張穎++徐軍++陸羅定++劉協(xié)

摘要：為研究楊梅提取物緩解體力疲勞作用，經(jīng)口給予健康ICR小鼠0、85、170、510 mg/kg劑量的楊梅提取物 32 d 后，分別進(jìn)行負(fù)重游泳試驗(yàn)、肝糖原測定、血乳酸測定和血清尿素氮測定。結(jié)果顯示，高劑量組小鼠游泳時(shí)間比對照組極顯著延長（P<0.01）；高劑量組小鼠運(yùn)動(dòng)后血清尿素氮值極顯著低于對照組（P<0.01）；高劑量組小鼠肝糖原含量極顯著高于對照組（P<0.01）；中、高劑量組小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸變化值與對照組小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸變化值比較均具有顯著性差異（P<0.01）。表明楊梅提取物在本試驗(yàn)條件下具有緩解體力疲勞作用。

關(guān)鍵詞：楊梅提取物；緩解體力疲勞；小鼠

中圖分類號： R284.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2016）12-0290-02

收稿日期：2016-04-12

作者簡介：張穎（1979—），女，江蘇句容人，碩士，副主任技師，主要從事衛(wèi)生毒理學(xué)研究。E-mail：694763830@qq.com。

通信作者：劉協(xié)，主任醫(yī)師，主要從事衛(wèi)生毒理學(xué)研究。Tel：（025）83759444；E-mail：865778939@qq.com。

楊梅（Myrica rubra）是中國南方特有水果之一，主產(chǎn)區(qū)在浙江、江蘇、福建等長江流域以南地區(qū)。楊梅果實(shí)色澤鮮艷、風(fēng)味獨(dú)特、柔軟多汁、營養(yǎng)豐富，適合加工果汁和果酒等產(chǎn)品，備受消費(fèi)者青睞。為促進(jìn)楊梅產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，人們已逐漸對楊梅進(jìn)行深度開發(fā)。目前已有關(guān)于楊梅提取物抗氧化、抗腹瀉、抑菌抗菌等方面的研究，但其抗疲勞作用少見報(bào)道[1-5]。本研究通過小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)，測定血清尿素氮、肝糖原含量和血乳酸變化值，檢驗(yàn)楊梅提取物緩解體力疲勞的功效，以期為楊梅保健功能的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物雄性健康ICR小鼠，清潔級，體質(zhì)量 18.0～22.0 g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2012-0002號。試驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證號：SYXK（蘇）2012-0037。試驗(yàn)期間全部動(dòng)物給予清潔級全價(jià)鼠顆粒飼料和滅菌水自由食用。

1.1.2受試物楊梅提取物是以楊梅成熟果實(shí)為原料，用乙醇溶液提取，經(jīng)食品工業(yè)用吸附樹脂純化、濃縮、干燥后制得，由某研發(fā)有限公司提供。

1.1.3儀器與試劑游泳箱，電子天平，TU1810型分光光度計(jì)，SBA-40E型全自動(dòng)生物傳感分析儀（乳酸儀），奧林巴斯AU640全自動(dòng)生化分析儀，JY92-II 型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)等。尿素氮測定試劑盒（脲酶法），購自北京中生生物工程高技術(shù)公司；糖原測定試劑盒，購自南京建成生物工程研究所；其余試劑均為分析純。

1.2方法[6]

1.2.1劑量及分組游泳試驗(yàn)及各項(xiàng)生化指標(biāo)（血清尿素氮、肝糖原、血乳酸）測定所用動(dòng)物均按體質(zhì)量分成4組，每組12只，設(shè)為85、170、510 mg/kg 3個(gè)劑量組和溶劑（純凈水）對照組，各組受試液以每日20 mL/kg的量經(jīng)口灌胃，連續(xù)32 d。

1.2.2受試物對動(dòng)物體質(zhì)量的影響各組動(dòng)物于試驗(yàn)前后稱量體質(zhì)量。

1.2.3游泳時(shí)間測定末次經(jīng)口灌胃給予受試物30 min后，置尾根部負(fù)荷5%體質(zhì)量鉛皮的小鼠于游泳箱中，水深大于30 cm，水溫（25±1.0） ℃，記錄小鼠從游泳開始至死亡的時(shí)間，作為小鼠游泳時(shí)間。

