王潔蓮，牛 瑋，孫 靜

（1山西省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心，太原030025；2山西省運(yùn)城市鹽湖區(qū)種子管理站，山西運(yùn)城044000）

氣相色譜法檢測(cè)平菇中9種農(nóng)藥殘留分析

王潔蓮1，牛 瑋1，孫 靜2

（1山西省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心，太原030025；2山西省運(yùn)城市鹽湖區(qū)種子管理站，山西運(yùn)城044000）

為解決食用菌中的農(nóng)藥殘留檢測(cè)問(wèn)題，以基地生產(chǎn)的平菇樣品為實(shí)驗(yàn)材料，采用固相萃取方法對(duì)平菇中白菌清、三唑酮等9種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法進(jìn)行研究，用石墨碳黑氨基柱凈化樣品，利用氣相色譜作為檢測(cè)手段，ECD檢測(cè)器進(jìn)行定性定量分析。研究表明，平菇中9種農(nóng)藥的含量重復(fù)性實(shí)驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.05%～6.35%，檢出限為0.0003～0.005 mg/kg，定量限為0.0009～0.02 mg/kg。9種農(nóng)藥在0.05～2.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r值均大于0.990。此方法檢測(cè)平菇中9種農(nóng)藥殘留分析準(zhǔn)確、可行。

農(nóng)藥殘留；平菇；氣相色譜法

0 引言

平菇的醇香備受人們的鐘愛(ài)，是餐桌上的常見(jiàn)食用菌。食用菌的生產(chǎn)環(huán)境不同于蔬菜，根據(jù)GB 2763—2014規(guī)定[1]，食用菌與蔬菜不同類，食用菌一般是用適宜的菌種在適宜的環(huán)境下人工栽培而成。在平菇的生長(zhǎng)過(guò)程中，會(huì)因環(huán)境的改變產(chǎn)生很多雜菌和蟲(chóng)害，所以必須使用農(nóng)藥。不按規(guī)定使用農(nóng)藥，或使用農(nóng)藥后在間隔期上市是平菇中農(nóng)藥殘留超標(biāo)的主要問(wèn)題。目前常用的平菇的檢測(cè)方法有質(zhì)譜法和氣相色譜法。質(zhì)譜儀器價(jià)格貴，運(yùn)行成本高，對(duì)操作人員要求嚴(yán)格，不適于檢測(cè)參數(shù)的大面積普及。目前的氣相色譜法檢測(cè)參數(shù)分散，根據(jù)無(wú)公害檢測(cè)目錄規(guī)定，平菇檢測(cè)的有機(jī)氯和菊酯類農(nóng)藥共有5種，需使用3種檢測(cè)方法[2-4]，這3種檢測(cè)方法所使用的前處理技術(shù)有液液萃取和填充柱法，每種檢測(cè)方法的前處理過(guò)程均不相同，檢測(cè)參數(shù)少，耗時(shí)長(zhǎng)，對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重，不能為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全提供簡(jiǎn)便快捷的手段。筆者用乙腈提取，氣相色譜法(GC-ECD)檢測(cè)，比較3種固相萃取柱和吸附劑凈化區(qū)別，選擇出穩(wěn)定、可靠、靈敏度高、滿足要求的平菇中9種農(nóng)藥殘留同時(shí)檢測(cè)的氣相色譜方法，為平菇檢測(cè)參數(shù)的普及提供必要的監(jiān)測(cè)手段。

1 材料與方法

1.1 前處理材料

1.1.1 樣品來(lái)源 呂梁示范基地栽培的平菇樣品。

1.1.2 試劑和標(biāo)準(zhǔn)品 氯化鈉（天津北辰方正試劑廠）于650℃灼燒2 h后備用，乙腈、正已烷、甲苯、丙酮均為色譜純（迪馬科技）；石墨炭黑氨基固相萃取柱(1000 mg/mL)、氨基固相萃取柱(500 mg/mL)、氟羅里矽柱(500 mg/mL)，均為美國(guó)Agilent公司。標(biāo)準(zhǔn)品為百菌清、三唑酮、腐霉利、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯，濃度為100 mg/L，均購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境監(jiān)測(cè)總站（天津）。

1.1.3 主要儀器 Agilent7890B氣相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），μ-ECD檢測(cè)器；TP-2101電子天平（丹佛儀器有限公司）；T25basic高速勻漿機(jī)，RV05basic旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，TKA MS3旋窩混勻器（德國(guó)IKA公司）；TTL-DCⅡ型氮吹儀（北京同泰公司）。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 樣品的提取與凈化 準(zhǔn)確稱取20.00 g平菇樣品于200 mL玻璃燒杯中，準(zhǔn)確加入40.0 mL乙腈，高速勻漿2 min(10000 r/min)后抽濾，用含5～7 g氯化鈉（已烘）的100 mL具塞量筒收集濾液30～40 mL，加塞密閉，充分振蕩1 min，去塞，在室溫下靜置30 min以上；吸取10 mL上層乙腈相于150 mL雞心瓶中，于40℃下旋蒸濃縮至近干，加乙腈:甲苯(3:1)5 mL待凈化。

