魏智民，張維強，高 峰，吳云波，張國慶，劉哲峰，焦順昌

1中國人民解放軍總醫(yī)院腫瘤科，北京 1008532中國人民解放軍聯(lián)合參謀部警衛(wèi)局保健處，北京 100017

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·論 著·

淋巴細(xì)胞亞群對晚期非小細(xì)胞肺癌患者化療效果及遠(yuǎn)期生存的影響

魏智民1，2，張維強2，高 峰2，吳云波1，張國慶2，劉哲峰1，焦順昌1

1中國人民解放軍總醫(yī)院腫瘤科，北京 1008532中國人民解放軍聯(lián)合參謀部警衛(wèi)局保健處，北京 100017

目的 評估淋巴細(xì)胞亞群對晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者化療效果及遠(yuǎn)期生存的影響。方法 以125例接受紫杉醇±鉑類、培美曲塞±鉑類或其他一線化療方案的晚期NSCLC患者為研究對象，采用流式細(xì)胞儀檢測化療前及化療2個周期后的外周血21項淋巴細(xì)胞亞型的表達(dá)情況，根據(jù)影像學(xué)檢查結(jié)果評價化療療效，分析淋巴細(xì)胞亞群對患者療效和無進(jìn)展生存時間(PFS)及總生存時間(OS)的影響。結(jié)果 不同化療療效組患者化療前的淋巴細(xì)胞亞群間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；2周期化療后，完全緩解(CR)+部分緩解(PR)組、疾病穩(wěn)定(SD)組和疾病進(jìn)展(PD)組患者的CD4+CD29+細(xì)胞百分比分別為(22.42±7.88)%、(21.88±6.81)%和(16.87±5.28)%，其中，PD組明顯低于CR+PR組(P=0.013)和SD組(P=0.009)。中位PFS為7.07個月，中位OS為23.00個月。COX多因素回歸分析結(jié)果顯示，化療前HLA-DR+細(xì)胞(HR：1.03，95%CI：1.01～1.05，P<0.001)及CD3+HLA-DR+細(xì)胞(HR：1.05，95%CI：1.01～1.08，P<0.001)表達(dá)水平與患者的OS呈顯著正相關(guān)。結(jié)論 化療后CD4+CD29+T淋巴細(xì)胞水平升高可能提示患者的化療效果較好?；熐癏LA-DR+細(xì)胞及CD3+HLA-DR+細(xì)胞在外周血中所占百分比越高，可能提示患者的預(yù)后越好。

淋巴細(xì)胞亞群；非小細(xì)胞肺癌；化療；遠(yuǎn)期生存

ActaAcadMedSin，2017,39(3)：371-376

外周血淋巴細(xì)胞亞群分析是評價患者機體免疫功能狀態(tài)方法之一。手術(shù)、放療、化療等抗腫瘤治療對腫瘤患者免疫功能影響的報導(dǎo)已有很多[1- 3]，但以往研究所涉及的淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)較少，難以全面、準(zhǔn)確地評估患者的免疫功能狀態(tài)，而淋巴細(xì)胞亞群對晚期非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者化療療效及遠(yuǎn)期生存的影響卻鮮有報導(dǎo)。本研究以125例晚期NSCLC患者為研究對象，對21項外周血淋巴細(xì)胞亞群的表型進(jìn)行了檢測，評估了淋巴細(xì)胞亞群對晚期NSCLC患者化療效果及遠(yuǎn)期生存的影響。

