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      響應(yīng)面法優(yōu)化檸檬酸去除香菇中鎘工藝

      2017-07-20 10:21:51孫君社譚曉妍胡紹峰秦子芳寧慧娟張秀清
      食品科學(xué) 2017年14期
      關(guān)鍵詞:金屬鎘中鎘檸檬酸

      胡 靜,孫君社,譚曉妍,胡紹峰,秦子芳,寧慧娟,張秀清,*

      (1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院,北京 100083;2.農(nóng)業(yè)部規(guī)劃設(shè)計(jì)研究院,北京 100125)

      響應(yīng)面法優(yōu)化檸檬酸去除香菇中鎘工藝

      胡 靜1,孫君社2,譚曉妍1,胡紹峰1,秦子芳1,寧慧娟1,張秀清1,*

      (1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院,北京 100083;2.農(nóng)業(yè)部規(guī)劃設(shè)計(jì)研究院,北京 100125)

      為降低香菇中重金屬鎘的含量,本實(shí)驗(yàn)以干香菇為原料,采用檸檬酸為洗脫劑去除香菇中的重金屬鎘,并對去除方法進(jìn)行優(yōu)化。通過單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面優(yōu)化方法,分析檸檬酸濃度、pH值和轉(zhuǎn)速對香菇中鎘去除率的影響。結(jié)果表明,采用檸檬酸作為洗脫劑,在濃度0.32 mol/L、pH 5.0、30 ℃、轉(zhuǎn)速70 r/min條件下,香菇中鎘的去除率達(dá)到最大,為57.0%,去除后香菇中鎘殘留量最高為0.41 mg/kg,低于國家限量標(biāo)準(zhǔn)0.5 mg/kg。同時(shí)采用該方法處理后,香菇中多糖及蛋白質(zhì)含量損失少,較好地保留了香菇中的營養(yǎng)成分。該方法對降低香菇中鎘的殘留具有一定的應(yīng)用參考價(jià)值。

      香菇;鎘;檸檬酸;響應(yīng)面

      香菇(Lentinus edodes)為世界第二大食用菌,屬擔(dān)子菌亞門,層菌綱,傘菌目,側(cè)耳科,香菇屬,是一種木腐性真菌[1],主要分布在亞洲東南部,屬于熱帶亞熱帶環(huán)境中的真菌微生物[2]。香菇肉質(zhì)肥厚,味道鮮美,營養(yǎng)豐富,是我國重要的藥食同源真菌[3]。同時(shí)香菇中也含有豐富的藥效成分,如香菇多糖、香菇嘌呤及三萜類化合物等[4],具有抗病毒[5]、抗腫瘤[6-7]、抗氧化[8-10]、降血脂[11-14]等功效,常用于臨床治療中的輔助治療[15]。

      目前香菇生產(chǎn)多采用袋料栽培方式,但是在生長過程中香菇會(huì)富集袋料中的重金屬,其重金屬含量與栽培環(huán)境、栽培基質(zhì)和自身機(jī)制有關(guān)[16-17],大多數(shù)重金屬通過被動(dòng)運(yùn)輸進(jìn)入組織[18-19]。Schlecht等[20]研究發(fā)現(xiàn)食用菌對鎘的富集效果較為顯著,其鎘的富集量為蔬菜的10 倍。賈彥[21]分析了北京市食用菌重金屬含量,發(fā)現(xiàn)部分地區(qū)香菇樣品鎘超標(biāo)率達(dá)42.5%。食用菌中鎘主要分布在細(xì)胞壁上,其次分布在細(xì)胞質(zhì)和液泡中[22]。2015年新頒布的中華人民共和國供銷合作行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GH/T 1013—2015《香菇》中規(guī)定干菇中鎘(以Cd計(jì))的限量標(biāo)準(zhǔn)為0.5 mg/kg。

