清熱潤燥口服液抗炎、祛痰作用的實驗研究

魏丹霞 譚艷云 徐靜逍 程馨緣 楊仁華 陸家龍

摘要：目的研究清熱潤燥口服液的抗炎、祛痰作用。方法通過小鼠背部瓊脂肉芽腫實驗及小鼠氣管段酚紅實驗，觀察清熱潤燥口服液在抗炎、祛痰方面的作用。結果清熱潤燥口服液能明顯抑制肉芽腫的形成（P<005）；能增加氣管對酚紅的排泌量（P<005）。結論清熱潤燥口服液具有抗炎作用、高劑量具有祛痰作用。

關鍵詞：清熱潤燥口服液；抗炎作用；祛痰作用

中圖分類號：R2855文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2017）05-0078-02

清熱潤燥口服液來源于云南省名老中醫(yī)陸家龍的三十余年的臨床經驗方清熱潤燥方（桑葉、蘆根、麥冬、沙參、茯苓、陳皮等13味天然藥），經過現(xiàn)代制劑工藝加工而成。臨床研究證明該方具有清熱養(yǎng)陰，潤燥止咳作用。主要用于慢性支氣管炎急性發(fā)作、感冒后咳嗽、咽炎等燥咳患者，臨床療效佳、安全無毒。為確保該口服液的順利研發(fā)，現(xiàn)將其抗炎、祛痰作用的藥效學實驗報告如下。

1材料

11實驗動物健康KM小鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，SPF級，動物合格號：0021916，實驗動物及實驗動物飼養(yǎng)觀察均由昆明醫(yī)科大學實驗動物學部提供。

12受試藥物清熱潤燥口服液（桑葉、蘆根、麥冬、沙參、茯苓、陳皮等13味天然藥組成）由昆明市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供（294 g原生藥/mL）。藥物保存于4～8℃冰箱中備用，使用前復溫至20～25℃使用。

13主要試劑瓊脂糖（賽百盛，純度：99%）、地塞米松磷酸鈉注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，國藥準字：H12020514）、生理鹽水（昆明南疆制藥有限公司，國藥準字：H33020484）、氯化銨（天津市化學試劑三廠）、苯酚紅（上海三愛思試劑有限公司）、氫氧化鈉（西隴化工股份有限公司，許可證號：XK13-201-00153）。

14儀器分析天平（Sartorius，德國）、酶標儀（Thermo，美國）。

2實驗方法

21抗炎藥效學實驗研究

211給藥劑量的確定[1]根據(jù)標準動物的等效劑量折算系數(shù)法（Bios氏原法），來進行不同動物間的劑量換算，進而得出治療劑量。低劑量為治療劑量的2倍，中劑量為治療劑量的5倍，高劑量為治療劑量的10倍。實驗中采用的劑量為清熱潤燥口服液低劑量組390 mL/kg/d、中劑量組975 mL/kg/d、高劑量組1950 mL/kg/d，地塞米松組100 mg/kg/d。

[KG（0.25mm]212對抗炎作用的影響——小鼠背部瓊脂肉芽腫試驗[2]取KM小鼠50只，每只背部一次性皮下注射2%的瓊脂糖溶液01 mL后，建立小鼠異物性炎癥模型，隨機分為5組：陰性對照組、清熱潤燥口服液低、中、高3個劑量組和地塞米松組，每組10只。注射當天開始灌胃給藥，陰性對照組按01 mL/10 g體重灌胃生理鹽水，其他各實驗組灌胃對應藥物，連續(xù)10天，每天1次。以上各組均于末次給藥1 h后，脫頸處死，自皮下將瓊脂連同周圍結締組織一起取出，剔除脂肪組織，用分析天平稱質量，并記錄肉芽的質量。將稱得的質量減去瓊脂質量即得肉芽腫的質量，比較各組的肉芽重，肉芽抑制率。具體計算公式：肉芽抑制率（%）=（（陰性對照組肉芽質量-用藥組肉芽質量）/陰性對照組肉芽質量）×100。[KG）]

22祛痰藥效學實驗研究

[JP2]221給藥劑量的確定[1]根據(jù)標準動物的等效劑量折算系數(shù)法（Bios氏原法），來進行不同動物間的劑量換算，進而得出治療劑量。低劑量為治療劑量的2倍，中劑量為治療劑量的5倍，高劑量為治療劑量的10倍。實驗中采用的劑量為清熱潤燥口服液低劑量組390 mL/kg/d、中劑量組975 mL/kg/d、高劑量組1950 mL/kg/d，氯化銨100 g/kg/d。[JP]