對象和方法

對象 2008年11月至2013年12月在中國人民解放軍總醫(yī)院腫瘤內(nèi)一科收治的經(jīng)組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查確診的晚期NSCLC患者，入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)疾病分期為ⅢB期或Ⅳ期，既往未行化療。(2)有影像學(xué)可評估病灶，根據(jù)實體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)1.1版(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST Version 1.1)，至少有1個單徑可測量病灶，其最長徑采用螺旋CT測量≥10 mm；任何接受過放療的病灶均不能作為靶病灶。(3)年齡18～75歲，預(yù)期生存時間大于12周。(4)美國東部腫瘤協(xié)作組(Eastern Cooperative Oncology Group，ECOG)狀態(tài)評分為0～2分。(5)器官功能水平必須符合下列要求：中性粒細(xì)胞絕對計數(shù)(absolute neutrophil count，ANC)≥1.5×109/L，血小板≥100×109/L，血紅蛋白≥9000 g/L；肝臟：血清膽紅素≤1.5倍正常值上限，谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase，AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)≤2.5倍正常值上限；腎臟：血清肌酐≤1.5倍正常值上限；肌酐清除率≥50 ml/min。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有影像學(xué)或是腦脊液病理檢查證實的脊髓、脊膜或是腦膜的腫瘤轉(zhuǎn)移(無癥狀的腦轉(zhuǎn)移除外)；(2)任何不穩(wěn)定系統(tǒng)性疾病(包括活動性感染、控制不佳高血壓、不穩(wěn)定性心絞痛、充血性心力衰竭、肝、腎或代謝性疾病)；(3)5年內(nèi)患有任何其他惡性腫瘤(完全治愈的宮頸原位癌、基底細(xì)胞、鱗狀上皮細(xì)胞皮膚癌除外)。所有研究對象均按照美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(National Comprehensive Cancer Network，NCCN)指南中推薦的給藥劑量給予多西他賽/紫杉醇+順鉑/卡鉑、培美曲塞二鈉+順鉑/卡鉑或其他方案(包括吉西他濱+順鉑/卡鉑、長春瑞濱+順鉑/卡鉑、依托泊苷+順鉑/卡鉑等)化療。本研究經(jīng)中國人民解放軍總醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

淋巴細(xì)胞亞群的檢測 所有患者均于第1周期化療前1 d及第2周期化療后第20天清晨空腹取EDTA-Na2外周靜脈抗凝血2～3 ml，檢測前取患者EDTA-Na2抗凝血100 μl，分別加入各表型相應(yīng)的熒光標(biāo)記抗體10 μl(CD8-FITC/CD4-PE/CD3-PC5標(biāo)記三色熒光素抗體及其同型陰性對照，CD3-FITC/CD56-PE/CD16-PC5標(biāo)記三色熒光素抗體及其同型陰性對照，CD8-FITC、CD45RO-FITC、CD28-FITC、CD29-FITC、CD25-PE、CD45RA-PE、HLA-DR-PE、CD8-ECD、CD19-ECD、CD3-PC5、CD4-PC7標(biāo)記單色熒光素抗體及FITC、PE、ECD、PC5、PC7單色同型陰性對照均購自美國Bechman-Coulter公司)，振蕩混勻后避光20 min，采用Q-prep自動溶血儀溶血(美國Bechman-Coulter公司)，5 min后采用Cytometer FC 500 MPL流式細(xì)胞儀(美國Bechman-Coulter公司)進(jìn)行檢測，流式細(xì)胞儀分析功能軟件進(jìn)行雙參數(shù)獲得數(shù)據(jù)分析。激光光源為15 mW的氬離子激光，波長為488 nm。測定前用質(zhì)控微球(直徑5 μm，Immunothech)調(diào)校儀器，以保證其熒光檢測的變異系數(shù)(coefficient of variance，CV)值<2%。計數(shù)10 000個細(xì)胞，每個標(biāo)本用同型抗體作自身陰性對照，然后檢測各細(xì)胞表型的陽性表達(dá)率。

療效評價 根據(jù)影像學(xué)檢查結(jié)果評價化療療效，療效評價標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)RECIST Version 1.1。無進(jìn)展生存時間(progression-free survival，PFS)的計算為患者診斷明確至第1次發(fā)生疾病進(jìn)展或任何原因死亡的時間?？偵鏁r間(overall survival，OS)的計算為患者診斷明確至死亡或失訪時間。

隨訪 定期門診、住院或電話隨訪研究對象，最后隨訪截止時間為2016年11月18日。共入組患者154例，其中29例患者一線化療后回當(dāng)?shù)乩^續(xù)化療而失訪，最后實際獲得病例資料完整的研究對象為125例。

