李霄　薛成虎　高立國

摘要[目的]通過體外抗氧化體系比較黑豆不同部分餾油抗氧化性活性。[方法]通過正交試驗(yàn)優(yōu)化索氏提取黑豆餾油的最佳工藝，提取黑豆不同部分餾油；研究黑豆不同部分餾油對羥基自由基（·OH）、DPPH自由基（DPPH·）的清除能力。[結(jié)果]在樣品濃度為1.0 mg/mL時，黑豆不同部分餾油對·OH的清除率分別為全豆餾油83.9%、豆黃（黑豆去皮部分）餾油64.8%、豆皮餾油17.3%，對DPPH·的清除率分別為全豆餾油41.3%、豆黃餾油33.2%、豆皮餾油77.9%。[結(jié)論]黑豆不同部分餾油均具有較好的抗氧化性，是良好的天然抗氧化劑。黑豆不同部分餾油對·OH的清除能力從大到小依次為全豆餾油、豆黃餾油、豆皮餾油，對DPPH·的清除能力從大到小依次為豆皮餾油、全豆餾油、豆黃餾油。

關(guān)鍵詞黑豆；黑豆餾油；抗氧化性；比較

中圖分類號S529文獻(xiàn)標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）20-0121-02

Abstract[Objective] This research aimed to study the antioxidant activity of distillation oil of different parts of black beans in different antioxidant systems separately.[Method]The optimum process of the extraction of black beans distillate oil was optimized by orthogonal test，the distillation oil from different parts of black beans were extracted.The scavenging ability of hydroxyl radical （·OH） and DPPH free radical （DPPH·） in distillation oil of different parts of black beans were studied.[Result]When the concentration of the sample was 1.0 mg/mL， the removal rate of different parts of the black beans distillation oil to ·OH was 83.9% of the whole bean distillate oil， 64.8% of beans without peel and 17.3% of bean peel， the removal ability of DPPH· was 41.3% of the whole bean distillate oil， 33.2% of beans without peel and 77.9% of bean peel.[Conclusion]Distillation oil of different parts of the black beans has strong antioxidant capacity and it is a good natural antioxidant.The black beans different parts of distillation oil on the ·OH scavenging ability： whole bean>bean without peel>bean peel；DPPH· scavenging ability： bean peel> whole bean> bean without peel.

Key wordsBlack beans； Black beans distillation oil；Antioxidant activity； Comparison

黑豆，豆科植物大豆[Glycine max（L.）Merr]的干燥種子，又名烏豆，經(jīng)干餾而得的黑色粘稠液體就是黑豆餾油[1]，在陜西和山西民間常用來治療頑固性皮膚病，如銀屑病、神經(jīng)性皮炎、嬰兒濕疹、玫瑰糠疹等臨床常見、多發(fā)的皮膚病。據(jù)報(bào)道， 以黑豆餾油為主要成分的復(fù)方制劑， 具有消炎[2]、收斂、止癢、再生角質(zhì)的功能， 對神經(jīng)性皮炎、亞急性、慢性皮炎及慢性濕疹等皮膚病有顯著療效[3-4]。與西藥相比，黑豆餾油療效好、刺激性小、治療皮膚病范圍廣、療效高、周期短、價廉、易于制作，但其缺點(diǎn)是黑豆餾油傳統(tǒng)制備濃黑焦臭，涂抹不方便，易污染衣物，且清洗困難，氣味濃重，影響患者的正常工作與學(xué)習(xí)，給患者造成很大的身心壓力。因此研究黑豆餾油中的有效成分或改進(jìn)制作方法來改良餾油性狀，使其便于使用是非常必要的。

我國黑豆資源豐富，其營養(yǎng)價值和藥用價值都極高[5-7]，但目前黑豆深加工研究較少，主要集中于黑豆釀造醬油[8-9]、黑豆色素[10-11]分析等，綜合利用程度低，對于黑豆的藥用價值開發(fā)不足[12-13]。黑豆餾油是純天然的藥物，具有療效高、無毒副作用的優(yōu)勢，然而使用過程的弊端明顯，不便于大面積使用，因此研究黑豆不同部分的活性，對黑豆餾油的加工工藝改進(jìn)以及黑豆餾油有效成分的分離都有重要的意義。

筆者對黑豆不同部分的黑豆餾油在不同的抗氧化體系中的抗氧化性進(jìn)行比較，可以作為分析黑豆餾油有效成分的來源以及如何改良黑豆餾油不良性狀的重要依據(jù)，為黑豆的深加工提供新的思路。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試材。黑豆取自陜北榆林市橫山縣主產(chǎn)區(qū)，成熟期采摘。自然晾干，手工分離豆皮和豆黃，65 ℃烘干至恒重，粉碎呈一定的顆粒度，密封保存。

1.1.2試劑。正丁醇，天津市瑞金特化學(xué)有限公司；無水乙醇，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；七水合硫酸亞鐵，天津市恒心化學(xué)試劑制造有限公司；雙氧水（30%），天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；水楊酸，天津市津北精細(xì)化工有限公司；鹽酸，四川西隴化工有限公司；二苯基苦味肼基（DPPH），北京中生瑞泰科技有限公司。

1.1.3儀器與設(shè)備。

DHG-9013A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；WK-200B小型高速粉碎機(jī)，濰坊市北方制藥化學(xué)有限公司；BS224S型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；MH-250型電子調(diào)溫電熱套，北京科偉永興儀器有限公司；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵，鄭州匯成科工貿(mào)易有限公司；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，鞏義市予華儀器有限公司；722S可見分光光度計(jì)，上海菁華科技儀器有限公司；DZF-6050型真空干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；HH-1型數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市丹陽門石英玻璃廠。

