劉駿+申強(qiáng)+包忠武+郭深意

[摘要]目的 探討乙醇對(duì)高脂飲食SD大鼠體內(nèi)氧化修飾低密度脂蛋白（ox-LDL）的影響。方法 選取6周齡雄性SD大鼠16只均喂食高脂飼料，隨機(jī)分成對(duì)照組、乙醇組[50% 乙醇，1 ml/（100 g·d）]。于實(shí)驗(yàn)前及8周后測(cè)定大鼠總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）以及ox-LDL。結(jié)果 兩組實(shí)驗(yàn)前后的TC、TG、HDL、LDL、ox-LDL均有明顯變化（P<0.05），乙醇組8周后的ox-LDL水平較對(duì)照組明顯升高（P<0.05），兩組的TC、TG、HDL、LDL差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 攝入乙醇可使SD大鼠血清中ox-LDL明顯升高。

[關(guān)鍵詞]乙醇；氧化修飾低密度脂蛋白；SD大鼠；高脂飲食

[中圖分類號(hào)] R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2016）12（b）-0138-03

Influence of Ethanol intake on serum oxidized low-density lipoprotein in rats fed with high fat diet

LIU Jun SHEN Qiang BAO Zhong-wu GUO Shen-yi

Department of Cardiology，Huaihua Hospital Affiliated to University of South China in Hunan Province，Huaihua 418000，China

[Abstract]Objective To investigate the influence of Ethanol intake on serum oxidized low-density lipoprotein in rats fed with high fat diet.Methods 16 male SD rats with 6 weeks of age were fed with high fat diet，and these 16 rats were randomly divided into control group and Ethanol group （50% Ethanol，1 ml/（100 g·d）.The total cholesterol（TC），triglyceride（TG），high-density lipoprotein （HDL），low-density lipoprotein （LDL） and oxidized low-density lipoprotein（ox-LDL） levels of blood serum were determined before experiment and after 8 weeks experiment.Results The TC，TG，HDL，LDL and ox-LDL had a significant change in both two group before and after experiment （P<0.05）.Compared with control group，the ox-LDL levelof blood serum was obviously increased in ethanol group（P<0.05），but TC，TG，HDL and LDL had no significant difference in both groups（P>0.05）.Conclusion Intake of ethanol can significantly increase ox-LDL in serum of SD rats.

[Key words]Ethanol；Oxidized low-density lipoprotin；SD rats；High-fat diet

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是導(dǎo)致冠心病、腦梗死及外周血管病的主要原因。其中，泡沫細(xì)胞的形成是造成動(dòng)脈粥樣硬化的重要環(huán)節(jié)，而泡沫細(xì)胞的生成，則少不了氧化修飾低密度脂蛋白（ox-LDL）的參與。

在許多研究中表明，中低劑量的飲酒，對(duì)血管具有保護(hù)作用，每日乙醇的攝入劑量與冠心病的發(fā)病率呈“U”或“J”形曲線關(guān)系[1]。小劑量乙醇攝入，可降低心肌梗死的的發(fā)病率及梗死后的死亡率[2]。而每日攝入大量的乙醇，則會(huì)使冠心病的發(fā)病率及死亡率明顯升高[3]。且目前國(guó)內(nèi)外有許多關(guān)于大量飲酒導(dǎo)致心血管事件的報(bào)道[4]。而對(duì)于乙醇與動(dòng)脈粥樣硬化之間的關(guān)聯(lián)，仍存在眾多疑問(wèn)，尤其在大量乙醇攝入對(duì)機(jī)體氧化還原反應(yīng)的影響上更是存在諸多觀點(diǎn)[5]。

人體內(nèi)的低密度脂蛋白（LDL），經(jīng)氧化修飾后，可形成ox-LDL，而大量乙醇的攝入，其對(duì)身體機(jī)能及體內(nèi)的氧化還原反應(yīng)有著一定的影響。本研究利用高脂飲食大鼠模型觀察長(zhǎng)期大量乙醇攝入下，測(cè)定大鼠血清內(nèi)氧化修飾低密度脂蛋白水平的變化。

1材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 185～215 g雄性SD大鼠購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均得到南華大學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，于2016年2～7月在南華大學(xué)附屬懷化醫(yī)院的中心實(shí)驗(yàn)室中完成。