統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)以中位數(shù)及四分位數(shù)間距表示，組間差異比較采用方差分析，PFS和OS的計算采用Kaplan-Meier法，PFS及OS的影響因素分析采用Cox比例風(fēng)險回歸分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一般情況 共有125例患者入組，其中，男80例，女45例，平均年齡(52.9±11.1)歲；腺癌111例，鱗癌14例；ECOG評分0、1、2分分別為8、105、12例；EGFR、Alk、T790M、C-Met、K-ras突變、突變陰性和未檢測到突變分別為18、1、1、1、1、20、87例；腦轉(zhuǎn)移5例，無腦轉(zhuǎn)移120例；使用酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitors，TKI)93例，未使用32例；采用紫杉醇±鉑類一線化療方案61例，培美曲塞二鈉±鉑類方案47例，其他方案17例；2周期化療后部分緩解(partial remission，PR)46例，疾病穩(wěn)定(stable disease，SD)64例，疾病進(jìn)展(progressive disease，PD)15例；隨訪結(jié)束時死亡110例。

化療前后不同化療療效組患者淋巴細(xì)胞亞群的差異 不同化療療效組患者化療前的淋巴細(xì)胞亞群間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；2周期化療后，完全緩解(complete remission，CR)+PR組、SD組和PD組患者的CD4+CD29+細(xì)胞百分比分別為(22.42±7.88)%、(21.88±6.81)%和(16.87±5.28)%，其中，PD組明顯低于CR+PR組(P=0.013)和SD組(P=0.009)(表1)。

淋巴細(xì)胞亞群對PFS和OS的影響 截至最后一次隨訪時間為止，125例患者均完成隨訪，中位PFS為7.07個月，中位OS為23.00個月(圖1、2)。在校正了年齡、性別、EGFR突變情況、化療方案、TKI使用情況和TKI使用時間等因素后，COX多因素回歸分析結(jié)果顯示，化療前HLA-DR+細(xì)胞(HR：1.03，95%CI：1.01～1.05，P<0.001)及CD3+HLA-DR+細(xì)胞(HR：1.05，95%CI：1.01～1.08，P<0.001)表達(dá)水平與患者的OS呈顯著正相關(guān)。

圖 1 晚期非小細(xì)胞肺癌患者的無進(jìn)展生存曲線

Fig 1 Progression-free survival curve of patients with advanced non-small cell lung cancer

圖 2 晚期非小細(xì)胞肺癌患者的總生存時間曲線

Fig 2 Overall survival curve of patients with advanced non-small cell lung cancer

表 1 不同化療療效患者淋巴細(xì)胞亞群的差異(x-±s,%)

CR：完全緩解；PR：部分緩解；SD：疾病穩(wěn)定；PD：疾病進(jìn)展；與CR+PR組比較，aP=0.013；與SD組比較，bP=0.009

CR：complete remission；PR：partial remission；SD：stable disease；PD：progressive disease；aP=0.013 compared with CR+PR group；bP=0.009 compared with SD group

