周浩，凌秀梅，李俊霞，張洪偉，朱文斌，李瑤，王昕，朱虹霖，楊紅

（成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院，四川成都610045）

菌落總數(shù)與金葡菌檢測能力驗(yàn)證結(jié)果與分析

周浩，凌秀梅，李俊霞，張洪偉，朱文斌，李瑤，王昕，朱虹霖，楊紅*

（成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院，四川成都610045）

總結(jié)分析2015年～2016年參加菌落總數(shù)與金葡菌的盲樣考核與能力驗(yàn)證的結(jié)果，找出在檢測過程中需要注意的細(xì)節(jié)；提高檢驗(yàn)員的檢測能力和水平，控制實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。通過比較新手和熟手檢驗(yàn)員連續(xù)兩年參加盲樣考核與其它能力驗(yàn)證（采用平板計(jì)數(shù)法檢測）的結(jié)果，分析檢測過程。連續(xù)兩年兩位檢驗(yàn)員的檢測結(jié)果均能達(dá)到能力驗(yàn)證組織單位的評定要求，且|Z|均小于1，兩者的檢測結(jié)果無顯著性差異（P＞0.05）；新手相對于熟手而言，|Z|值較高，準(zhǔn)確性較差。檢驗(yàn)員在稀釋、涂布、菌落辨別、計(jì)數(shù)等細(xì)節(jié)方面需要不斷總結(jié)、積累經(jīng)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)室管理者應(yīng)該加強(qiáng)檢驗(yàn)員檢驗(yàn)過程的監(jiān)督與核查，從而提高實(shí)驗(yàn)室的檢測質(zhì)量。

菌落總數(shù)；金葡菌；平板計(jì)數(shù)；能力驗(yàn)證；人員比對

能力驗(yàn)證是一種評價實(shí)驗(yàn)室檢測和質(zhì)量控制能力的有力手段，是對實(shí)驗(yàn)室工作能力進(jìn)行評估的客觀方法之一，而且也是實(shí)驗(yàn)室維持較高檢測水平、提高人員檢測能力及評定的要求[1]。從2015年開始，國家食品藥品監(jiān)督管理總局委托中國食品藥品檢定研究院對承擔(dān)國家食藥總局監(jiān)督抽檢任務(wù)的檢測機(jī)構(gòu)不定期進(jìn)行盲樣考核；本實(shí)驗(yàn)室作為承擔(dān)國抽任務(wù)的單位之一，于2015、2016年參加了食藥總局舉辦的“菌落總數(shù)”與“金黃色葡萄球菌（以下簡稱金葡菌）”盲樣考核，結(jié)果均為滿意。本文通過總結(jié)新手和熟手檢驗(yàn)員參加菌落總數(shù)與金葡菌盲樣考核及近年來這兩個指標(biāo)的能力驗(yàn)證的過程與結(jié)果分析，希望能對其他實(shí)驗(yàn)室及人員有所幫助。

1 材料與方法

1.1 樣品

2015年和2016年金葡菌盲樣考核樣、2016年菌落總數(shù)盲樣考核樣，瓶上編碼為CODE1～CODE10，規(guī)格為1粒/瓶，外觀為白色球丸，各10瓶，對應(yīng)相同編碼的奶粉樣品10袋，規(guī)格為25 g/袋：中國食品藥品檢定研究院[2-3]；金葡凍干粉1瓶（樣品號SA-168）、菌落總數(shù)凍干粉1瓶（樣品號AC-279）：中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測試評價中心；金葡凍干粉2瓶（樣品號A062、A073）、2016年度FAPAS的能力驗(yàn)證樣（菌落總數(shù)凍干粉1瓶，樣品號M211e09）：遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心。

1.2 儀器與培養(yǎng)基

MIR-253生化培養(yǎng)箱：日本三洋公司；平板計(jì)數(shù)瓊脂干粉、Baird-Parker培養(yǎng)基基礎(chǔ)、亞碲酸鉀卵黃增菌液、凍干兔血漿：北京陸橋技術(shù)有限公司。其它試劑按照GB 4789.2-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定》，GB 4789.10-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》的要求制備。

1.3 檢驗(yàn)方法

盲樣考核樣及其它能力驗(yàn)證樣依據(jù)組織單位提供的作業(yè)指導(dǎo)書處理，菌落總數(shù)采用GB 4789.2-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定》[4]，金葡菌采用GB 4789.10-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》的第二法—平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行檢驗(yàn)[5]。

1.4 試驗(yàn)人員與結(jié)果報告

考慮實(shí)際情況，每次能力驗(yàn)證試驗(yàn)均采用兩名人員同時進(jìn)行檢測；一名具備資格且工齡3年以下的新手檢驗(yàn)員（簡稱A）；另一名工齡在5年以上的具備工程師及以上職稱熟手檢驗(yàn)員（簡稱B）。以B的數(shù)據(jù)結(jié)果上報，同時實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部考核A。

