕速度，r′為吸濕加速度，b為吸濕初速度，abc均為常數(shù)[6]。對(duì)不同輔料與藥物混合后的吸濕曲線回歸處理，見(jiàn)圖1，并記錄藥物的外觀變化，見(jiàn)表1。

224輔料對(duì)桑葉提取物吸濕性的影響由表1可以看出各輔料均能降低桑葉提取物的吸濕初速度和吸濕率，各樣品吸濕率大小排序?yàn)樯Ｈ~提取物>糊精>（β環(huán)糊精≥PVP≥微晶纖維素≥可溶性淀粉）>甘露醇>乳糖，從吸濕后各樣品外觀性狀上看，桑葉提取物和加乳糖的樣品會(huì)發(fā)生完全液化，加入糊精和微晶纖維素的樣品未發(fā)生液化，其他樣品發(fā)生部分液化。

23輔料對(duì)多糖含量測(cè)定的影響

231供試品制備取各輔料（甘露醇，乳糖，聚維酮，可溶性淀粉，β環(huán)糊精，糊精，微晶纖維素）及其四角蛤蜊多糖樣品01 g，加80%乙醇，超聲40 min，70 ℃水浴加熱40 min，離心，沉淀用100 mL水復(fù)溶，先后超聲40 min，70 ℃水浴加熱40 min，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，吸取續(xù)濾液3 mL置10 mL量瓶，用水定

232多糖含量測(cè)定精密量取供試品溶液10 mL置10 mL具塞試管中，以蒸餾水作為空白對(duì)照，精密加入02%蒽酮硫酸溶液4 mL，搖勻，放入冰浴中，待各管加入完畢后一起置沸水浴中加熱15 min，取出，放入冰浴中冷卻10 min，在625 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度[7]。

233輔料對(duì)多糖的測(cè)定干擾試驗(yàn)可溶性淀粉，β環(huán)糊精，糊精均會(huì)對(duì)多糖測(cè)定產(chǎn)生干擾，而乳糖，聚維酮，甘露醇不參與蒽酮硫酸反應(yīng)，對(duì)糖測(cè)定無(wú)干擾，微晶纖維素的干擾很小，見(jiàn)表2。

24輔料對(duì)正常小鼠血糖的影響

前期研究發(fā)現(xiàn)聚維酮黏性很大，且常作于黏合劑，而乳糖容易液化，黏性大，綜合考慮優(yōu)選出甘露醇和微晶纖維素2種輔料，且需考察2種備選輔料對(duì)血糖值是否有顯著性影響，因此需要對(duì)灌胃各輔料后的小鼠進(jìn)行血糖測(cè)定。取ICR小鼠40只，隨機(jī)分成4組，每組10只，分別為空白組，葡萄糖組，甘露醇組，微晶纖維素組。各組小鼠隔夜禁食12 h，斷尾取血測(cè)定空腹血糖，以每10 g 01 mL的給藥容積灌胃。其中，葡萄糖組，甘露醇組，微晶纖維素組灌胃劑量均為4 g·kg-1，空白組灌胃03%羧甲基纖維素鈉溶液，測(cè)定灌胃后30，60，90 min的血糖值。結(jié)果見(jiàn)表3，正常小鼠灌胃甘露醇和微晶纖維素后，其血糖值與正常組相比無(wú)顯著性差異，表明甘露醇和微晶纖維素不影響正常小鼠血糖。

25輔料比例篩選

251顆粒得率測(cè)定取清膏5分，每份10 g，均加入167 g四角蛤蜊粗多糖，并分別按照下表加入輔料，混勻，直接制軟材，過(guò)篩制粒，并記錄軟材性狀。所得顆粒經(jīng)50 ℃干燥，用雙篩法（通過(guò)1號(hào)篩不通過(guò)5號(hào)篩）整粒得干顆粒，測(cè)定質(zhì)量。計(jì)算顆

粒得率=整理后顆粒質(zhì)量/制粒前各物料總質(zhì)量×100%（清膏中固體含量為075 g·g-1）。

252休止角的測(cè)定取樣品顆粒，采用固體漏斗法，將3只漏斗串聯(lián)且固定在水平放置的坐標(biāo)紙上約1 cm處，小心將顆粒沿漏斗壁倒入最上端的漏斗口中，直到下方坐標(biāo)紙形成的顆粒椎體尖端接觸到漏斗為止，記錄圓錐底部直徑2R，計(jì)算休止角α=arctg（H/R），每份樣品測(cè)定5次，取平均值[8]。

253吸濕率的測(cè)定方法同222，于48 h后計(jì)算吸濕率并記錄外觀性狀。

254輔料比例的篩選A，B組難以制粒，C，D，E組制得顆粒流動(dòng)性均較好，各組吸濕率相近，D，E組成型性好，D組的顆粒得率雖然較E組高，但其軟材和顆粒性狀不及E組，且E組為單一輔料方便生產(chǎn)，具有降低輔料用量的空間，見(jiàn)表4，因此綜合考慮選用單一輔料微晶纖維素，并進(jìn)一步進(jìn)行輔料量的考察。

