徐 偉，詹長(zhǎng)娟，王 華，王 翼，郭 琪（南京理工大學(xué)泰州科技學(xué)院環(huán)境與制藥工程學(xué)院，江蘇泰州225300）

RP-HPLC法測(cè)定卡博替尼原料藥中卡博替尼的含量

徐 偉＊，詹長(zhǎng)娟#，王 華，王 翼，郭 琪（南京理工大學(xué)泰州科技學(xué)院環(huán)境與制藥工程學(xué)院，江蘇泰州225300）

目的：建立測(cè)定卡博替尼原料藥中卡博替尼含量的方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為Inertsil ODS-SP C18，流動(dòng)相為乙腈-0.02 mol/L乙酸銨緩沖溶液（pH 5.2）（52∶48，V/V），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為241 nm，柱溫為38 ，進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果：卡博替尼檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為9.88～49.40 μg/mL（r＝0.999 9）；定量限為11.46 ng，檢測(cè)限為3.36 ng；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2.0%；加樣回收率為98.5～101.7%（RSD＝1.2%，n＝9）。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于卡博替尼原料藥中卡博替尼的含量測(cè)定。

卡博替尼；反相高效液相色譜法；含量測(cè)定

卡博替尼（Cabozantinib）是一種多靶點(diǎn)分子靶向藥物，具有顯著的抗癌活性，可用于治療甲狀腺髓樣癌（Medullary thyroid carcinoma，MTC），開創(chuàng)了MTC靶向治療的新時(shí)代[1-2]。該藥于2012年11月由FDA批準(zhǔn)上市，用于不可手術(shù)切除的惡性局部晚期或轉(zhuǎn)移性MTC的治療[3-4]。臨床試驗(yàn)已證實(shí)，其在治療MTC時(shí)具有快速、明確且顯著的臨床療效和安全性，其為進(jìn)展性、轉(zhuǎn)移性MTC患者帶來了希望，具有良好的應(yīng)用前景[5-7]。但目前尚未見測(cè)定卡博替尼原料藥中卡博替尼含量的報(bào)道。因此，筆者采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）建立了測(cè)定卡博替尼原料藥中卡博替尼的含量，以期為卡博替尼原料藥的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AT型HPLC儀，包括UV-2450紫外分光光度計(jì)、SPD-20A檢測(cè)器、CTO-10AS VP柱溫箱、LC-20AT AB泵、DGU-20A3在線脫氣機(jī)（日本Shimadzu公司）；MJF-300型超聲波清洗機(jī)（無錫市美極超聲波清洗機(jī)設(shè)備公司，功率：300 W，頻率：40 kHz）；MP511型實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)（上海精密儀器儀表有限公司）。

1.2 藥品與試劑

卡博替尼原料藥（南京理工大學(xué)泰州科技學(xué)院環(huán)境與制藥工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)室自制，批號(hào)：20150101、20150102、20150103）；卡博替尼對(duì)照品（南京理工大學(xué)泰州科技學(xué)院環(huán)境與制藥工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)室自制，批號(hào)：20141220，純度：98.8%）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.02 mol/L乙酸銨緩沖溶液（pH 5.2）（52∶48，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：241 nm；柱溫：38 ；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 取卡博替尼對(duì)照品約50 mg，精密稱定，置于500 mL量瓶中，加乙腈定容，稱定質(zhì)量，超聲處理10 min使其溶解，放冷，再次稱定質(zhì)量，用乙腈補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，即得對(duì)照品貯備液。取上述對(duì)照品貯備液1 mL，置于10 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約50 mg，精密稱定，置于500 mL量瓶中，加乙腈定容，稱定質(zhì)量，超聲處理10 min使其溶解，放冷，再次稱定質(zhì)量，用乙腈補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，即得供試品貯備液。取上述供試品貯備液1 mL，置于10 mL量瓶中，加乙腈定容，搖勻，即得。

