孫瑋+季寅星

摘 要：水產品是我國食物種類的重要組成，深受百姓的青睞，但是為了確保水產品的正常養(yǎng)殖，需要使用硝基呋喃類藥物，預防疾病的發(fā)生。雖然這類藥物可以經代謝排出，但是水產品體內依然會有一定的殘留，人們在食用水產品時如果將其體內殘留的硝基呋喃代謝物攝入體內，會給機體帶來一定的傷害。為了避免這種結果，必須對水產品中的硝基呋喃代謝物（AHD、SEM、AOZ以及AMOZ）進行快速檢測，以免出現(xiàn)嚴重的后果。本文試對硝基呋喃代謝物進行檢測，并對這種物質的新檢測方法進行簡單的介紹。

關鍵詞：水產品；硝基呋喃代謝物；殘留；快速檢測；新方法

中圖分類號：TS254.7 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20170333033

呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮等硝基呋喃類抗菌藥物曾經在畜禽類和水產品的養(yǎng)殖中有著非常廣泛的應用，但是硝基呋喃本身具有的毒性可以為人體健康帶來危害，雖然經過代謝可以適量排出體外，但是其與蛋白質結合后會產生一定的殘留產物，具有致癌作用。為了保障食品安全，實驗室必須對水產品進行快速檢測，以確保其體內的硝基呋喃代謝物在殘留程度上符合安全標準。

1 檢測重要性

硝基呋喃是抗菌藥物中的一個種類，具有廣譜的優(yōu)點，由人工方式合成，結構為“5-硝基”，曾經被添加到飼料中，用于畜禽或水產品疾病的預防和治療。但是，這種物質有一定程度的慢性毒性，短暫攝入人體后會帶來惡心嘔吐、腹瀉、厭食等不良反應，部分患者甚至會出現(xiàn)黃疸或溶血性貧血，若是長時間或大劑量攝入，會有致畸或致癌效果。雖然這種物質半衰期較短，可以通過代謝排出，但是硝基呋喃代謝物可以與組織蛋白質結合，以另一種存在形式長期存留在人體中。對此，我國農業(yè)部在2002年12月下旬與2005年10月下旬先后發(fā)布了關于禁止在水產品養(yǎng)殖與畜牧飼養(yǎng)過程中添加硝基呋喃的公告，將硝基呋喃在動物飼養(yǎng)中的應用視為非法行為。正是基于這樣的狀況，實驗室務必要對硝基呋喃殘留狀況進行快速檢測，避免相關食品安全問題的出現(xiàn)。

2 方法——免疫膠體金法

目前，用于硝基呋喃代謝物檢測的方法有許多，如：免疫膠體金法、液相色譜-串聯(lián)質譜法、液相色譜/串聯(lián)質譜線性組合法、固相萃取高效液相色譜-質譜法等方法。本文選擇免疫膠體金法這種新方法進行分析。

2.1 方法

挑選河蟹、魚蝦等水產品，取其可食用部分，大約100g，將搗碎后均勻混合，放在干凈容器中，送入-18℃環(huán)境中作冷凍避光保存。為AHD、SEM、AOZ以及AMOZ 4種硝基呋喃代謝物準備生化試劑，分別為4-CBA、4-NBA、2-NBA，另準備氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液以及磷酸氫二鉀溶液各0mol/L、pH=7.4的PBST緩沖劑復溶液以及其他一些必備物品。為水產品進行快速檢測。為了盡快取得陰性樣品與陽性樣品，可以借助LC-MS/MS方法進行預檢。將解凍樣品先稱取2g，放入50mL的離心管之中，添加10mL的“甲醇：水=1：1”的混合溶液，給予1min的漩渦混合操作，再以4000轉/min的速率進行5min的離心操作，完畢后將液體剔除，將殘留物放入10mL的0.2mol/L鹽酸之中，均勻漿后再次加入0.05mol/L的2-NBA與50?g/L的混合內標物（包含99.5%以上純度的AHD、SEM、AOZ、AMOZ）各0.1mL，進行1min的漩渦混合，做100次/min的振蕩，保持37℃溫度不變，過夜后將樣本取出并冷去，再添加0.1mol/L的磷酸氫二鉀5mL，使用1mol/L的氫氧化鈉進行酸堿度調整，直至其pH=7.4，隨后使用4mL的乙酸乙酯進行2次提取，待干燥后使用50%的甲醇溶液進行定容，直至最終量為1mL。在混勻之后若達到0.22?m，則可以使用UPLC-MS/MS方法進行測定。為樣品進行面積膠體金方法的檢測。將樣品吸取0.1mL，放入含有金標抗體的酶標板為控制中，以滴管進行反復吹打，直至微孔中的紅色物質徹底溶解。安靜等待5min之后，將試條取出并保持水平放置，將微孔中的溶液全部滴加到加樣孔并開始計時，使用肉眼進行結果觀察。

2.2 結果

陰性（-）為檢測線（T）顏色與對照線（C）相同或更深；陽性（+）為檢測線顏色比對照線顯色淺，甚至檢測線無顯色。檢測線的顯色越淺，水產品硝基呋喃代謝物的殘留度就越高。不同衍化劑對不同混合內標物具有不同的敏感度，AMOZ、AOZ、SEM與4-CBA配合性更好，AHD與2-NBA配合性更好（見圖1）。

3 結語

實驗室當前用于硝基呋喃代謝的檢測方法主要有免疫膠體金法、液相色譜-串聯(lián)質譜法等。本文僅對免疫膠體金法這種新型方法進行簡單介紹，但是實驗室應該在眾多選擇中選擇最適宜的方法，來提高對硝基呋喃代謝物的檢出率。

參考文獻

[1]柳愛春，劉超，趙蕓，等.免疫膠體金法快速檢測水產品中硝基呋喃類代謝物的研究[J].浙江農業(yè)學報，2013，25（1）.