1.2方法

1.2.1黑豆餾油的提取工藝流程。

黑豆不同部分原料→粉碎→過標(biāo)準(zhǔn)篩→稱重→加入正丁醇→索氏提取→離心分離→上清液→濃縮→定容→測總餾油含量。

參考文獻(xiàn)[14]，通過單因素試驗(yàn)，研究不同溶劑、提取時間、料液比、粉碎度對黑豆餾油提取率的影響，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，優(yōu)化黑豆餾油的最佳提取工藝為：正丁醇作提取劑，提取135 min，料液比為1∶25（g∶mL），粉碎度為40目，分別稱取黑豆皮、黑豆黃和完整黑豆的粉末3.250 0 g，用濾紙包起來，進(jìn)行索氏提取，濃縮溶劑后，得不同部分的黑豆餾油，備用。

1.2.2

黑豆不同部分餾油樣品的配制。分別稱取全豆餾油、豆皮餾油和豆黃餾油各0.020、0.040、0.060、0.080、1.000 g，用無水乙醇定容于100 mL的容量瓶中，分別配制成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的黑豆不同部分的餾油樣品，搖勻待用。

1.2.3黑豆不同部分餾油對羥基自由基（·OH）的清除能力。

以郭雪峰等[15]的方法為參考，并做了相應(yīng)的改進(jìn)。

取6支25 mL比色管，分別加入1.00 mL 9 mmol/L水楊酸的無水乙醇溶液（空白對照為等量的蒸餾水）和1.00 mL 0.9 mmol/L緩沖溶液七水合硫酸亞鐵溶液，搖勻，再加入1.00 mL不同濃度樣品溶液（空白對照），最后加入1.00 mL 1% H2O2溶液（空白對照為等量的蒸餾水），充分搖勻。在37 ℃恒溫水浴中反應(yīng)30 min，以蒸餾水為參比，在波長510 nm處測量各濃度溶液的吸光度。按下式計(jì)算其清除率：

清除率=Ab-AcAa-Ac×100%

式中，Aa為不加H2O2、加樣品時的吸光度；Ab為加H2O2、加樣品時的吸光度；Ac為加H2O2、不加樣品時的吸光度。

1.2.4黑豆不同部分餾油對DPPH·的清除能力測定。

參考吳夏花等[16]的方法，并做了相應(yīng)的改進(jìn)。取5支25 mL比色管，分別加入2.00 mL不同濃度的樣品溶液（不加樣品溶液時以等量溶劑無水乙醇代替），再在避光的環(huán)境下加入2.00 mL 6.0×10-5 mol/L的DPPH無水乙醇溶液，充分混合搖勻，30 min后用無水乙醇作參比，置于波長為517 nm處測定吸光度。按下式計(jì)算其清除率：

清除率=Aa-AbAa×100%

其中，Aa為不加樣品、加DPPH無水乙醇的吸光度；Ab為加樣品、加DPPH無水乙醇的吸光度。

2結(jié)果與分析

2.1不同部分黑豆餾油對·OH的清除能力比較

從圖1可以看出，黑豆不同部分餾油均具有清除·OH的能力，并且自由基的清除能力與樣品濃度呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)關(guān)系，自由基清除率隨樣品濃度的升高而增大。當(dāng)餾油濃度為1.0 mg/mL時，全豆餾油的清除率達(dá)83.9%，豆黃餾油達(dá)64.8%，豆皮餾油僅為17.3%，可見，豆皮餾油對·OH的清除能力不及全豆、豆黃餾油，全豆餾油比豆黃餾油清除率略好。所以，在樣品溶液濃度相等的條件下，全豆餾油對·OH的清除率最好。

2.2不同部分黑豆餾油對DPPH·的清除能力比較

從圖2可以看出，黑豆不同部分餾油均具有清除DPPH·的能力，并且DPPH·的清除能力與樣品濃度呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)關(guān)系，自由基清除率隨樣品濃度的升高而增大。

當(dāng)餾油濃度為1.0 mg/mL時，全豆餾油的清除率達(dá)41.3%，豆黃餾油達(dá)33.2%，豆皮餾油達(dá)77.9%，可見，豆皮餾油對DPPH·的清除能力明顯強(qiáng)于全豆、豆黃餾油，全豆餾油比豆黃餾油略強(qiáng)。所以，在樣品溶液濃度相等的條件下，豆皮餾油對DPPH·的清除率最好。

3結(jié)論

該試驗(yàn)研究黑豆不同部分制備的餾油，并分別比較其對·OH、DPPH·的清除效果，結(jié)果表明，黑豆不同部分餾油均具有一定的清除DPPH·和·OH的能力，表現(xiàn)出較好的抗氧化活性，其濃度與抗氧化活性呈正相關(guān)，但對于不同的自由基黑豆不同部分的餾油表現(xiàn)出不同程度的清除效果。在樣品液濃度相同的情況下，黑豆不同部分餾油對·OH的清除能力從大到小依次為全豆餾油、豆黃餾油、豆皮餾油；對DPPH·的清除能力從大到小依次為豆皮餾油、全豆餾油、豆黃餾油。

參考文獻(xiàn)

[1]

彭懿，賈天柱.幾種餾油劑的研究進(jìn)展[J]. 中成藥，2007，29（5）：734-736.

[2] 王凱，向翠英，張瓊.黑豆餾油凝膠抗炎作用及抗炎特點(diǎn)研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志， 2009，30（12）： 56，58.

[3] 冷明，錢林書.黑豆餾油治療銀屑病35例療效觀察[J].皮膚病與性病，1990（3）：36.

[4] 嚴(yán)曉峰.5%黑豆餾油治療30例嬰兒濕疹療效觀察[J].中國民族民間醫(yī)藥，2012， 21（19）：73.