1.5 結(jié)果評價與分析

盲樣檢測結(jié)果由中國食品藥品檢定研究院給出評價，Z值計(jì)算公式為：Z值=檢測結(jié)果對數(shù)值-中位值/標(biāo)準(zhǔn)差。評價的原則是|Z|≤1為滿意結(jié)果；1＜|Z|＜2為合格；2≤|Z|≤3為可疑或有問題結(jié)果；|Z|＞3為不滿意結(jié)果[6-7]。其它結(jié)果依據(jù)組織單位的結(jié)果通知單。

2 結(jié)果與分析

2.1 金葡菌盲樣考核檢測結(jié)果

2015年、2016年金葡盲樣考核結(jié)果分別見表1、表2。

表1 2015年金葡菌盲樣考核檢測結(jié)果及評價表Table 1 The detection results and evaluation of Staphylococcus aureus in 2015 blind sample test

表2 2016年金葡菌盲樣考核檢測結(jié)果及評價表Table 2 The results and evaluation of Staphylococcus aureus in 2016 blind sample test

表1、表2中B的|Z|值由組織單位的結(jié)果評價反饋，通過B的|Z|值計(jì)算得出A的|Z|值。由表1、表2中|Z|值的結(jié)果可知，A和B結(jié)果均為滿意，比較一下，B的|Z|值更小，說明B的結(jié)果與中位值更接近，結(jié)果更為準(zhǔn)確。2015年中CODE 2菌落數(shù)的差異最大，差值達(dá)1.8×103CFU/g；2016年中CODE 6菌落數(shù)的差異最大，差值達(dá)3.8×103CFU/g。

2.2 2016年菌落總數(shù)盲樣考核檢測結(jié)果

2016年菌落總數(shù)盲樣考核結(jié)果見表3。

分別對兩位人員的菌落數(shù)及其對數(shù)值進(jìn)行差異性分析，結(jié)果表明兩者在菌落數(shù)與其對數(shù)值上沒有顯著性差異；其中CODE 2菌落數(shù)的差異最大，差值達(dá)5.0×104CFU/g。

表3 2016年菌落總數(shù)盲樣考核檢測結(jié)果表Table 3 The detection results and evaluation of aerober in 2016 blind sample test

2.3 差異性分析

對盲樣考核中A和B兩位檢驗(yàn)人員檢測結(jié)果以及取對數(shù)值后，分別用統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析軟件SPSS進(jìn)行差異顯著性分析（配對t檢驗(yàn)）；分別剔除表1、表2中陰性結(jié)果后對菌落數(shù)及對數(shù)值進(jìn)行差異分析，結(jié)果見表4。

表4 A與B的檢測結(jié)果差異性比較Table 4 The comparison of detection results between A and B

從表4中可以看出兩位檢驗(yàn)人員的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果及其對數(shù)值無均顯著性差異（P值均大于0.05）。

2.4 其它能力驗(yàn)證結(jié)果

2015年與2016年參加多次能力驗(yàn)證，分別有遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心組織的金葡菌（樣品號SA-168）與菌落總數(shù)（樣品號AC-279）能力驗(yàn)證；由中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測試評價中心金葡菌測量審核樣（樣品號A062、A073）；以及FAPAS的能力驗(yàn)證樣（樣品號M211e09）；結(jié)果評價均為滿意。結(jié)果分別見表5、表6。

表5 2015年～2016年金葡菌能力驗(yàn)證結(jié)果Table 5 The proficiency test results of Staphylococcus aureus in 2015-2016

表6 2016年菌落總數(shù)能力驗(yàn)證結(jié)果Table 6 The proficiency test results of aerober in 2016

從表5、表6看兩位人員的結(jié)果，SA-168的差異最為明顯，達(dá)2.1×105CFU/g。其對數(shù)值差異不大。兩位檢驗(yàn)員結(jié)果均達(dá)到組織單位的評價要求。

3 總結(jié)與討論

3.1 結(jié)果的判斷

從反饋結(jié)果上看，以A為代表的新手檢驗(yàn)員與以B為代表的熟手檢驗(yàn)員，兩位檢測結(jié)果都能滿足結(jié)果評價的要求。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部過程核查：1）同一稀釋度之間是否平行；不同稀釋度之間的是否成比例；2）平板上菌落分布，是否清楚分散、有無蔓延、瓊脂有無干裂，覆蓋瓊脂的厚度是否適宜等；3）培養(yǎng)過程觀察，平板計(jì)數(shù)是否做到多次觀察，血漿凝固酶試驗(yàn)是否做到每半小時觀察一次；4）試驗(yàn)過程是否操作規(guī)范迅速。從以上幾個方面分析，B在細(xì)節(jié)方面注意的更好，判斷B的結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠，這與組織單位的結(jié)果評價Z值相吻合。