2.2.3 空白溶液 取流動(dòng)相適量作為空白溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞1.5；理論板數(shù)以卡博替尼峰計(jì)為13 698，保留時(shí)間為16.6 min。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測(cè)定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，加乙腈定容，搖勻，即得系列對(duì)照品溶液。取上述系列對(duì)照品溶液各20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以卡博替尼質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得卡博替尼回歸方程為y＝1.319× 108x+4.126×103（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，卡博替尼檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為9.88～49.40 μg/mL。

2.5 定量限與檢測(cè)限考察

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得定量限（LOQ）；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得檢測(cè)限（LOD）。結(jié)果，卡博替尼的LOQ為11.46 ng，LOD為3.36 ng。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，卡博替尼峰面積的RSD＝1.7%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20150101）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，卡博替尼峰面積的RSD＝1.4%（n＝5），表明供試品溶液在室溫放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20150101）適量，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量。結(jié)果，卡博替尼的平均含量為97.8%，RSD＝1.4%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20150101）約10 mg，共9份，分別置于100 mL量瓶中，加入低、中、高質(zhì)量的卡博替尼對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Result of recovery test（n＝9）

2.10 樣品含量測(cè)定

取3批樣品（批號(hào)：20150101、20150102、20150103）各適量，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算卡博替尼的含量。結(jié)果，3批樣品中卡博替尼的含量分別為97.9%、98.3%、98.6%（n＝3）。

3 討論

筆者曾考察乙腈-水、乙腈-0.02 mol/L乙酸銨緩沖溶液（pH5.2）作為本研究的流動(dòng)相時(shí)對(duì)色譜峰分離的影響。結(jié)果，當(dāng)乙腈-水為流動(dòng)相時(shí)，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的比例，各色譜峰分離均不理想；當(dāng)乙腈-0.02 mol/L乙酸銨緩沖溶液（pH5.2）為流動(dòng)相時(shí)，乙腈與0.02 mol/L乙酸銨緩沖溶液體積比在45∶55～45∶55之間時(shí)各色譜峰均可達(dá)到基線分離，且乙腈比例越高，保留時(shí)間越小，因此選擇乙腈-0.02 mol/L乙酸銨緩沖溶液（pH5.2）（52∶48，V/V）為本試驗(yàn)的流動(dòng)相。

綜上所述，本方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于卡博替尼原料藥中卡博替尼的含量測(cè)定。

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（編輯：劉 柳）

Content Determination of Cabozantinib in Its Raw Material by RP-HPLC

XU Wei，ZHAN Changjuan，WANG Hua，WANG Yi，GUO Qi（School of Environmental and Pharmaceutical Engineering，Taizhou Institute of Sci.&Tech.，Nanjing University of Science&Technology，Jiangsu Taizhou 225300，China）

Cabozantinib；RP-HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2017）12-1696-03

2016-04-30

2017-01-12）

＊講師，碩士。研究方向：藥物化學(xué)。電話：0523-86150675。E-mail：541175674@qq.com

#通信作者：講師，碩士。研究方向：藥物分析。E-mail：Jenny_yz@sina.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.12.31

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a method for the content determination of cabozantinib in its raw material.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determination was performed on Inertsil ODS-SP C18column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.02 mol/L ammonium acetate buffer（pH 5.2，52∶48，V/V）at the flow rate of 1.0 mL/min.Detection wavelength was set at 241 nm，the column temperature was 38 ，and sample size was 20 μL.RESULTS：The linear range of cabozantinib were 9.88-49.40 μg/mL（r＝0.999 9）.The limit of quantitation was 11.46 ng，and the limit of detection was 3.36 ng.The RSDs of precision，stability，repeatability tests were all lower than 2.0%；recoveries were 98.5%-101.7%（RSD＝1.2%，n＝9）.CONCLUSIONS：The method is simple，accurate and suitable for the content determination of cabozantinib in its raw material.