222清熱潤燥口服液對小鼠的祛痰作用——氣管段酚紅法[3]取KM小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，即空白對照組、陽性對照組（藥物濃度為：10 g/kg氯化銨）、清熱潤燥口服液高劑量組、中劑量組和低劑量組，[HJ2.4mm]每組10只。實驗前各組昆明小鼠禁食不禁水12 h，然后空白對照組小鼠按01 mL/10 g體重灌胃生理鹽水，其余各組按劑量給藥，連續(xù)8 d，1次/d。末次給藥30 min后，分別腹腔注射005%酚紅溶液10 mL/kg，注射苯酚紅溶液30 min后脫頸椎處死小鼠，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2 mL生理鹽水的試管中，再加4% NaOH01 mL，用酶標儀，波長546 nm測OD值，用酚紅做一標準曲線，根據(jù)曲線計算各組酚紅含量（ug/mL）。

23統(tǒng)計學方法各實驗組數(shù)據(jù)采用“均值±標準差（x[TX-*3/8]±s）”表示，多組多重比較使用One-way ANOVA單因素方差分析，以P<005各組間差異具有統(tǒng)計學意義；兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，以P<005為差異有統(tǒng)計學意義。

24結果

241對瓊脂肉芽腫小鼠的影響清熱潤燥口服液能明顯抑制炎性肉芽腫的形成，與生理鹽水組比較差異均具有統(tǒng)計學意義，P<005。但抑制率均不如地塞米松組高，以上3個劑量組的清熱潤燥口服液對肉芽腫形成的抑制與地塞米松組比較均具有統(tǒng)計差異，P<005，結果見表1。

242對小鼠氣管酚紅排泌的影響清熱潤燥口服液975和1950 mL/kg兩個劑量組和100 g/kg的氨化銨能明顯增強氣管對酚紅的分泌能力，與生理鹽水組比較差異具有統(tǒng)計學意義，P<005，但兩個劑量組的清熱潤燥口服液的氣管分泌酚紅量都不如氯化銨的多；390 mL/kg清熱潤燥口服液組能增加氣管對酚紅的分泌量，當與生理鹽水組比較，差異不具有統(tǒng)計學意義，P>005，結果見表2。

3討論

咳嗽是一種常見的呼吸道癥狀，為機體的保護性反應，有利于清除呼吸道分泌物和有害因子，但長期或過于頻繁的咳嗽則會對機體造成一個的損傷?，F(xiàn)代研究認為咳嗽反應與呼吸道的炎癥和黏蛋白分泌增加直接相關。云南省名老中醫(yī)陸家龍教授[4]認為由于昆明地區(qū)“干燥”的氣候特點加之居民喜食辛辣香燥之品，呼吸道疾病發(fā)生時咳嗽常常表現(xiàn)“干咳”、“嗆咳不爽”、“咳嗽數(shù)聲而痰不出”、“澀痰”難咯，咳嗽纏綿難愈等，這是以內外燥熱夾擊，熱灼津傷，肺陰虧虛所致。其三十余年的臨床經驗方（清熱潤燥方），方中桑葉疏散風熱，止咳化痰；蘆根清熱生津；麥冬、沙參滋陰清熱、潤肺止咳；苡仁健脾，清熱排膿；陳皮行氣健脾、化痰止咳；冬瓜子清肺化痰，諸藥配伍共奏清熱養(yǎng)陰，潤燥止咳之功。本研究證明了清熱潤燥口服液對KM小鼠瓊脂肉芽腫有抑制作用及增加氣管酚紅排泌作用，表明其具有抗炎、祛痰作用。本研究為清熱潤燥口服液后期臨床應用提供有效的實驗依據(jù)。

參考文獻：

[1]黃繼漢，黃曉暉，陳志揚，等藥理試驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算[J].中國臨床藥理學與治療學，2004，9（9）：1069-1072

[2]徐淑云藥理實驗方法學（第三版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002911-912

[3]陳奇中藥藥理研究方法學[M].2版，北京：人民衛(wèi)生出版社2006，624-625

[4]魏丹霞，施興黔，陸家龍陸家龍導師辨證治療昆明地區(qū)感冒后咳嗽的特色[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2010，31（4）：1-3