1.1.2實(shí)驗(yàn)飼料 大鼠高脂飼料組成：78.25%基礎(chǔ)飼料、20%脂肪、1.25%膽固醇、0.5%膽酸鈉[6]。

1.1.3主要試劑 50%乙醇；大鼠ox-LDL；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（Elabscience公司，E-EL-R0710c）。

1.2 動(dòng)物分組及飼養(yǎng)

雄性SD大鼠16只，經(jīng)1周適應(yīng)性喂養(yǎng)后，隨機(jī)分成兩組，分別為對(duì)照組與乙醇組，每組8只，均使用單只大鼠籠分開(kāi)飼養(yǎng)。均采用大鼠高脂飼料喂養(yǎng)20 g/d，飲水量約40～50 ml/d。

1.3實(shí)驗(yàn)干預(yù)

乙醇組每日經(jīng)鼠灌胃針一次灌入50%乙醇[1 ml/（100 g·d）][7-8]，且每日飲水均為10%乙醇水，對(duì)照組每日經(jīng)鼠灌胃針一次灌入蒸餾水[1 ml/（100 g·d）]，每日乙醇灌胃量及濃度，參考自國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)。每周稱重1次，根據(jù)體重調(diào)整劑量，連續(xù)喂養(yǎng)8周[9-10]。

1.4 標(biāo)本采集及測(cè)定

在大鼠未攝入乙醇及高脂飼料前，使用5%水合氯醛以0.3 ml/100 g劑量通過(guò)腹腔注射麻醉后使用內(nèi)眥靜脈采血法取血，不使用抗凝劑，封閉采血管，在4℃冰箱中靜置6 h后，血液經(jīng)3000 r/min離心15 min，分離血清，送至附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科（奧林巴斯AU2700）測(cè)定血清中總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、LDL水平，ox-LDL使用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定，試劑盒采購(gòu)自Elabscience公司，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。連續(xù)喂養(yǎng)8周后，使用上述方式，再次測(cè)定相關(guān)指標(biāo)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0軟件分析并處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)（α）為0.05。

2 結(jié)果

試驗(yàn)8周后，TC、TG、LDL、Ox-LDL水平明顯升高，HDL水平較實(shí)驗(yàn)前下降（P<0.05）。乙醇組大鼠血清中ox-LDL水平顯著高于對(duì)照組（P<0.05），其余各項(xiàng)指標(biāo)水平兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

3討論

在高脂飲食狀態(tài)下，SD大鼠體內(nèi)的血脂將產(chǎn)生明顯變化，尤其表現(xiàn)為T(mén)G、TC、LDL顯著升高[9-10]。因本研究出發(fā)點(diǎn)為乙醇對(duì)大鼠體內(nèi)ox-LDL含量的影響，而ox-LDL是LDL通過(guò)氧化修飾形成，故本研究采用高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠，造成大鼠體內(nèi)血脂異常，從而能更顯著的觀察大鼠體內(nèi)ox-LDL的變化。本研究通過(guò)建立高脂飲食動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)高脂飲食下的SD大鼠在長(zhǎng)期攝入乙醇后，血清內(nèi)的ox-LDL含量較未攝入乙醇的大鼠明顯升高（P<0.05）。

在關(guān)于乙醇與氧化應(yīng)激，以及攝入乙醇促進(jìn)ox-LDL的形成上，均存在諸多關(guān)聯(lián)。在乙醇的代謝中，涉及到乳酸脫氫酶、微粒體乙醇氧化系統(tǒng)（MEOS）以及過(guò)氧化氫酶，上述三種酶學(xué)反應(yīng)中，均會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧以及氧自由基[11]，而在攝入乙醇后，在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧，可氧化細(xì)胞膜上的多價(jià)不飽和脂肪酸（PUFAS），形成過(guò)氧化脂質(zhì)，其進(jìn)一步氧化，形成產(chǎn)物丙二醛（MDA）等自由基[12]，打破體內(nèi)氧化還原平衡，加速LDL的氧化修飾，生成過(guò)多的ox-LDL，從而造成ox-LDL在體內(nèi)及蓄積。同時(shí)，乙醇可對(duì)大鼠行為能力產(chǎn)生影響，乙醇屬于水溶脂溶性物質(zhì)，可透過(guò)血腦屏障，大劑量攝入乙醇，可抑制呼吸中樞[13]，使受試動(dòng)物呼吸頻率減慢，并且在本研究的前期預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，大鼠在攝入乙醇1周后，出現(xiàn)了明顯行為異常，表現(xiàn)為躁動(dòng)，且更具有攻擊性，群養(yǎng)大鼠出現(xiàn)攻擊同類行為，動(dòng)物活動(dòng)量增多。結(jié)合上述觀點(diǎn)，攝入乙醇可使攝氧量減少、耗氧量增加，導(dǎo)致機(jī)體缺氧，而機(jī)體低氧狀態(tài)也會(huì)造成氧自由基的增加[14]，從而加速ox-LDL在體內(nèi)的蓄積。