討 論

肺癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率均高居榜首的惡性腫瘤。隨著腫瘤免疫學(xué)的發(fā)展以及“免疫編輯”學(xué)說的興起和完善[4- 5]，越來越多的研究表明，肺癌的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后與機體的免疫功能狀態(tài)、腫瘤免疫微環(huán)境等因素密切相關(guān)。淋巴細(xì)胞亞群是機體免疫系統(tǒng)中非常重要的細(xì)胞群，在機體免疫功能調(diào)節(jié)和特異性細(xì)胞免疫殺傷等方面起重要的作用。檢測肺癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群對于判斷患者免疫功能狀態(tài)具有一定的臨床價值，對于監(jiān)視腫瘤復(fù)發(fā)、評估預(yù)后、指導(dǎo)免疫治療等亦具有重要的臨床意義[6]。但是外周血中淋巴細(xì)胞并不是單一的細(xì)胞群。隨著免疫學(xué)研究的發(fā)展，除了經(jīng)典的CD3+、CD4+和CD8+T細(xì)胞亞群外，更多的在機體免疫功能調(diào)節(jié)方面起著非常重要作用的淋巴細(xì)胞亞群，比如Treg(CD4+CD25+)、CD45RA、CD45RO、CD28、HLA-DR、CD4+CD29+細(xì)胞等被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)[7- 8]。僅分析經(jīng)典的淋巴細(xì)胞變化并不能客觀、準(zhǔn)確地反映機體免疫功能變化情況。本研究檢測和分析了125例晚期NSCLC患者化療前后外周血21項淋巴細(xì)胞亞群的表型，擬通過多指標(biāo)淋巴細(xì)胞亞群檢測體系來評估免疫功能相關(guān)指標(biāo)對化療療效及遠(yuǎn)期生存的影響。

CD29是整合素家族中的β1鏈，該分子是多種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的受體。CD4+T細(xì)胞為輔助性T細(xì)胞，若該類細(xì)胞表面同時表達(dá)CD29分子即被認(rèn)為是輔助誘導(dǎo)T細(xì)胞。有研究認(rèn)為，CD4+CD29+細(xì)胞是機體Th1類細(xì)胞的一種，炎性物質(zhì)或炎性因子的刺激可以激活CD4+CD29+細(xì)胞，后者活化后可分泌Th1類細(xì)胞因子γ干擾素和腫瘤壞死因子α，進(jìn)而上調(diào)機體的免疫應(yīng)答，增強患者免疫功能[9]。而CD4+CD29+細(xì)胞若在某種病理生理狀態(tài)下出現(xiàn)減低則被認(rèn)為是早期反映機體免疫功能下降的標(biāo)志之一，并與患者的預(yù)后相關(guān)[10]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)一線化療方案2周期化療后，CR+PR/SD患者化療后的CD4+CD29+細(xì)胞百分比例較化療前升高，而PD患者化療后CD4+CD29+細(xì)胞百分比例較化療前降低；PD組患者外周血淋巴細(xì)胞亞群中CD4+CD29+細(xì)胞的百分比明顯低于CR+PR組和SD組，提示2周期化療后若患者的腫瘤得到控制，那么機體的免疫功能則可以通過化療對機體免疫格局的調(diào)整和對腫瘤抗原調(diào)變的雙重作用而得以增強[11]；若2周期化療后若患者的腫瘤持續(xù)進(jìn)展，那么腫瘤細(xì)胞本身與化療藥物的不良反應(yīng)對機體免疫功能將出現(xiàn)雙重打擊，患者的免疫功能勢必被削弱。本研究中其他反映機體免疫功能的淋巴細(xì)胞亞群無明顯變化，推測其原因可能有以下3種：(1)本研究只分析了2周期化療前后淋巴細(xì)胞亞群的變化情況，故只觀察到早期反映機體免疫功能變化的CD4+CD29+T細(xì)胞的在不同化療療效組的表達(dá)差異，而其他可以反映免疫功能遠(yuǎn)期影響的淋巴細(xì)胞亞群的變化差異并未顯現(xiàn)。(2)其他淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)對晚期NSCLC患者化療療效沒有影響。(3)本研究樣本量有限，不足以發(fā)現(xiàn)這種趨勢，今后需進(jìn)一步研究評估。