      針對香菇中重金屬鎘含量較高的情況,目前多從栽培香菇的袋料著手,控制原料的重金屬含量或添加外源物質(zhì)控制香菇中重金屬含量。邊銀丙[23]在袋料配方中提高石膏用量,通過鈣離子的競爭及pH值的改變,能有效降低香菇中鎘含量34%~45%。吳學(xué)謙[24]改變香菇培養(yǎng)料為50%~89%的斜發(fā)沸石粉、9%~42%的石灰石粉或石膏粉和2%~8%的硫酸鎂,可使栽培的香菇中重金屬含量降低10%~50%。但是當(dāng)前研究中對于采收后香菇子實(shí)體重金屬鎘的去除方法研究較少。檸檬酸作為一種有機(jī)酸,是常用的食品添加劑,也可作為環(huán)境友好型淋洗劑,在溫和酸性條件下可以絡(luò)合重金屬離子,以達(dá)到去除重金屬的效果,而且檸檬酸在好氧及厭氧條件下均可被生物降解[25]。單恩莉等[26]利用酶解結(jié)合檸檬酸浸泡處理對東海烏參中重金屬進(jìn)行去除,去除率達(dá)90%以上,且去除前后東海烏參中脂肪、蛋白質(zhì)、多糖成分無顯著變化。丁仲仲[27]利用檸檬酸去除壇紫菜中重金屬,去除效果良好,且去除前后壇紫菜感官和品質(zhì)無明顯變化。Wang Yi等[28]利用檸檬酸、乙二胺四乙酸二鈉(ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt,EDTA)和活性炭共同作用,對香菇多糖中重金屬鎘進(jìn)行去除,去除效果良好。

      本研究以檸檬酸為洗脫劑,通過單因素試驗(yàn)考察檸檬酸濃度、pH值及轉(zhuǎn)速[29-32]對香菇中鎘去除率的影響,在此基礎(chǔ)上利用響應(yīng)面分析法對鎘去除方法進(jìn)行優(yōu)化,得到檸檬酸去除鎘的適宜方法條件。同時(shí)對處理前后香菇中蛋白質(zhì)和多糖含量進(jìn)行了測定,較好地保留了香菇中的有效成分,得到了營養(yǎng)豐富、重金屬含量符合標(biāo)準(zhǔn)的香菇。

      1 材料與方法

      1.1 材料與試劑

      選取不同主產(chǎn)地、鎘含量較高的香菇傘為實(shí)驗(yàn)材料,為了便于后續(xù)加工,將香菇進(jìn)行切片處理。

      100 mg/L鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液 百靈威科技有限公司;苯酚、硫酸、硝酸、葡萄糖、氯化鎘、無水乙醇、檸檬酸、硫酸鉀、硫酸銅、甲基紅、EDTA、硼酸、氫氧化鈉、過氧化氫、溴鉀酚綠均為分析純。

      1.2 儀器與設(shè)備

      SPD50型自動(dòng)凱式定氮儀、SPT20消解爐 北京三品科創(chuàng)儀器公司;ICP 6300電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀 美國Thermo Fisher公司;MARS 5. MARS 6微波消解儀 美國CEM公司;TM-1901型雙光束紫外-可見光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;搖床太倉豪成儀器有限責(zé)任公司。

      1.3 方法

      1.3.1 鎘去除工藝流程

      香菇傘→均勻切片(厚度1~5 mm)→加入洗脫劑(選擇合適的洗脫劑濃度、pH值、轉(zhuǎn)速)→搖床洗脫→烘干、粉碎→鎘含量測定。

      1.3.2 香菇中重金屬鎘的測定

      采用微波消解系統(tǒng)消解樣品,于電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀中測定香菇中鎘含量。鎘去除率的計(jì)算公式如下所示:

      式中:C0為處理前香菇中鎘含量/(mg/kg);C為處理后香菇中鎘含量/(mg/kg)。

      1.3.3 洗脫劑的確定

      本實(shí)驗(yàn)選取水、檸檬酸溶液及 EDTA溶液分別作為香菇中重金屬鎘的洗脫劑,主要考察這3 種洗脫劑去除香菇中重金屬鎘的效果。選擇料液比1∶10、濃度0.16 mol/L、pH 6.0、轉(zhuǎn)速150 r/min實(shí)驗(yàn)條件,通過比較香菇中重金屬鎘的去除率確定最佳洗脫劑。

      1.3.4 單因素試驗(yàn)

