蘇鈺琴

摘要 切取五指毛桃0.2 mm莖尖作為外植體，研究其科學(xué)合理的種苗繁育體系。結(jié)果表明：最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL+蔗糖30 g/L+瓊脂5 g/L，誘導(dǎo)率為55%；最佳增殖培養(yǎng)基為MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.2 mg/mL+蔗糖30 g/L+瓊脂5 g/L，增殖倍數(shù)為4.8倍；最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.25 mg/mL+活性炭0.3 g/L，生根率為95%。

關(guān)鍵詞 五指毛桃；莖尖；組織培養(yǎng)；培養(yǎng)基

中圖分類(lèi)號(hào) S662.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）03-0063-01

五指毛桃原植物為?？迫~榕Ficus hirta Vahl，又名五爪龍、五指牛奶、土北芪等，分布于我國(guó)西南部至東南部。其味辛、甘，性平，主治脾虛浮腫，食少無(wú)力，肺癆咳嗽，盜汗，帶下，產(chǎn)后無(wú)乳，風(fēng)濕痹痛，水腫，肝硬化腹水，肝炎，跌打損傷[1-2]?，F(xiàn)代研究表明：五指毛桃水提物具有消化系統(tǒng)保護(hù)作用、平滑肌調(diào)節(jié)作用、抗氧化作用、殺菌抗炎作用，還能提高免疫功能[3-4]。五指毛桃還是藥食同源的珍品，具有平肝明目，滋陰降火，健脾開(kāi)胃，益氣生津，祛濕化滯，清肝潤(rùn)肺等作用。五指毛桃始載于清朝《生草藥性備要》，是一個(gè)多民族使用的民間草藥，瑤、傣、侗、壯、黎、哈尼、景頗等多個(gè)民族的民間藥書(shū)中都有記載。隨著現(xiàn)代人們生活水平的提高，保健意識(shí)增強(qiáng)，市場(chǎng)對(duì)五指毛桃藥材及深加工產(chǎn)品的需求量與日俱增，年用量超過(guò) 1萬(wàn)t。

五指毛桃市場(chǎng)供應(yīng)基本依靠采挖野生資源。由于農(nóng)民掠奪式的采挖，同時(shí)其自然繁殖能力弱，致使野生資源越來(lái)越少。五指毛桃為小灌木，分枝少，單株藥材產(chǎn)量低，需要高密度種植才能取得較高的經(jīng)濟(jì)效益，用種量2.7萬(wàn)株/hm2，若種苗的價(jià)格過(guò)高，容易造成投資大于產(chǎn)出，這是人工種植至今無(wú)法順利開(kāi)展的主要原因。因此，培育出高性價(jià)比的種苗，是開(kāi)展五指毛桃規(guī)?；斯しN植的關(guān)鍵。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

材料來(lái)自桂林亦元現(xiàn)代技術(shù)有限公司建立在興安漠川鄉(xiāng)的種源基地。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體處理。選擇連續(xù)3 d晴天的上午，采集健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的當(dāng)年生頂芽作為外植體。去掉葉片，剪成3～5 cm，放置滅菌瓶中，用流動(dòng)水沖洗15 min。在超凈工作臺(tái)上，用75%酒精浸泡消毒30 s，再用0.1%升汞浸泡滅菌6～8 min，用無(wú)菌水沖洗4～6次，備用[5]。

1.2.2 初代培養(yǎng)。在顯微鏡上用頂芽切取0.2 mm的莖尖，轉(zhuǎn)接到初代培養(yǎng)基中：MS+BA 0.3～1.1 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL、MS+KT 0.5 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL，以外植體出芽時(shí)間、出芽率為指標(biāo)，篩選出最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

1.2.3 繼代培養(yǎng)。將初代誘導(dǎo)出的叢生芽剪切成單芽或帶腋芽的莖段，轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中MS+BA 0.5～0.8 mg/mL+NAA 0.1～0.3 mg/mL。培養(yǎng)1個(gè)月后記錄苗的生長(zhǎng)情況和增殖倍數(shù)，篩選出最佳的繼代增殖培養(yǎng)基[6]。

