李靜

（昆明積大制藥股份有限公司，云南 昆明 650106）

反相高效液相色譜法測定曲安奈德注射液中苯甲醇的含量

李靜

（昆明積大制藥股份有限公司，云南 昆明 650106）

目的：建立反相高效液相色譜法測定曲安奈德注射液中苯甲醇的含量。方法：ODS柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；以甲醇-水（60∶40）為流動相；流速1.0 mL/min，檢測波長為240 nm。結(jié)果：系統(tǒng)適用性良好。苯甲醇峰及曲安奈德峰與最近雜質(zhì)峰均可以有效分離，分離度均＞1.5，苯甲醇定量限為16 ng。苯甲醇檢測限為4 ng，平均回收率為98.23%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.43%。苯甲醇在0.2302～2.3019 mg/mL內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，以濃度對峰面積進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝10.86786X＋0.0063，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999。方法精密度良好。室溫放置12 h是穩(wěn)定的。方法耐用性良好。結(jié)論：該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，可用于測定曲安奈德注射液苯甲醇的含量。

反相高效液相色譜法；曲安奈德注射液；苯甲醇；含量測定

曲安奈德[1]注射液為長效糖皮質(zhì)激素，具有強(qiáng)而持久的抗炎、抗過敏作用。用于皮質(zhì)類固醇類藥物治療的疾病，如變態(tài)反應(yīng)性疾病（用于患者處于嚴(yán)重虛弱狀態(tài)，使用傳統(tǒng)藥物無效時），皮膚病，彌漫性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腱鞘炎，瘢痕疙瘩，肱骨外上髁炎，鼻炎疾病[2-5]。當(dāng)口服皮質(zhì)類固醇類藥物不可行時，肌內(nèi)注射給藥對于以上疾病的療效顯著。曲安奈德首先由Fried及Bernstein等于1958年合成，由于在結(jié)構(gòu)中9-位引入氟，其抗炎作用比氫化可的松大20倍。《英國藥典》《美國藥典》及《日本藥典》均有該品種的收載。德國亞斯平大藥廠、美國施貴寶大藥廠、意大利利沙大藥廠等及很多國家均有其混懸注射液生產(chǎn)，并已在市場上銷售五十多年。曲安奈德注射液為我司已上市品種[6]，處方中有苯甲醇，苯甲醇為抑菌劑?！睹绹幍洹贰队幍洹?、人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）Q6A規(guī)范規(guī)定制劑中防腐劑的含量測定要求[7]，歐洲、中東和非洲地區(qū)（EMEA）規(guī)定制劑中防腐劑的使用和質(zhì)控。制劑中使用的防腐劑均應(yīng)制訂內(nèi)控藥用標(biāo)準(zhǔn)，故建立苯甲醇含量測定的方法并進(jìn)行方法驗(yàn)證，在分析方法開發(fā)過程中發(fā)現(xiàn)，本品有關(guān)物質(zhì)[8]測定方法可同時進(jìn)行苯甲醇的定量測定，故在有關(guān)物質(zhì)測定的同時用外標(biāo)法對苯甲醇含量進(jìn)行測定。

1 儀器與藥品

1.1 儀器

SHIMADZU LC-20AT高效液相色譜儀（LC-20AT型泵，SPD-20A型紫外檢測器，SPD-M20A型二極管陣列檢測器，SIL-20AC型自動進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱，CBM-20Avlite系統(tǒng)控制器，LC solution色譜工作軟件）。

1.2 試劑

曲安奈德對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100055-200302和100055-201103），用于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、鑒別和含量測定。曲安西龍對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100333-200201），用于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。苯甲醇對照品（于西格瑪公司，批號：SZBB1660V，含量：99.9%）。甲醇（MERK公司，批號：0938907421）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑；以甲醇-水（60∶40）為流動相；流速1.0 mL/min，柱溫30℃，檢測波長為240 nm。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的配制 精密稱取苯甲醇適量，加流動相稀釋制成每1 mL中約含0.9 mg的溶液，作為苯甲醇。

2.2.2 供試品溶液的配制 精密量取曲安奈德注射液5 mL，置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取曲安奈德對照品、曲安西龍對照品與苯甲醇對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成每1 mL中約含曲安奈德5 mg、曲安西龍5 mg和苯甲醇0.9 mg的混合溶液，理論板數(shù)按曲安奈德峰計算不低于5000，苯甲醇和曲安西龍的分離度應(yīng)不低于1.5，曲安奈德與曲安西龍的分離度應(yīng)＞15。見表1，圖1，圖2。

表1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果：苯甲醇與曲安西龍的分離度為3.21，曲安西龍與曲安奈德的分離度為20.75，理論板數(shù)按曲安奈德峰計算為9 431，系統(tǒng)適用性良好。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)圖譜

圖2 曲安奈德注射液供試品溶液圖譜

精密稱取苯甲醇對照品約112 mg置25 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為苯甲醇對照品貯備溶液。精密量取苯甲醇對照品貯備溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，按有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下測定方法檢測，以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。見表2，圖3。

表2 苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)曲線試驗(yàn)結(jié)果

圖3 苯甲醇線性圖

以濃度對峰面積進(jìn)行線性回歸，苯甲醇對照品溶液在0.2302～2.3019 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 準(zhǔn)確度

采用加樣回收方法，按本品處方，精密稱取除苯甲醇的物料，制成不含苯甲醇的空白混懸溶液，按處方中苯甲醇含量（9 mg/mL）的50%，100%和150%分別進(jìn)行配料，各得3個配方樣品，每個配方分別量取3份樣品，按照有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下測定方法進(jìn)行檢測，3個濃度的平均回收率為98.23%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.43%，方法準(zhǔn)確度良好。見表3。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