26輔料用量篩選

取5份清膏，每份10 g，均加入167 g四角蛤蜊粗多糖，（僅僅以清膏為研究對(duì)象不能反映銀桑降糖顆粒制劑的輔料比例）并分別按照下表加入輔料，混勻，直接制軟材，過(guò)篩制粒，干燥，整粒得干顆粒。同25中方法記錄測(cè)定軟材性狀，顆粒得率，吸濕量，粉末性狀，休止角等。結(jié)果見(jiàn)表5，隨著輔料用量的增加，吸濕率不斷增加，休止角呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，顆粒得率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，即在在料輔比為10∶9時(shí)，各指標(biāo)均達(dá)到較高值，且吸濕率較低，軟材狀態(tài)，顆粒流動(dòng)性都較好。

27臨界相對(duì)濕度的測(cè)定

取清膏20 g以優(yōu)選的輔料用量比制得顆粒，取7 份，每份約20 g，平攤于干燥至恒重的稱量瓶中，置于裝有二氧化硅的干燥器中24 h 以上脫濕平衡，備用。將分別放置于盛有MgCl2，K2CO3，NaBr，KI，NaCl，KCl，Na2 HPO4飽和溶液的干燥器密封放置24 h使其達(dá)到平衡。將7份顆粒置于各干燥器中于25 ℃ 下保存7 d，取出稱量瓶，精密稱定，計(jì)算相對(duì)濕度（RH），吸濕率[9]，結(jié)果見(jiàn)表6，以吸濕率為縱坐標(biāo)，相對(duì)濕度為橫坐標(biāo)作圖，計(jì)算為臨界相對(duì)濕度（CRH），結(jié)果見(jiàn)圖3，顯示銀桑降糖顆粒的相對(duì)臨界濕度為73%，且顆粒未發(fā)生液化。

3討論

本實(shí)驗(yàn)考察了不同輔料對(duì)桑葉提取物吸濕性的

影響，發(fā)現(xiàn)甘露醇，乳糖，聚維酮，可溶性淀粉，β環(huán)糊精，糊精，微晶纖維素均能降低其吸濕性，并結(jié)合各輔料對(duì)多糖測(cè)定干擾的影響，綜合考慮微晶纖維素，甘露醇可以作為備選輔料，且研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)血糖值無(wú)影響，之后對(duì)輔料比例及用量進(jìn)行了考察，選擇微晶纖維素為主要輔料，最終銀桑降糖顆粒各輔料用量比為桑葉清膏微晶纖維素四角蛤蜊粗多糖10∶9∶167。所得顆粒CRH為73%，能夠防潮防液化且成型性較好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

研究表明，加入可溶性淀粉等大分子輔料，明顯可以防止桑葉其吸潮液化，其機(jī)制可能是能大大提高了體系CRH[10]，且使得物料體系T[11]g、潤(rùn)濕點(diǎn)大于室溫，避免發(fā)黏和液化的發(fā)生。另外，乳糖和甘露醇雖能有效降低吸濕率，但易液化，因此，在篩選輔料的過(guò)程中，若提取物只是易吸潮、可選用乳糖，甘露醇等作為輔料；若兼有吸潮液化，則需選用糊精等大分子輔料防止其潤(rùn)濕和玻璃化溫度轉(zhuǎn)變。另外，研究結(jié)果還表明，以多糖為主要成分提取物在篩選輔料時(shí)應(yīng)選用甘露醇，乳糖，聚維酮和微晶纖維素等輔料，以避免后期干擾多糖測(cè)定。本品在篩選防潮防液化輔料的同時(shí)，兼顧輔料對(duì)多糖含量測(cè)定的影響以及顆粒劑的無(wú)糖型原則，具有一定科學(xué)合理性，不僅銀桑降糖顆粒產(chǎn)品開發(fā)提供了指導(dǎo)，還可以為其他顆粒劑研究與開發(fā)提供借鑒和參考。

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[責(zé)任編輯孔晶晶]

[收稿日期]20161013

[基金項(xiàng)目]國(guó)家海洋公益性行業(yè)專項(xiàng)（201305007，201405017）；國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃（863）項(xiàng)目（2013AA093003）；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（PAPD）；江蘇省“青藍(lán)工程”項(xiàng)目；江蘇省“333工程”項(xiàng)目

[通信作者]*吳皓，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥炮制學(xué)及海洋藥物研究，Tel：（025）85811206，Email：whao5795@vipsinacom

[作者簡(jiǎn)介]杜俊潮，碩士研究生，主要從事中藥炮制學(xué)及海洋中藥學(xué)研究，Tel：15895973673，Email：493410820@qqcom