      選取上述實(shí)驗(yàn)選定的溶液作為單因素試驗(yàn)的洗脫劑,以蒸餾水處理為對照組(CK),分別考察洗脫劑濃度、pH值和轉(zhuǎn)速3個(gè)因素對重金屬鎘去除率的影響。

      1.3.5 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化

      通過單因素試驗(yàn)確定影響鎘去除率的主要因素和最佳水平范圍,根據(jù)響應(yīng)面中的Box-Behnken原理,選擇洗脫劑濃度、pH值和轉(zhuǎn)速3 個(gè)因素,設(shè)計(jì)三因素三水平試驗(yàn),響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平如表1所示。

      表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素與水平Table 1 Coded levels and corresponding actual levels of the independent variables used in response surface design

      1.3.6 蛋白質(zhì)與多糖含量的測定

      根據(jù)GB/T 15673—2009《食用菌中粗蛋白含量的測定》和NY/T 1676—2008《食用菌中粗多糖含量的測定》,采用凱氏定氮法和苯酚-硫酸法對處理前后的香菇進(jìn)行蛋白質(zhì)和多糖含量的測定。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 洗脫劑的確定

      在料液比1∶10、洗脫劑濃度0.16 mol/L、pH 6.0、轉(zhuǎn)速150 r/min的條件下,分別選用不同的洗脫劑對香菇中重金屬鎘進(jìn)行去除,探討不同洗脫劑對重金屬鎘去除率的影響,結(jié)果如圖1所示,蒸餾水對香菇中重金屬鎘的去除率僅為10.4%,相比而言,EDTA和檸檬酸對鎘去除率較高,去除率分別為55.4%和40.1%。但EDTA對眼睛、皮膚有一定刺激作用,GB 2760—2014《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定EDTA在食品中最大添加量為0.25 g/kg,而且EDTA作為吸附劑時(shí),具有廣泛的配位性能,幾乎能與所有金屬離子形成配合物[33],易對香菇中營養(yǎng)成分造成損失。檸檬酸作為低分子質(zhì)量有機(jī)酸的一種,不僅本身可生物降解,而且對重金屬的解吸具有明顯的促進(jìn)作用[34],因此實(shí)驗(yàn)選擇檸檬酸作為鎘的去除劑。

      圖1 不同溶劑對鎘洗脫率的影響Fig. 1 Effects of different solvents on the removal of cadmium

      2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

      圖2 3 種因素對鎘去除率的影響Fig. 2 Effects of three factors on the removal rate of cadmium

      在檸檬酸pH 6.0、轉(zhuǎn)速150 r/min的條件下,分別按照檸檬酸濃度為0.02、0.04、0.08、0.16、0.32 mol/L進(jìn)行香菇中重金屬鎘的去除,探討檸檬酸濃度對香菇中重金屬鎘去除率的影響。由圖2A可知,隨著檸檬酸加入量的不斷增大,鎘的去除率逐漸增大,這可能是因?yàn)樵黾訖幟仕釢舛瓤梢栽黾訑U(kuò)散速率,使檸檬酸與鎘離子形成穩(wěn)定的絡(luò)合物[34],從而降低香菇中鎘的含量。當(dāng)檸檬酸濃度為0.32 mol/L時(shí)去除率達(dá)到49.0%,濃度為0.16 mol/L時(shí)去除率為47.1%。

      在檸檬酸濃度0.16 mol/L、轉(zhuǎn)速150 r/min的條件下,分別按照檸檬酸pH值為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0進(jìn)行香菇中重金屬鎘的去除,探討檸檬酸pH值對香菇中重金屬鎘去除率的影響。由圖2B可知,隨著溶液pH值的降低,香菇中鎘去除率不斷提高,這可能是因?yàn)榈蚿H值條件下,鎘的去除效率主要受到質(zhì)子運(yùn)動(dòng)的影響,隨著pH值的升高,溶液中的質(zhì)子數(shù)逐漸減少,此時(shí),去除效率取決于酸根對重金屬的絡(luò)合能力[27]。在中等酸性條件下,檸檬酸對重金屬鎘的絡(luò)合作用效果較好。