凈化：用6.0 mL乙腈:甲苯(3:1)混合溶劑預(yù)淋洗石墨炭黑氨基柱，當(dāng)溶液接近柱表面時(shí)，加入上述凈化液，再分4次用5 mL乙腈:甲苯(3:1)混合溶劑洗瓶，收集洗脫液用于45℃旋蒸濃縮至1 mL左右，用氮?dú)獯蹈桑? mL正已烷準(zhǔn)確定容，待測(cè)。

1.2.2 氣相色譜條件 中級(jí)性毛細(xì)管柱DB-17(30 m× 0.25 mm×0.25 mm)；程序升溫：初溫150℃，保持1 min，以10℃/min升到270℃，保持15 min，以20℃/min升到280℃，保持2 min；柱流量2 mL/min。檢測(cè)器μ-ECD，溫度300℃；進(jìn)樣口溫度235℃；進(jìn)樣模式分流，進(jìn)樣量1μL，分流比10:1；尾吹流量60 mL/min。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確移取1.00 mL的百菌清、三唑酮、腐霉利、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯單個(gè)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，用正已烷做溶劑，配制成10 mg/L的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（貯存在-16℃以下的冰箱中）。上機(jī)之前，用正已烷將10 mg/L混合工作儲(chǔ)備液依次稀釋為2.0、1.0、0.5、0.2、0.1、0.05 mg/L的混合工作使用液。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將配制好的0.05、0.1等一系列的6個(gè)濃度點(diǎn)的工作使用液依據(jù)1.2.2章節(jié)的氣相色譜條件，以質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，每個(gè)濃度5次重復(fù)。

1.4 準(zhǔn)確度和精密度的測(cè)定

在陰性平菇樣品中分別添加0.05、0.1、1.0 mg/kg的3個(gè)水平的9種農(nóng)藥的混合工作溶液，每個(gè)水平重復(fù)5次，按1.2.2章節(jié)的氣相色譜條件測(cè)定回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，見(jiàn)表1。

表1 9種農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限、回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

依據(jù)極性的大小，本著相似相溶的原則，查閱參考文獻(xiàn)[5-7]，選擇丙酮、甲醇、乙腈對(duì)樣品進(jìn)行提取。丙酮、甲醇提取樣品時(shí)提取液顏色深，影響色譜柱的使用壽命，對(duì)色譜系統(tǒng)污染嚴(yán)重。乙腈提取樣品，雜質(zhì)少，顏色淺，回收率滿意。

續(xù)表1

2.2 凈化條件的選擇

現(xiàn)行的凈化方法是吸附劑(PSA/C18/GCB)凈化[8-13]和SPE柱凈化[14-19]，吸附劑凈化應(yīng)用于平菇的氣相色譜檢測(cè)，不能有效減少干擾色譜峰。SPE柱凈化是目前氣相色譜檢測(cè)中最常用的凈化方法。SPE柱中的氨基柱、氟羅里矽柱和石墨炭黑氨基柱在這幾種農(nóng)藥檢測(cè)中有使用的報(bào)道。查閱現(xiàn)有的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[1-7]和文獻(xiàn)[20-22]，進(jìn)行單因素水平實(shí)驗(yàn)，確定各凈化柱的洗脫溶液和體積，設(shè)計(jì)3因素3水平的正交實(shí)驗(yàn)見(jiàn)表2，以9種農(nóng)藥的平均回收率為參考指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表3。可以看出A1B3C3、A2B1C2和A3B2C13種組合的回收率水平在70%～130%，為了確保每個(gè)農(nóng)藥的回收率都符合要求，根據(jù)回收率水平70%～130%、最接進(jìn)100%回收率的要求，確定出最佳凈化條件A2B1C2，按照這個(gè)條件進(jìn)行樣品前處理，9種農(nóng)藥得到良好的分離，在28 min內(nèi)完成檢測(cè)?？瞻讟悠芬?jiàn)圖1。

表2 9種農(nóng)藥殘留正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

表3 9種農(nóng)藥殘留正交因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.3 線性方程、檢出限和定量限

用正己烷溶劑作為9種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，依次稀釋為2.0、1.0、0.5、0.2、0.1、0.05 mg/L一系列6個(gè)濃度點(diǎn)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用氣相色譜ECD進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。9種農(nóng)藥的6個(gè)濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系。在最低添加濃度0.05 mg/kg下，以相同的時(shí)間段計(jì)算，3倍的信躁比為檢出限，10倍的信躁比為定量限。9種農(nóng)藥的線性方程、檢出限及定量限見(jiàn)表1。