1.2.4血清尿素氮含量的測定末次經(jīng)口灌胃給予受試物30 min后，在溫度為30 ℃的水中游泳90 min，休息60 min后采血，分離血清后按有關(guān)試劑盒要求檢測。

1.2.5肝糖原含量測定末次給予受試物30 min后處死動(dòng)物，取肝臟100 mg，置于5%三氯乙酸溶液中勻漿、離心，95%乙醇沉淀糖原，蒽酮法測定肝糖原含量。

1.2.6乳酸含量測定首先眼內(nèi)眥采血測定安靜狀態(tài)下的血乳酸基礎(chǔ)值；末次給予受試物30 min后，在30 ℃水中游泳 10 min，撈起擦干，立即第2次眼內(nèi)眥采血，休息30 min后第3次眼內(nèi)眥采血，均用乳酸儀測定乳酸含量。

1.3統(tǒng)計(jì)方法

所有測量值均先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足方差齊的要求，進(jìn)行單因素方差分析，對P<0.05的數(shù)據(jù)用LSD多個(gè)試驗(yàn)組與1個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較。對方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行變量轉(zhuǎn)換，經(jīng)轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)未達(dá)到方差齊要求，用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2結(jié)果與分析

2.1楊梅提取物對小鼠體質(zhì)量的影響

由表1可見，各劑量組小鼠的初始體質(zhì)量差異不顯著（P>0.05），即小鼠的初始體重在各組間較為均衡。經(jīng)口給予小鼠不同劑量的楊梅提取物32 d后，各組終末體質(zhì)量滿足方差齊的要求，差異不顯著（P>0.05），即楊梅提取物對小鼠的體質(zhì)量增長無明顯影響。

2.2楊梅提取物對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、肝糖原含量、血清尿素氮含量的影響

高劑量組小鼠平均游泳時(shí)間高于對照組小鼠平均游泳時(shí)間，差異極顯著（P<0.01），而低劑量和中劑量組小鼠平均游泳時(shí)間雖然也高于對照組，差異不顯著（P>0.05），提示楊梅提取物可以延長小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間；低、中和高劑量組小鼠肝糖原含量均高于對照組小鼠肝糖原含量，而且高劑量組值與對照組值比較差異極顯著（P<0.01）；高劑量組小鼠游泳后的血清尿素氮值低于對照組，差異極顯著（P<001），而低劑量和中劑量組小鼠血清尿素氮值與對照組比較差異不顯著（P>0.05）（表2）。說明楊梅提取物能增加負(fù)重游泳時(shí)間、增加肝糖原含量和減少疲勞小鼠血清尿素氮產(chǎn)生。

2.3楊梅提取物對小鼠血乳酸含量的影響

由表3可知，中、高劑量組小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸變化值均低于對照組小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸變化值，差異極顯著（P<001），提示楊梅提取物能降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸含量。說明楊梅提取物能抑制運(yùn)動(dòng)后乳酸的產(chǎn)生和積累，有利于減緩血乳酸的堆積。

3結(jié)論與討論

負(fù)重游泳試驗(yàn)是評價(jià)藥物抗疲勞作用的動(dòng)物模型，游泳時(shí)間的長短與運(yùn)動(dòng)耐力有關(guān)，可以反映動(dòng)物運(yùn)動(dòng)疲勞的程度[7]。糖是機(jī)體的主要供能物質(zhì)，肝糖原貯備的提高可維持長時(shí)間運(yùn)動(dòng)時(shí)血糖濃度，有利于機(jī)體耐力速度的提高，并減少蛋白質(zhì)和含氮化合物的分解代謝，延緩疲勞的出現(xiàn)[8]。乳酸和尿素氮都是機(jī)體運(yùn)動(dòng)代謝的產(chǎn)物。血液中乳酸的變化情況和血清中尿素氮水平能反映機(jī)體無氧酵解和含氮化合物的代謝狀況，是評價(jià)機(jī)體運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的指標(biāo)[9]。

