湯雅利 李竹月 鄂晶晶 周偉碩 辛樹權(quán)

（長春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長春 130032）

一個野生油蘑菌株的培養(yǎng)基配方研究

湯雅利 李竹月 鄂晶晶 周偉碩 辛樹權(quán)*

（長春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長春 130032）

對吉林長嶺地區(qū)采集的一個野生油蘑標(biāo)本進行組織分離，比較其試管菌種在不同配方的固體和液體培養(yǎng)基上的菌絲生長情況。結(jié)果表明，PDA+玉米粉配方的固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基為最適合油蘑菌絲生長的培養(yǎng)基。

油蘑；組織分離；培養(yǎng)基配方； 菌絲生長

油蘑（Agaricus campestris）屬于傘菌目、白蘑科、口蘑屬，其顏色外棕內(nèi)黃，因菌蓋表面附有油膜而得名。油蘑口感滑嫩，香氣濃郁，風(fēng)味獨特，具有很高的食用價值。野生油蘑發(fā)生于秋季室外溫度18～5 ℃左右，5～10年生的楊樹林下，喜砂質(zhì)土壤。由于長期過度采摘和生態(tài)環(huán)境的不斷惡化，許多地區(qū)的野生油蘑資源日漸減少。有效保護和合理開發(fā)野生油蘑資源，實現(xiàn)野生油蘑的人工栽培是現(xiàn)階段待解決的問題。

人工馴化和母種分離是食用菌栽培生產(chǎn)的前提[1～6]。現(xiàn)今我國對野生油蘑的馴化研究較少，本文為組織分離野生油蘑菌種，并采用不同培養(yǎng)基配方進行培養(yǎng)馴化的結(jié)果。

1 材料與方法

母種固體培養(yǎng)基設(shè)5個配方，不加瓊脂即為相應(yīng)的液體培養(yǎng)基。

A. PDA培養(yǎng)基。馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，自來水1 000 mL，pH自然。馬鈴薯去皮切成1 cm小塊，稱取200 g煮至八分熟，4層紗布過濾取濾液，先后加入葡萄糖和瓊脂，加熱至完全溶解后，加水定容至1 000 mL，備用。

B. 麩皮浸出液培養(yǎng)基。麩皮50 g+1 000 mL水煮沸30分鐘4層紗布過濾后，向濾液中加入20 g瓊脂，待瓊脂溶解后定容至1 000 mL備用。

C. 玉米粉培養(yǎng)基。玉米粉200～300 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。將玉米粉加入蒸餾水中，攪勻，文火煮沸1 h，4層紗布過濾，加瓊脂后加熱溶解，補足水量至1 000 mL，備用。

D. PDA+玉米粉培養(yǎng)基。將以上A和C培養(yǎng)基按1︰1配比混合，備用。

E. PDA+麥麩汁浸出液培養(yǎng)基。將以上A和B培養(yǎng)基按1︰1配比混合，備用。

1.2 儀器設(shè)備

目前，電視媒體與新媒體的融合方式最多的是電子版報紙、開設(shè)官方微信、運用二維碼等。這些僅僅是將二者進行了簡單的疊加，并沒有實現(xiàn)真正意義上的融合，沒有將媒介資源、生產(chǎn)要素進行有機的整合。這種簡單、表面上的疊加并沒有發(fā)揮其真正的效用，沒有形成統(tǒng)一的體系機制。

超凈工作臺，培養(yǎng)箱，高壓滅菌鍋，電爐，酒精燈，接菌鉤，解剖刀等。

1.3 試驗方法

（1）菌種分離。野生油蘑采集自吉林省長嶺縣三十號鄉(xiāng)五撮村。將前1天采集的油蘑置于超凈化臺上，用75%酒精棉球擦拭表面消毒，于紫外線燈下照射20 min后，進行分離操作。于菌蓋與菌柄接觸處，用解剖刀和鑷子夾取綠豆粒大小組織塊，分別接種于集中PDA加富培養(yǎng)基中，在25 ℃下黑暗培養(yǎng)，每天觀察菌絲萌發(fā)情況。

（2）固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)基用1.8×20（cm）的玻璃試管分裝，裝液高度為試管長度的2/5，經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌30 min后擺斜面。斜面長度為試管長度的3/4。挑取分離得到的試管菌種約綠豆大小接種于5種固體斜面培養(yǎng)基表面。每配方5個重復(fù)。

（3）液體培養(yǎng)基培養(yǎng)。將配好的液體培養(yǎng)基分裝于50 mL小三角瓶，每瓶20 mL，經(jīng)高壓滅菌，冷卻后接入活化的斜面培養(yǎng)基的菌絲塊。每配方5個重復(fù)。

（3）測定方法。用直尺直接測量斜面上菌絲生長長度。液體培養(yǎng)基中通過采用真空泵和抽濾瓶抽濾菌絲發(fā)酵培養(yǎng)物，用蒸餾水沖洗多次后收集濕菌絲，置于60 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘干至恒重后稱重，得菌絲體生物量干重。

（4）數(shù)據(jù)處理。用Excel2003數(shù)據(jù)處理軟件對試驗數(shù)據(jù)進行處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌種的分離情況

