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      單細(xì)胞液滴可控—質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)

      2017-04-25 03:35:58
      分析化學(xué) 2016年11期
      關(guān)鍵詞:胞內(nèi)單細(xì)胞分析化學(xué)

      分析化學(xué)從早期的元素分析,發(fā)展到現(xiàn)代的小分子、中等分子、大分子的分離分析,出現(xiàn)一大批不同原理的分析儀器和分析方法。進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái),隨著生命科學(xué)研究水平的提高和人們對(duì)疾病與健康的高度重視,分析化學(xué)已經(jīng)不能滿足于無(wú)生命的元素或者物質(zhì)分子的檢測(cè),單細(xì)胞分析成為分析化學(xué)的熱點(diǎn)之一。在生命的發(fā)展過(guò)程中,即使是同一組織、同一類型的細(xì)胞,相互之間也會(huì)存在一定的差異。單細(xì)胞分析能夠很好地了解細(xì)胞之間的差異,對(duì)于掌握和了解腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)防與治療都有積極的意義。由于細(xì)胞體積小、樣品量少、胞內(nèi)及表面組分十分復(fù)雜、胞內(nèi)生化反應(yīng)速度快等特點(diǎn)。因此,單細(xì)胞分析要求超小體積、高靈敏度、高選擇性、多組分、響應(yīng)速度快的分析技術(shù),給分析化學(xué)工作提出了的挑戰(zhàn),但是也給我們帶來(lái)眾多機(jī)遇。Inkjet打印皮升級(jí)液滴因?yàn)槠湟旱误w積小、能夠提供一個(gè)限定的環(huán)境。通過(guò)對(duì)細(xì)胞裝載方式的調(diào)節(jié),比較容易獲得單細(xì)胞液滴,并且細(xì)胞的分泌以及代謝均在狹窄的空間中,方便后續(xù)的分析與檢測(cè),因此在單細(xì)胞分析上具有天然的優(yōu)勢(shì)。

      清華大學(xué)化學(xué)系林金明教授研究組在運(yùn)用Inkjet產(chǎn)生可控液滴的一系列研究基礎(chǔ)上(Talanta,2013,107:111-117;Anal.Chem.,2013,85:7413-7418;Analyst,2015,140(12):3953-3939;Chem.Sci.,2016,7:5448-5452),完成了單液滴與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用(J.MassSpectrom.,2013,48:321-328)和細(xì)胞可控打?。ˋnalyst,2016,141:2940-2947),并應(yīng)用于單細(xì)胞液滴質(zhì)譜的研究(Anal.Chem.,2016,88:4354-4360)。該方法簡(jiǎn)單、方便,通過(guò)對(duì)單個(gè)細(xì)胞表面脂質(zhì)的直接質(zhì)譜檢測(cè),結(jié)合主成分分析,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)八種細(xì)胞的區(qū)分,因此在單細(xì)胞分析中具有積極的意義。

      該團(tuán)隊(duì)自制一個(gè)的inkjet按需打印液滴裝置,實(shí)現(xiàn)了單細(xì)胞液滴的可控產(chǎn)生。如圖1所示,將磁攪拌顆粒放入含細(xì)胞樣品的離心管里,磁攪拌設(shè)備將使細(xì)胞懸浮液攪拌,以控制細(xì)胞在液體中的均勻分布。而通過(guò)Inkjet取樣細(xì)胞懸浮液后,壓電陶瓷在波形驅(qū)動(dòng)力作用下,擠壓通道中的液體,以致噴出液滴可控的單細(xì)胞數(shù),并在二維平臺(tái)及顯微鏡監(jiān)控下將含有單細(xì)胞的皮升級(jí)液滴滴到含有高壓的鎢制電噴霧針尖上,最后在高壓電場(chǎng)的作用下快速產(chǎn)生噴霧進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)。在該研究中,細(xì)胞表面的多種脂質(zhì)能夠通過(guò)該方法很好的檢測(cè)出來(lái),并通過(guò)對(duì)多種細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行主成分分析,可以識(shí)別出不同的細(xì)胞類型。因此,該方法可能對(duì)細(xì)胞識(shí)別、代謝研究和疾病診斷等方面提供了新的思路。

      此外,該團(tuán)隊(duì)還利用Inkjet細(xì)胞打印進(jìn)行細(xì)胞共培養(yǎng)和藥物代謝研究。以HepG2細(xì)胞和U251細(xì)胞為例(圖2),兩種細(xì)胞分別包裹在海藻酸鈉中,利用Inkjet和電腦軟件在玻璃基底上精確的控制打印間隔的細(xì)胞液滴陣列。然后再覆蓋上有通道的PDMS層,注入離子交聯(lián)劑使得海藻酸鈉形成膠體,因而細(xì)胞就固定在微芯片的底部,然后用于藥物代謝研究。通過(guò)這種方式,細(xì)胞間的距離能夠非常精確的進(jìn)行控制和調(diào)節(jié),JP而細(xì)胞數(shù)目能夠較為精確的控制,因此能夠高通量、自動(dòng)化的進(jìn)行細(xì)胞圖案化,大大提升了效率。

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