本研究還觀察了淋巴細(xì)胞亞群對患者PFS和OS的影響，結(jié)果顯示，在21項淋巴細(xì)胞亞群中，僅化療前HLA-DR+細(xì)胞及CD3+HLA-DR+細(xì)胞的高低與患者的OS呈正相關(guān)，其余指標(biāo)與患者的PFS和OS均無明顯相關(guān)性。HLA-DR抗原是HLA-Ⅱ 類抗原中的一種，可表達(dá)于多種免疫活性細(xì)胞的表面，如巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞，以及活化的T淋巴細(xì)胞。該類細(xì)胞的主要功能是將抗原性多肽片段提呈給CD4+輔助性T細(xì)胞，從而幫助機體免疫細(xì)胞識別外來抗原并啟動免疫反應(yīng)。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為HLA-DR+細(xì)胞在一定程度上可以反映機體T淋巴細(xì)胞的活化程度，HLA-DR+細(xì)胞百分比越高提示淋巴細(xì)胞的活化程度越高，機體的免疫應(yīng)答則越容易被外來抗原所激活[12]。本研究結(jié)果提示化療前HLA-DR+細(xì)胞以及CD3+HLA-DR+細(xì)胞的水平可以作為晚期NSCLC患者的預(yù)后指標(biāo)，HLA-DR+細(xì)胞以及CD3+HLA-DR+細(xì)胞在外周血中所占的百分比越高則患者的預(yù)后越好。推測其原因，考慮可能為淋巴細(xì)胞活化狀態(tài)下患者的免疫功能經(jīng)化療后可得以進(jìn)一步增強，而更好的免疫功能狀態(tài)延長了患者的生存時間。

既往有研究報道化療可降低患者的免疫功能[13]，但亦有研究認(rèn)為適度的化療可增強患者的免疫功能[11]。此外，也有研究認(rèn)為不同的化療方案將對腫瘤患者的免疫功能產(chǎn)生不同的影響[14]。本研究未分析化療以及不同化療方案對晚期NSCLC患者免疫功能的影響，今后將在后續(xù)研究中將進(jìn)一步探索這部分內(nèi)容。

[1]Schneider T，Hoffmann H，Dienemann H，et al. Immune response after radiofrequency ablation and surgical resection in non-small cell lung cancer [J].Semin Thorac Cardiovasc Surg，2016，28(2)：585- 592.doi：10.1053/j.semtcvs.2016.02.008.

[2]Talebian Yazdi M，Schinkelshoek MS，Loof NM，et al. Standard radiotherapy but not chemotherapy impairs systemic immunity in non-small cell lung cancer [J].Oncoimmunology，2016，5(12)：e1255393.doi：10.1080/2162402X.2016.1255393.

[3]Pircher A，Gamerith G，Amann A，et al. Neoadjuvant chemo-immunotherapy modifies CD4(+)CD25(+)regulatory T cells(Treg)in non-small cell lung cancer(NSCLC)patients [J].Lung Cancer，2014，85(1)：81- 87.doi：10.1016/j.lungcan.2014.04.001.

[4]Muenst S，L?ubli H，Soysal SD，et al. The immune system and cancer evasion strategies：therapeutic concepts [J].J Intern Med，2016，279(6)：541- 562.doi：10.1111/joim.12470.

[5]Merlo A，Santa SD，Dolcetti R，et al. Reverse immunoediting：When immunity is edited by antigen [J].Immunol Lett，2016，175：16- 20.doi：10.1016/j.imlet.2016.04.015.

[6]Ma QY，Huang DY，Zhang HJ，et al. Function of follicular helper T cell is impaired and correlates with survival time in non-small cell lung cancer [J].Int Immunopharmacol，2016，41：1- 7.doi：10.1016/j.intimp.2016.10.014.

[7]Hou PF，Zhu LJ，Chen XY，et al. Age-related changes in CD4+CD25+FOXP3+regulatory T cells and their relationship with lung cancer [J].PLoS One，2017，12(3)：e0173048.doi：10.1371/journal.pone.0173048.

[8]Paulsen EE，Kilvaer T，Khanehkenari MR，et al. CD45RO(+)memory T lymphocytes-a candidate marker for TNM-immunoscore in squamous non-small cell lung cancer [J].Neoplasia，2015，17(11)：doi：839- 848.10.1016/j.neo.2015.11.004.

[9]Zhu Y，F(xiàn)eng Y，Liu H，et al. CD4+CD29+T cells are blamed for the persistent inflammatory response in ulcerative colitis [J].Int J Clin Exp Pathol，2015，8(3)：2627- 2637.