1.2.4 生根培養(yǎng)。將繼代苗剪成單芽或帶腋芽的莖段，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中1/2MS+NAA 0.25～1.00 mg/mL，每組處理20瓶，每瓶轉(zhuǎn)接15株，培養(yǎng)1個(gè)月后記錄苗的生長(zhǎng)情況、生根數(shù)量、生根的質(zhì)量，篩選出最佳的生根培養(yǎng)基。

以上培養(yǎng)基均添加3%蔗糖，瓊脂5 g/L，pH值5.8～6.0；生根培養(yǎng)基另外還添加活性炭3 g/L。培養(yǎng)溫度為（25±2） ℃，光照強(qiáng)度1 800～2 000 lx，光照時(shí)間10 h/d；另外，生根培養(yǎng)先暗培養(yǎng)5～7 d后進(jìn)行光照培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同初代培養(yǎng)基對(duì)五指毛桃萌芽的影響

切取莖尖接到初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，5 d左右開(kāi)始膨大，20 d后變綠色，長(zhǎng)叢生芽。從表1可以看出，在BA、KT濃度相同的情況下，BA的誘導(dǎo)率比KT高，效果較好；當(dāng)BA濃度為0.3～0.5 mg/mL時(shí)，誘導(dǎo)率隨著濃度的增加而增加，且苗生長(zhǎng)正常；當(dāng)BA濃度為0.8～1.1 mg/mL時(shí)，誘導(dǎo)率隨著濃度的增加而降低，外植體愈傷較大，且苗有玻璃化、褐化。因此，最佳的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL。

2.2 不同繼代培養(yǎng)基對(duì)五指毛桃增殖的影響

從表2可以看出，在濃度為BA 0.5 mg/mL時(shí)，隨著 NAA用量的增加，倍數(shù)也增加，但當(dāng)NAA濃度達(dá)到0.3 mg/mL，苗開(kāi)始出現(xiàn)玻璃化。在濃度為BA 0.8 mg/mL時(shí)，隨著NAA用量的增加，增殖倍數(shù)反而降低。因此，最佳的增殖繼代培養(yǎng)基是MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.2 mg/mL。

2.3 不同生根培養(yǎng)基對(duì)五指毛桃生根的影響

從表3可以看出，培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.25 mg/mL生根率較高，基部愈傷小，根條數(shù)、須根多，后期移栽容易成活；培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.5 mg/mL生根率最高，但是生根苗的基部愈傷大，須根少，移栽時(shí)成活率低；培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.75 mg/mL、1/2MS+NAA 1.0 mg/mL NAA用量高，導(dǎo)致苗生根率低、根少，且不長(zhǎng)須根，后期移栽成活率低。因此，最佳的生根培養(yǎng)基是1/2MS+NAA 0.25 mg/mL，生根率為95%。

3 結(jié)論與討論

五指毛桃表面帶有絨毛，植株多漿。用莖段作為外植體滅菌較難，污染率高，培養(yǎng)過(guò)程中，容易褐化。本試驗(yàn)采用莖尖進(jìn)行誘導(dǎo)，減少污染、褐化，容易誘導(dǎo)叢生芽。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類(lèi)和質(zhì)量濃度對(duì)五指毛桃的誘導(dǎo)、分化和生根有較大影響。初代對(duì)BA、KT進(jìn)行篩選，結(jié)果表明BA作用較好；在增殖培養(yǎng)中，選用BA、NAA進(jìn)行組合搭配試驗(yàn)，篩選出了最佳的搭配組合為MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.2 mg/mL，增殖倍數(shù)為4.8倍；最佳的生根配養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.25 mg/mL，生根率為95%。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M]上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：29.

[2] （中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1977：90-91.

[3] 王偉偉，陳瑤.五指毛桃的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2013（3）：41.

[4] 歲騫，席萍，廖雪珍，等.五指毛桃水煎液的藥理安全性實(shí)驗(yàn)[J].今日藥學(xué)，2009（2）：12-13.

[5] 河源市金源綠色生命有限公司.一種五指毛桃規(guī)范化產(chǎn)業(yè)化種子繁殖的種植方法：中國(guó)，200410051711.8[P].2006-04-05.

[6] 李林軒，吳慶華，蔡錦源，等.五指毛桃組織培養(yǎng)獲得再生植株的研究[J].中草藥，2014，45（17）：2547-2551.