本研究發(fā)現(xiàn)一定劑量的乙醇攝入可引起高脂狀態(tài)下的機(jī)體血清內(nèi)ox-LDL升高，其機(jī)制可能為，乙醇攝入后體內(nèi)產(chǎn)生大量的氧自由基，并且破壞體內(nèi)的氧化還原平衡，在氧自由基的作用下，過(guò)多的LDL被氧化修飾成ox-LDL且在體內(nèi)蓄積。而在近十余年的國(guó)內(nèi)外研究中，已確認(rèn)ox-LDL與動(dòng)脈粥樣硬化（AS）存在必然聯(lián)系[15]，并且其在體內(nèi)的水平與AS發(fā)生率成正相關(guān)[16]，如ox-LDL能促進(jìn)人體內(nèi)巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等分泌IL-6、TNF-α等因子，可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，及影響內(nèi)皮細(xì)胞的代謝，從而導(dǎo)致血管內(nèi)皮受損，并且高脂狀態(tài)同樣具有損傷內(nèi)皮細(xì)胞的功能[17]。并且有研究指出，人體內(nèi)ox-LDL水平的增高，會(huì)引起血管內(nèi)皮細(xì)胞變性，乃至壞死，使其局部從主動(dòng)脈壁上分離，為形成脂質(zhì)條紋及脂質(zhì)池創(chuàng)造先決條件[18]，ox-LDL與動(dòng)脈粥樣硬化之間關(guān)系的研究中取得了大量進(jìn)展的同時(shí)，還存在著諸多的疑問(wèn)[19]，對(duì)此，可提出一個(gè)假設(shè)，針對(duì)乙醇攝入加速AS的發(fā)生與發(fā)展的氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)中，其機(jī)制之一可能與乙醇致ox-LDL過(guò)內(nèi)外對(duì)脂蛋白相關(guān)磷脂酶 A2（Lp-PLA2）的研究中發(fā)現(xiàn)，ox-LDL與Lp-PLA2在血管局部炎癥反應(yīng)中，存在直接關(guān)系。關(guān)于Lp-PLA2，Steen等[20]的研究表明，使用Lp-PLA2抑制劑，能顯著降低心血管事件的發(fā)生率。而對(duì)于Lp-PLA2，其具有對(duì)心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的價(jià)值[21]，人體內(nèi)Lp-PLA2水平與急性心肌梗死、不穩(wěn)定性心絞痛存在正相關(guān)。

綜上所述，在攝入乙醇后，機(jī)體可加速產(chǎn)生并蓄積ox-LDL，而ox-LDL則直接影響到AS及心血管事件的發(fā)生，由此，可在乙醇對(duì)AS影響的氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)中得到一點(diǎn)啟示，ox-LDL在其中扮演了重要的角色。在國(guó)外針對(duì)ox-LDL與動(dòng)脈粥樣硬化及心血管疾病的相關(guān)的臨床研究中，已表明在健康人群中使用抗氧化劑對(duì)AS和心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展并無(wú)獲益，但在高危患者中使用抗氧化劑仍可獲益[22]。在臨床工作中，長(zhǎng)期攝入乙醇的患者，其存在一系列原因的導(dǎo)致體內(nèi)氧化還原失衡，從而造成LDL被過(guò)多的氧化修飾成ox-LDL，對(duì)于因此而造成的心腦血管疾病風(fēng)險(xiǎn)，是否可通過(guò)糾正體內(nèi)的氧化還原失衡而得到改善，還需要臨床研究加以證實(shí)。

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