      在檸檬酸濃度0.16 mol/L、pH 6.0的條件下,分別按照轉(zhuǎn)速為50、100、150、200、250 r/min進(jìn)行香菇中重金屬鎘的去除,探討轉(zhuǎn)速對香菇中重金屬鎘去除率的影響。由圖2C可知,轉(zhuǎn)速對去除率影響差異顯著,提高搖床轉(zhuǎn)速,可以加快鎘離子的擴(kuò)散速率,提高去除效果。轉(zhuǎn)速在100 r/min時(shí),去除率達(dá)到最高,為43.7%。

      2.3 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

      2.3.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

      表2 響應(yīng)面試驗(yàn)分析結(jié)果Table 2 Experimental design and results for response surface analysis

      表3 方差分析Table 3 Analysis of variance of regression model

      根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,選擇檸檬酸濃度、檸檬酸pH值和轉(zhuǎn)速為考察因素,使用Design-Expert 8.0軟件,以鎘去除率為指標(biāo),設(shè)計(jì)三因素三水平的響應(yīng)面試驗(yàn),響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。通過對表2數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合,得到回歸方程為:對擬合的模型進(jìn)行方差分析及回歸系數(shù)的顯著性檢驗(yàn),結(jié)果見表3。模型P值小于0.05,即表明該模型顯著,失擬項(xiàng)不顯著(P=0.2333>0.05),說明殘差是由隨機(jī)誤差引起的;模型決定系數(shù)R2=0.86,說明模型對試驗(yàn)擬合程度較好,能夠真實(shí)地反映各影響因素與響應(yīng)值之間的關(guān)系,因此可以利用該方程對香菇中重金屬鎘的去除率進(jìn)行分析和預(yù)測。模型中A對響應(yīng)值的影響顯著

      (P<0.05),說明檸檬酸濃度是影響香菇中重金屬鎘去除率的重要控制因素;3 個(gè)因素對鎘去除率的影響大小依次為檸檬酸濃度>pH值>轉(zhuǎn)速。

      2.3.2 檸檬酸去除香菇中鎘的響應(yīng)面分析

      圖3 各因素交互影響鎘去除率的響應(yīng)面圖Fig. 3 Response surface plots showing the effect of various factors on the removal rate of cadmium

      觀察圖3中各因素之間兩兩相互作用的響應(yīng)面圖形,分析其對香菇重金屬鎘去除率的影響。以圖3b為例,等高線呈橢圓形,說明檸檬酸濃度和轉(zhuǎn)速的交互作用對鎘的去除率影響較大。在所涉及的實(shí)驗(yàn)條件范圍內(nèi),固定檸檬酸濃度,隨著轉(zhuǎn)速的不斷增加,鎘的去除率呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢。固定轉(zhuǎn)速,鎘的去除率呈先上升后趨于平穩(wěn)的趨勢。

      2.3.3 最佳方法條件的確定與驗(yàn)證

      利用Design-Expert 8.0軟件分析得出最大響應(yīng)值對應(yīng)的因素條件為檸檬酸濃度0.32 mol/L、pH 5.0、轉(zhuǎn)速70 r/min,且模型預(yù)測重金屬鎘去除率為59.6%。為證實(shí)預(yù)測結(jié)果,按最佳去除方法條件重復(fù)實(shí)驗(yàn)3 次,得到重金屬鎘去除率為57.0%,鎘的殘留量為0.41 mg/kg,低于國家限量標(biāo)準(zhǔn)0.5 mg/kg。實(shí)測值與預(yù)測值之間偏差較小,因此說明應(yīng)用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的提取條件是準(zhǔn)確可靠的。

      2.4 檸檬酸洗脫對香菇有效成分的影響

      圖4 不同香菇樣品鎘去除率Fig. 4 Removal rate of cadmium from different Letinous edodes samples