3.2 改進(jìn)措施

新手檢驗(yàn)員由于工作時間短，實(shí)踐不足、缺乏經(jīng)驗(yàn)、對標(biāo)準(zhǔn)理解不夠透徹等方面原因，在檢測技術(shù)方面可能與熟手有一定的差距；另外標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)對定量檢測的注意事項(xiàng)描述不夠詳細(xì)，使得檢驗(yàn)人員在檢驗(yàn)過程中更多依靠自身積累的經(jīng)驗(yàn)。針對上述情況，總結(jié)以下幾點(diǎn)：1）稀釋菌液要充分混合，（25+225）mL可以采用拍擊均質(zhì)器混勻，后續(xù)10 mL梯度稀釋可以用渦旋儀進(jìn)行混勻，確保菌液均勻分散，沒有菌球存在。2）注意傾注時瓊脂的溫度，確保細(xì)菌不會因熱力原因受損。覆蓋瓊脂適度，太厚影響菌落形成，太薄起不到防止菌落蔓延的作用；3）預(yù)制Baird-Parker瓊脂平板要進(jìn)行無菌檢查與表面干燥，確保液體充分吸收，分散均勻涂布、L型涂布棒不要觸及平板邊緣；4）過程觀察，確保不會因菌落未形成或形成較小而遺漏，不會因菌落交叉覆蓋導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏低等；5）設(shè)置陽性和陰性對照，熟悉典型菌落特征。

3.3 實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制

Z值是一個統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)，由Z值的計(jì)算公式可知，計(jì)算Z值需要很多實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)，但對于單個實(shí)驗(yàn)室而言，難以取得Z值。鑒于Z值與檢測結(jié)果的對數(shù)值的關(guān)系，因而檢測結(jié)果的對數(shù)值可以粗略判定結(jié)果的偏差是否在可接受的統(tǒng)計(jì)范圍內(nèi)；但是在實(shí)際工作中，對于有限量值要求的標(biāo)準(zhǔn)或者明示規(guī)范中，判斷是否符合要求的數(shù)據(jù)僅是檢測結(jié)果，因此如何確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性顯得尤其重要。不能以檢驗(yàn)員通過了盲樣考核或者其他比對考核，就放松對該檢驗(yàn)員日常檢驗(yàn)工作過程的控制與監(jiān)督核查。為了提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，除了強(qiáng)化人員的培訓(xùn)，技能的培養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)的正確理解及規(guī)范操作等過程控制外，更為重要的是從思想上高度重視，只有這樣才能確保出具檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和權(quán)威性[8]。

[1]蘆云,王芳,金鑫,等.食品微生物學(xué)能力驗(yàn)證[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊, 2013,23(2)：44-47

[2]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.CNAS-CL09：2013檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2013

[3]炊慧霞,張丁,裴曉燕,等.食品衛(wèi)生微生物質(zhì)控定量檢測樣品的制備及結(jié)果評價[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2012,22(11)：2621-2624

[4]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 4789.2-2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)檢驗(yàn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 4789.10-2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010

[6]張玲,劉桂華.金黃色葡萄球菌定量檢測質(zhì)量控制及結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2016,26(2)：206-207,210

[7]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.CNAS-GL02：2014能力驗(yàn)證結(jié)果的統(tǒng)計(jì)處理和能力評價指南[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2014

[8]趙薇,劉桂華,張煒煜.食品中菌落總數(shù)與金黃色葡萄球菌定量檢測能力驗(yàn)證結(jié)果與分析 [J].中國衛(wèi)生工程學(xué),2014,13(4)：320-322

The Proficiency Testing Results and Analysis of Aerober and Staphylococcus aureus

ZHOU Hao，LING Xiu-mei，LI Jun-xia，ZHANG Hong-wei，ZHU Wen-bin，LI Yao，WANG Xin，
ZHU Hong-lin，YANG Hong*
（Chengdu Institute for Food and Drug Control,Chengdu 610045，Sichuan，China）

Analyzed the results of blind assessment and the ability of verity of aerober and Staphylococcus aureus by 2015-2016，finded the process details of detection，improved the detectability of inspectors，controlled the test quantity of laboratory，ensured the accuracy result.Analyzing the process of detection through the comparison result of two different levels of inspectors for participate in two consecutive years blind evaluation and other proficiency testing.Test results can reach the rated requirements（|Z|＜1）of two different levels inspectors for two consecutive years.Their test results showed no significant differences（P＞0.05）；relative to the skilled examiner,higher z value，poor accuracy.There were some problems with the inspectors in the aspects of dilution levels，spread-plate technique，viewing，counting and so on，noticed examiners needed study and gain wider experience continually.Lab managers should strengthen the monitoring and verification of inspectors detection process，thereby improved the quality of laboratory testing.

aerober；Staphylococcus aureus；plate count；proficiency testing；personnel comparison

2016-12-08

周浩（1982—），男（漢），高級工程師，碩士，主要從事微生物檢驗(yàn)工作。

*通信作者

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.16.033