楊梅果實(shí)在成熟時(shí)呈紅色或紫色，這是由一類與黃酮類似結(jié)構(gòu)的物質(zhì)-花色苷所致[10]。楊梅提取物中也含有大量的花色苷[2，11-12]。花色苷是花青素與糖以糖苷鍵結(jié)合而成的一類化合物，是花青素主要的存在形式，廣泛存在于植物的細(xì)胞液中，是植物最主要的水溶性色素之一。花色苷作為1種植物中提取的色素?fù)碛卸喾N活性[13-15]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，楊梅提取物能明顯延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，加強(qiáng)肝糖原的儲(chǔ)備，抑制運(yùn)動(dòng)后乳酸的生產(chǎn)和積累，減輕運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體利用蛋白質(zhì)供能的程度，緩解疲勞的發(fā)生，降低機(jī)體疲勞的程度，與有關(guān)報(bào)道[16]基本一致，提示楊梅提取物中含有的楊梅花色苷可能為抗疲勞作用的活性成分，其具體的作用機(jī)制還有待將楊梅花色苷提純后進(jìn)一步研究。

[HS2][HT8.5H]參考文獻(xiàn)：[HT8.SS]

[1]周潔，汪仕韜，孫石磊，等. 楊梅果實(shí)提取物抗小鼠腹瀉作用的研究[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，2009，21（4）：323-326.

[2][JP2]張進(jìn)杰，顧偉鋼，呂兵兵，等. 楊梅果渣提取物在鮮、熟豬肉中抗菌和抗氧化作用研究[J]. 中國食品學(xué)報(bào)，2011，11（5）：100-107.

[3]凌關(guān)庭.楊梅提取物及其抗氧化作用[J]. 糧食與油脂，2009（4）：38-41.

[4]肖南，辛修鋒，余小林，等. 楊梅渣多酚的提取及其抗氧化作用[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè)，2014，40（6）：236-240.

[5]耿曉玲，張白曦，徐麗麗，等. 楊梅果實(shí)提取物抑菌特性的研究[J]. 食品科技，2007，32（3）：120-122，125.

[6]保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范[M]. 北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2003：81-91.

[7]凌關(guān)庭. 保健食品原料手冊[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：432.

[8]魏守剛. 糖與耐力運(yùn)動(dòng)[J]. 山東體育科技，1996（1）：56-58.

[9]陳吉棣.運(yùn)動(dòng)營養(yǎng)學(xué)[M]. 北京：北京醫(yī)科大學(xué)出版社，2002：33-37.

[10]辛修鋒，余小林，胡卓炎，等. 楊梅澄清汁及濃縮汁中花色苷熱降解動(dòng)力學(xué)的研究[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2007，23（9）：251-255.

[11]Zhou S H，F(xiàn)ang Z X，Lue Y，et al. Phenolics and antioxidant properties of bayberry （Myrica rubra Sieb. et Zucc.） pomace[J]. Food Chemistry，2009，112（2）：394-399.

[12]李辛雷，李紀(jì)元，范正琪，等. 桑果、楊梅色素成分初步研究[J]. 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，29（5）：101-104.

[13]李玉白，黃紅焰.花青素協(xié)同葡萄糖醛酸對輻射大鼠肝功能的影響[J]. 中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，42（11）：1025-1027，1031.

[14]閆倩倩，周玉珍，張雨青.紫甘薯花青素對小鼠急性乙醇性肝損傷的預(yù)防保護(hù)作用[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：265-266.

[15]程強(qiáng)，張作明，張磊.花青素類提取物對光誘導(dǎo)的大鼠視網(wǎng)膜功能和結(jié)構(gòu)損傷的保護(hù)作用[J]. 中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志，2013，31（2）：110-116.

[16]劉岱琳，曹波，張靜澤，等. 復(fù)方OPC粉抗疲勞作用的保健功效[J]. 食品研究與開發(fā)，2010，31（12）：210-212.