同一批樣品，同一天內(nèi)，按含量測定方法重復(fù)測定6次，測定結(jié)果表明，方法的精密度良好。見表4。

2.7 定量限和檢測限

按照含量測定方法進(jìn)行測試，逐級稀釋樣品，測其峰高，同時測定相同條件下的色譜基線噪聲，按信噪比約為10∶1時的對應(yīng)濃度作為苯甲醇定量限。定量限為16 ng。按信噪比約為3∶1時的對應(yīng)濃度作為檢測限。苯甲醇檢測限為4 ng，

2.8 中間精密度

分別由2名分析人員，使用不同的儀器和不同品牌的色譜柱，測試3批供試品中苯甲醇的含量，不同分析人員采用不同的儀器及色譜柱對3批樣品進(jìn)行檢測，苯甲醇含量的RSD值分別為1.99%，2.80%和0.30%，方法中間精密度良好。見表5。

表3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.9 溶液穩(wěn)定性

取供試品溶液分別在室溫放置0，2，4，6，8，12 h取樣，測定苯甲醇本品在室溫放置12 h，苯甲醇峰面積RSD為0.26%，本品在室溫放置12 h是穩(wěn)定的。見表6。

2.10 耐用性

配制1份供試品溶液，考察流動相比例、流速、檢測波長、色譜柱等微小變動對測定結(jié)果的影響。見表7。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表5 不同分析人員采用不同的儀器及色譜柱對3批樣品進(jìn)行檢測

表6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表7 耐用性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論：流動相比例、流速、檢測波長、色譜柱等微小變動對苯甲醇含量的測定結(jié)果無影響。苯甲醇含量的RSD＜5.0%，方法耐用性良好。

3 討論

3.1 參照《中華人民共和國藥典》（2010年版）二部曲安奈德注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗(yàn)，采用色譜柱（4.6 mm×200 mm，5 mm），流速1.0 mL/min，曲安奈德峰保留時間約22 min，主峰出峰太慢，故對流動相比例進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，調(diào)整后曲安奈德峰的保留時間約13 min，出峰時間合適。

3.2 輔料苯甲醇在有關(guān)物質(zhì)測定方法中有吸收峰。通過對苯甲醇含量進(jìn)行定量研究，說明該方法能準(zhǔn)確測定苯甲醇含量。在測定有關(guān)物質(zhì)同時能定量測定苯甲醇含量。

[1]彭穗瑋,李益中.曲安奈德的藥理作用與臨床應(yīng)用[J].新醫(yī)學(xué),2001,32(1):45-46.

[2]劉海平,吳彥,劉珍梅.曲安奈德注射液封閉治療腱鞘炎的療效觀察[J].臨床醫(yī)藥實(shí)踐,2007,16(12):1163-1164.

[3]王藝穎,敬梁渝,楊文華.曲安奈德注射液治療瘢痕疙瘩163例療效觀察[J].西南軍醫(yī),2010,12(5):880-881.

[4]楊曉,劉懿怡,黃曉娟.曲安奈德注射液封閉治療肱骨外上髁炎的護(hù)理體會[J].中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué),2013,8(6):486-487.

[5]畢維珍,張美蘭,賈根梅.曲安奈德注射液肌肉注射治療變應(yīng)性鼻炎58例分析[J].中國民族民間醫(yī)藥,2012,21(21):91-92.

[6]黃守堅(jiān).曲安奈德注射液-成功改造天然藥物的典范[J].現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué),2008,34(4):313-316.

[7]崔雷,王曉玲.防腐劑在制劑中的應(yīng)用及質(zhì)量控制[C].中華中醫(yī)藥學(xué)會制劑分會學(xué)術(shù)年會.2004.

[8]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2015年版)二部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:362.

本文編輯：蘇日力嘎

Determination of Benzyl Alcohol Content in Triamcinolone Acetonide Injection by RP-HPLC

Li Jing

(Kunming Jida Pharmaceutical Co. Ltd, Yunnan Kunming 650106, China)

Objective：To establish a RP-HPLC method for determination of benzyl alcohol content in Triamcinolone Acetonide Injection. Methods：ODS column (250 mm×4.6 mm, 5μm) was used serving methanolwater (60∶40) as the mobile phase at a flow rate of 1. 0 mL / min and a detection wavelength of 240 nm. Results：The system showed good suitability. Benzyl alcohol, triamcinolone acetonide and the nearest impurity peaks were effectively separated, of which the separation degrees were more than 1.5. The limit of quantitation (LOQ) of benzyl alcohol was 16 ng. wihle the limit of detection (LOD) was 4 ng. The average recovery was 98.23%, with a RSD of 0.43%. The linear range of benzyl alcohol was 0.230 2～2.301 9 mg / mL. Linear regression was performed with peak area against concentration, of which the regression equation was Y＝10.867 86X + 0.006 3, with a correlation coefficient (r) of 0.999 9. The method showed good precision and durability. The sample showed high stability after storage at room temperatre for 12 h. Conclusion：The method is rapid, sensitive and accurate, which may be used for the determination of benzyl alcohol content in triamcinolone acetonide injection.

Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC); Benzyl Alcohol; Triamcinolone Acetonide Injection; Content Determination

R927.2

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.04.007

2016-11-09

李靜，女，藥師，工程師。研究方向：新藥研發(fā)與藥物分析。E-mail：quitelj@126.com