圖1 空白樣品色譜圖

2.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度

結(jié)果表明，在0.05～1.0 mg/kg 3個(gè)添加水平下，平均回收率為71%～119%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.05%～6.35%，定量限為0.0009～0.02 mg/kg，檢出限為0.0003～0.005 mg/kg，說(shuō)明本方法靈敏度高，穩(wěn)定性好，可作為平菇中9種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。

在已知的陰性平菇樣品中分別加入9種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，每個(gè)加標(biāo)樣品做3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算平均回收率為70%～119%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于7%（表1），說(shuō)明本方法準(zhǔn)確可靠。圖2為標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，圖3為樣品添加色譜圖。

2.5 實(shí)際樣品分析

按照本方法比較后選定的前處理方法和儀器條件對(duì)呂梁示范基地的平菇樣品在上市前進(jìn)行檢測(cè)，共檢測(cè)樣品50個(gè)。隨機(jī)抽取20個(gè)樣品做加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)濃度為0.1、1.0 mg/kg，回收率為71%～119%，說(shuō)明本方法能滿足實(shí)際樣品的分析要求。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖3 平菇加標(biāo)樣品色譜圖

3 結(jié)論

筆者先比較了吸附劑和固相萃取柱兩種凈化方式，確定固相萃取柱凈化，然后再設(shè)計(jì)3因素3水平的正交實(shí)驗(yàn)，比較不同的溶劑、溶劑的用量在石墨炭黑氨基柱、氨基柱和氟羅里矽柱3種固相萃取柱凈化平菇樣品的區(qū)別，最終確定了白菌清等9種農(nóng)藥在平菇中的氣相色譜儀上的檢測(cè)方法。本方法選用石墨炭黑氨基柱對(duì)平菇樣品進(jìn)行凈化，該方法準(zhǔn)確、靈敏度高，滿足國(guó)家要求；本方法為目前普及的氣相色譜提供了檢測(cè)參考，為平菇的質(zhì)量安全增加了檢測(cè)方法；本方法補(bǔ)充了平菇樣品中的農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法，有望成為地方標(biāo)準(zhǔn)。

4 討論

食用菌作為單列類（與蔬菜不同類），目前農(nóng)藥多殘留檢測(cè)的方法是質(zhì)譜法[7-9]，氣相色譜方法涉及的多殘留檢測(cè)使用的前處理方法不統(tǒng)一，一個(gè)參數(shù)一個(gè)方法。筆者將食用菌常檢的農(nóng)藥用同一種前處理方法凈化，以平菇為樣品，一次處理可同時(shí)檢測(cè)9個(gè)參數(shù)，平菇中農(nóng)藥殘留氣相色譜檢測(cè)的報(bào)道文獻(xiàn)[22-25]最多檢測(cè)5種農(nóng)藥。本研究的不足之處是石墨炭黑氨基柱凈化使用的淋洗液用量大，增加了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，有待進(jìn)一步研究。

[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì),中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.GB 2763—2014,食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2014:11-25.

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[8]中華人民共和國(guó)秦皇島出入境檢驗(yàn)檢疫局,山東農(nóng)業(yè)大學(xué).GB/T 23202—2008,食用菌中440種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京:中國(guó)質(zhì)檢出版社,2008:10

[9]中華人民共和國(guó)秦皇島出入境檢驗(yàn)檢疫局,山東農(nóng)業(yè)大學(xué).GB/T 20769—2008,水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S]北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008:3

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Determination of 9 Pesticide Residues in Oyster Mushroom by Gas Chromatography

Wang Jielian1,Niu Wei1,Sun Jing2
(1Agricultural Products Quality Safety Monitoring Center of Shanxi Province,Taiyuan 030025,Shanxi,China;2Salt Lake Valley Seed Station of Yuncheng City,Yuncheng 044000,Shanxi,China)

To detect pesticide residues in edible mushrooms,oyster mushroom samples were taken as the experiment material.The solid-phase extraction method was adopted to study the detection methods for 9 pesticide residues such as chlorothalonil and triadimefon in oyster mushrooms.The samples were extracted with acetonitrile,further cleaned-up by graphite carbon amino columns and detected by gas chromatography with electron capture detector(GC-ECD).The result showed that the relative standard deviations of nine pesticides content were 2.05%-6.35%under this method,the limits of detection were 0.0003-0.005 mg/kg and the limits of quantification were 0.0009-0.02 mg/kg.The nine pesticides had a good linearity from 0.05 to 2.0 mg/L and the r values were greater than 0.990.The method is feasible and accurate for determining nine residues in oyster mushroom.

Pesticide Residues;Oyster Mushroom;Gas Chromatography

S657.71，TQ450.26

：A論文編號(hào)：cjas16080024

山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目“農(nóng)藥殘留與農(nóng)田鼠害防治技術(shù)研究”(20130310011-4)。

王潔蓮，女，1980年出生，山西臨猗人，高級(jí)農(nóng)藝師，碩士，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。通信地址：030025山西省太原市晉源新區(qū)景明北路5號(hào)山西省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心，E-mail：agilent2006@163.com。

2016-08-29，

：2016-12-02。