      對于不同的香菇樣品,采用優(yōu)化得到的方法進(jìn)行重金屬鎘的去除,結(jié)果如圖4所示,3 種香菇鎘含量均有明顯降低,平均去除率為52.4%。采用凱氏定氮法和苯酚-硫酸法對香菇中蛋白質(zhì)和多糖的含量進(jìn)行測定(圖5),未經(jīng)處理的香菇蛋白質(zhì)含量為24.3%,處理后的香菇蛋白質(zhì)含量為21.3%,僅降低3%;未處理的香菇多糖含量為8.37%,處理后的香菇多糖含量為8.04%,僅降低0.33%,洗脫前后香菇中多糖、蛋白質(zhì)含量無顯著性差異,較好地保留了香菇中的營養(yǎng)成分。

      圖5 最佳工藝條件對營養(yǎng)成分的影響Fig. 5 Effect of the optimized treatment for cadmium removal on nutrient retention

      3 結(jié) 論

      香菇作為一種營養(yǎng)豐富的食用菌,備受人們青睞,但是重金屬鎘污染問題日益嚴(yán)重,影響了香菇市場的進(jìn)一步發(fā)展,因此研究其重金屬鎘的去除方法具有重要的實(shí)際價(jià)值。本研究通過單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn),對檸檬酸洗脫去除香菇重金屬鎘的方法進(jìn)行了優(yōu)化,得到采用檸檬酸作為洗脫劑,在濃度0.32 mol/L、pH 5.0、 30 ℃、轉(zhuǎn)速70 r/min條件下,香菇中鎘的去除率達(dá)到最大,去除率為57.0%,相當(dāng)于0.16 mol/L EDTA處理時(shí)所得到的去除率。隨后將該方法應(yīng)用到不同香菇樣品中,結(jié)果顯示鎘去除率均在48%以上,平均去除率為52.4%,且去除后香菇中鎘含量均符合國家限量標(biāo)準(zhǔn);該方法處理前后香菇中蛋白質(zhì)和多糖含量無顯著性差異,對香菇營養(yǎng)成分沒有造成明顯損失。本實(shí)驗(yàn)得到的香菇鎘的去除方法能顯著降低香菇中鎘的含量,對現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義。

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      Removal of Cadmium from Lentinus edodes Using Citric Acid: Optimization of Processing Conditions Using Response Surface Methodology

      HU Jing1, SUN Junshe2, TAN Xiaoyan1, HU Shaofeng1, QIN Zifang1, NING Huijuan1, ZHANG Xiuqing1,*
      (1. College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China; 2. Chinese Academy of Agricultural Engineering, Beijing 100125, China)

      The removal of the heavy metal cadmium in dried Lentinus edodes using citric acid content was optimized using a combination of one-factor-at-a-time method and response surface methodology. The removal efficiency of cadmium was investigated as a function of three independent variables: citric acid concentration, pH and rotation speed. It turned out that the maximum removal rate of cadmium of 57.0% was obtained under the following optimized conditions: citric acid concentration 0.32 mol/L, pH 5.0, and rotation speed 70 r/min. After the treatment, the maximum residual cadmium content was 0.41 mg/kg, lower than the national limit of 0.5 mg/kg. Meanwhile, low losses of polysacccharides and proteins were observed suggesting good retention of nutrients in L. edodes. The proposed method could have a high application potential for reducing residual cadmium in L. edodes.

      Lentinus edodes; cadmium; citric acid; response surface methodology

      10.7506/spkx1002-6630-201714028

      TS201.6

      A

      1002-6630(2017)14-0181-06

      胡靜, 孫君社, 譚曉妍, 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化檸檬酸去除香菇中鎘工藝[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(14): 181-186.

      10.7506/ spkx1002-6630-201714028. http://www.spkx.net.cn

      HU Jing, SUN Junshe, TAN Xiaoyan, et al. Removal of cadmium from Lentinus edodes using citric acid: optimization of processing conditions using response surface methodology[J]. Food Science, 2017, 38(14): 181-186. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201714028. http://www.spkx.net.cn

      2016-12-05

      國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(21576142);中國農(nóng)業(yè)大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(2017SP001)

      胡靜(1993—),女,碩士研究生,研究方向?yàn)檎婢嗵切再|(zhì)及代謝調(diào)控。E-mail:hujing9293@126.com

      *通信作者:張秀清(1976—),女,副教授,博士,研究方向?yàn)榇紊x及調(diào)控。E-mail:xiuqingzhang@cau.edu.cn

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