[10]李姝君，吳艷霞，陳華林，等.非小細(xì)胞肺癌患者CD4+CD29+T細(xì)胞含量與復(fù)發(fā)及生存期的關(guān)系[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，36(9)：1215- 1220.

[11]謝治軍，薛重重，楊麗萍.化療后腫瘤免疫格局的改變及其意義的研究進(jìn)展[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2011，14(3)：320- 322.

[12]Laheurte C，Galaine J，Beziaud L，et al. Immunoprevalence and magnitude of HLA-DP4 versus HLA-DR-restricted spontaneous CD4+Th1 responses against telomerase in cancer patients [J].Oncoimmunology，2016，5(5)：e1137416.doi：10.1080/2162402X.2015.1137416.

[13]張錦英，朱陵君，盧凱華，等.非小細(xì)胞肺癌患者化療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，35(12)：6814- 6818.

[14]張國慶，趙宏，溫新宇，等.大腸癌患者化療前后淋巴細(xì)胞亞群變化[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報，2013，35(2)：155- 160.

Impact of Lymphocyte Subsets on Chemotherapy Efficacy and Long-term Survival of Patientswith Advanced Non-small-cell Lung Cancer

WEI Zhimin1，2，ZHANG Weiqiang2，GAO Feng2，WU Yunbo1，ZHANG Guoqing2，LIU Zhefeng1，JIAO Shunchang1

1Department of Medical Oncology，Chinese PLA General Hospital，Beijing 100853，China2Department of Health Care，Chinese PLA Joint Staff Headquarters Guard Bureau，Beijing 100017，ChinaCorresponding author：JIAO Shunchang Tel：010- 66939761，E-mail：jiaosc@vip.sina.com

Objective To analyze the impact of lymphocyte subsets on chemotherapy efficacy and long-term survival of patients with advanced non-small cell lung cancer(NSCLC).Methods Totally 125 NSCLC patients who had received first-line chemotherapy including paclitaxel and pemetrexed with/without platinum were enrolled in this study.Lymphocytes from peripheral blood were collected before and after two cycles of first-line chemotherapy.Flow cytometry was performed to determine the expressions of 21 fluorescence-labeled lymphocyte subsets.Based on the imaging findings，chemotherapy efficacy was evaluated，and impact of the lymphocyte subsets on progression-free survival(PFS)and overall survival(OS)were analyzed.Results The baseline peripheral lymphocyte subsets showed no significant difference among groups receiving different treatment protocols(allP>0.05).After 2 cycles of chemotherapy，the percentage of CD4+CD29+lymphocytes was(16.87±5.28)% in progressive disease group，which was significantly lower than those in complete remission+partial remission group [(22.42±7.88)%，P=0.013] and stable disease group [(21.88±6.81)%，P=0.009].The median PFS was 7.07 months and median OS was 23.00 months.Cox multivariable regression analysis showed that the percentages of HLA-DR+(HR：1.03，95%CI：1.01-1.05，P<0.001) and CD3+HLA-DR+lymphocytes (HR：1.05，95%CI：1.01-1.08，P<0.001)were positively correlated with OS.Conclusions The rise of CD4+CD29+T lymphocytes in patients after chemotherapy indicates good chemotherapy efficacy.Higher percentage of HLA-DR+and CD3+HLA-DR+lymphocytes in peripheral blood before chemotherapy predicts favorable prognosis.

lymphocyte subsets；non-small cell lung cancer；chemotherapy；long-term survival

總后勤部衛(wèi)生部保健專項科研課題(14BJZ47)Supported by the Specific Subjects on Healthcare by the Healthcare Division of the General Logistics Department of the People’s Liberation Army(14BJZ47)；第一、二位作者對本文貢獻(xiàn)一致 The first two authors contributed equally to this article

焦順昌 電話：010- 66939761，電子郵件：jiaosc@vip.sina.com

R734.2

A

1000- 503X(2017)03- 0371- 06

10.3881/j.issn.1000- 503X.2017.03.012

2017- 05- 23)