菌蓋與菌柄交接處為組織分離最易成活且生長速度最快部位[7]。本實驗共分離15個油蘑組織塊接種于PDA加富培養(yǎng)基中，結(jié)果成活5個，污染8個，未萌發(fā)2個，成活率為33.3%。萌發(fā)的菌絲潔白、濃密，氣生菌絲數(shù)量中等。污染和未萌發(fā)可能是因操作過程滅菌不徹底等原因造成，如菇表面消毒不徹底，接種工具等消毒不干凈或過熱等。

2.2 菌絲在斜面培養(yǎng)基上的生長情況

接種后第4天開始，每隔3天觀察測量1次菌絲生長面的長度（表1），計算菌絲日均長速。結(jié)果為，配方D（玉米粉+PDA培養(yǎng)基）菌絲粗壯、濃密，雖前期發(fā)菌慢，但日均長速快，達0.72 cm，為理想配方；配方A（PDA培養(yǎng)基）菌絲長速居次，前期發(fā)菌快，但菌絲稀疏；配方B（麩皮浸出液培養(yǎng)基）和配方C（玉米粉培養(yǎng)基）菌絲生長較慢且濃密度不高；配方E（PDA+麩皮培養(yǎng)基）菌絲濃密，但菌絲生長過慢，并呈波紋狀，氣生菌絲旺盛，不是理想配方（表1）。

表1 菌絲在斜面培養(yǎng)基上的生長情況

2.3 菌絲在液體培養(yǎng)基上的生長情況

在接種量一致的情況下，菌絲的產(chǎn)量代表了菌絲對不同液體培養(yǎng)基的適應(yīng)能力。實驗結(jié)果顯示，油蘑菌在5種液體培養(yǎng)基中均可生長，其中，以配方D（PDA+玉米粉）產(chǎn)生的菌絲量最大，濕重和干重分別為1.5 g和0.360 g，是對照的3.9倍和1.9倍。其次為配方C，是對照的2.9倍和1.6倍。以下依次為配方E和配方B（表2）。

表2 菌絲在液體培養(yǎng)基上的生長情況

實驗中含有玉米粉的培養(yǎng)基菌絲量較多，這與玉米粉含糖量高，增加了培養(yǎng)基中的碳源含量密不可分。說明油蘑菌絲生長對碳源的需求量大，這是選擇油蘑菌栽培配方的重要依據(jù)。

3 結(jié) 論

實驗表明，油蘑菌絲可以在人工培養(yǎng)基上生長，其中以玉米粉+PDA配方的培養(yǎng)基菌絲生長較好；而PDA+麩皮配方較差，后期菌絲基本不生長。本實驗表明油蘑培養(yǎng)基與松茸等一樣需要碳源的加富[9]。

液體培養(yǎng)還顯示，玉米粉+PDA配方液體培養(yǎng)基油蘑的菌絲生長量最大，菌球均勻、菌絲粗壯，經(jīng)7天培養(yǎng)達到最佳狀態(tài)，菌球充滿培養(yǎng)基。

綜上得出，PDA+玉米粉培養(yǎng)基配方為本實驗中的油蘑菌絲培養(yǎng)最佳配方。

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第十一屆全國食用菌學(xué)術(shù)研討會、2017中國食用菌產(chǎn)業(yè)年會暨第四屆中國食用菌博覽會在太原召開

2017年6月23日，由中國菌物學(xué)會主辦、山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所、山西農(nóng)業(yè)大學(xué)、山西大學(xué)、易菇網(wǎng)承辦的第十一屆全國食用菌學(xué)術(shù)研討會、2017中國食用菌產(chǎn)業(yè)年會暨第四屆中國食用菌博覽會在山西太原召開。

本次會議有來自全國200多個科研院所、大專院校、企事業(yè)單位、行業(yè)協(xié)會等400余名代表參加。大會共進行了63場主題報告，內(nèi)容包括食用菌基礎(chǔ)科學(xué)及生物技術(shù)、食用菌遺傳與育種、食用菌栽培技術(shù)及病蟲害防控等。期間，中國食用菌產(chǎn)業(yè)年會設(shè)置藥用真菌與開發(fā)研討會、珍稀食用菌發(fā)展研討會和中國食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇等多項活動。

同期舉行的“2017 中國食用菌產(chǎn)業(yè)年會暨第四屆中國食用菌博覽會”，有50余家食用菌企業(yè)帶來了數(shù)百種食用菌原輔材料、機械設(shè)備、消殺藥品及數(shù)千種食用菌初級和精深加工產(chǎn)品。

6月25日，與會專家、學(xué)者、行業(yè)代表前往位于山西省朔州市山陰縣的山西宇昊蘑菇種植有限公司進行參觀訪問。該公司是一家煤炭企業(yè)轉(zhuǎn)型的現(xiàn)代農(nóng)業(yè)企業(yè)，成立于2012年。占地1 000畝，總投資5.5億元，日產(chǎn)雙孢蘑菇30多噸，產(chǎn)品銷往全國各大城市，2015年被山西省授予“省級龍頭企業(yè)”榮譽稱號。

（資料由《易菇網(wǎng)》提供）

S646

碼：A

：2095-0934（2017）04-246-03

2016吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃

湯亞莉（1995—），女，長春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院食用菌栽培專業(yè)學(xué)生。E-mail：1829312301@qq.com

*通訊作者：辛樹權(quán)（1970—），男，高級實驗師，從事食用菌栽培與微生物學(xué)教學(xué)與研究。E-mail：253154968@qq.com