陳敬文，張 偉，王天媧，程 俊，羅金風(fēng)

消化后AB-PAS染色法在黏液染色中的應(yīng)用

陳敬文1，張 偉2，王天媧1，程 俊1，羅金風(fēng)1

消化后AB-PAS；黏液染色；特殊染色

AB-PAS是一種常見的特殊染色法，其能較好地顯示中性黏液和酸性黏液，但有時(shí)組織內(nèi)含有的糖原也會(huì)顯示，且無法區(qū)分中性黏液，從而影響染色結(jié)果的判斷。本科室根據(jù)糖原可被淀粉酶分解破壞的原理[1]，在染色前用淀粉酶消化切片中的糖原，再進(jìn)行AB-PAS染色，取得良好的效果，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源收集深圳市人民醫(yī)院病理科已知AB-PAS染色陽性標(biāo)本，每份標(biāo)本石蠟切片2張，厚4 μm，分為兩組：(1)常規(guī)AB-PAS染色(對(duì)照組)，(2)消化后行AB-PAS染色(實(shí)驗(yàn)組)。

1.2試劑配制(1)淀粉酶消化液：淀粉酶1 g，蒸餾水100 mL。(2)阿爾辛藍(lán)染色液：阿爾辛藍(lán)8GS 1 g，冰醋酸3 mL，蒸餾水97 mL。(3)3%醋酸溶液：冰醋酸3 mL，蒸餾水97 mL。(4)0.5%過碘酸氧化液：過碘酸0.5 g，蒸餾水100 mL。(5)Schiff染色液：堿性復(fù)紅1 g，1N鹽酸20 mL，偏重亞硫酸鈉1 g，重蒸餾水200 mL[2]。

1.3方法對(duì)照組AB-PAS染色法：(1)常規(guī)石蠟切片，脫蠟至水。(2)蒸餾水洗，3%醋酸水溶液3 min。(3)阿爾辛藍(lán)染色液30 min。(4)蒸餾水洗，過碘酸氧化10 min。(5)自來水沖洗，蒸餾水洗，Schiff染色液15 min。(6)流水沖洗2～5 min，蒸餾水洗。(7)95%乙醇、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固[3]。

實(shí)驗(yàn)組AB-PAS染色法：(1)常規(guī)石蠟切片，脫蠟至水。(2)蒸餾水洗，淀粉酶消化液30 min。(3)蒸餾水洗，3%醋酸水溶液3 min。(4)阿爾辛藍(lán)染色液30 min。(5)蒸餾水洗，過碘酸氧化10 min。(6)自來水沖洗，蒸餾水洗，Schiff染色液15 min。(7)流水沖洗2～5 min，蒸餾水洗。(8)95%乙醇、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2 結(jié)果

對(duì)照組AB-PAS染色：中性黏液物質(zhì)及糖原均呈紅色，酸性黏液物質(zhì)呈藍(lán)色(圖1)。實(shí)驗(yàn)組AB-PAS染色：中性黏液物質(zhì)呈紅色，酸性黏液物質(zhì)呈藍(lán)色，糖原已被完全消化(圖2)。

①②

圖1對(duì)照組AB-PAS染色：胃癌組織的中性黏液和糖原呈紅色，酸性黏液呈藍(lán)色圖2實(shí)驗(yàn)組AB-PAS染色：胃癌組織的中性黏液呈紅色，酸性黏液呈藍(lán)色

3 討論

正常黏膜上皮細(xì)胞可分泌黏液，分別為中性黏液和酸性黏液，在HE染色中兩者黏液物質(zhì)無法區(qū)分，常需用黏液物質(zhì)染色區(qū)分；病理狀態(tài)下，結(jié)締組織、心肌、腎臟等一些實(shí)質(zhì)性器官，也可出現(xiàn)黏液水腫、黏液變性和黏蛋白增多的現(xiàn)象，也需用黏液物質(zhì)染色區(qū)分和證明；在一些腫瘤的診斷和研究方面，也常常需要黏液染色進(jìn)行觀察和鑒別[4]。在各種黏液物質(zhì)的特殊染色中，AB-PAS是一種常用的染色方法，它利用阿爾辛藍(lán)和PAS的共同反應(yīng)，能較好的顯示中性黏液和酸性黏液：阿爾辛藍(lán)屬于堿性染料，染料分子中帶正電荷的鹽鍵和酸性黏液物質(zhì)中帶負(fù)電荷的酸性基團(tuán)結(jié)合呈藍(lán)色；中性黏液物質(zhì)與過碘酸-無色品紅起反應(yīng)，生成紅色復(fù)合物。但PAS在顯示中性黏液的同時(shí)，如組織內(nèi)含有糖原，則糖原也會(huì)顯示出來，且和中性黏液混合在一起無法區(qū)分，影響結(jié)果判讀，有時(shí)需另加做1張消化后PAS才能加以區(qū)分和證實(shí)。本組采用消化后的AB-PAS染色，用淀粉酶或唾液來消化糖原，經(jīng)兩者消化的切片染色結(jié)果并無明顯差異，具體使用哪種方法進(jìn)行消化糖原，可根據(jù)自身情況進(jìn)行選擇：(1)淀粉酶使用方便，效果理想，但存放過久或保存不當(dāng)，導(dǎo)致酶的活性失活，對(duì)糖原的消化作用喪失。因此，用淀粉酶染色時(shí)均需經(jīng)陽性對(duì)照試驗(yàn)后才能使用。(2)唾液的消化能力較強(qiáng)，效果較好，但獲取過程稍嫌復(fù)雜，每次收集唾液前先用清水漱口，以清除口腔內(nèi)的各種殘?jiān)缓笥脽占僖?，以玻璃棒攪拌均勻，?倍蒸餾水稀釋，充分?jǐn)噭蚝笫褂肹5]。待充分消化掉組織內(nèi)的糖原后，再進(jìn)行阿爾辛藍(lán)和PAS染色，這樣染色時(shí)就不會(huì)出現(xiàn)糖原，對(duì)中性黏液及酸性黏液能更好的顯示，不會(huì)對(duì)結(jié)果的判讀帶來影響，也無需再加做消化后的PAS加以證實(shí)和區(qū)分，既節(jié)省了試劑也提高了工作效率。

[1] 龔志錦，詹镕洲. 病理組織制片和染色技術(shù)[M].上海:科學(xué)技術(shù)出版社,1994(1):155.

[2] 梁英杰，凌啟波，張 威. 臨床病理學(xué)技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2011(1):225-230.

[3] 龔志錦，詹镕洲. 病理組織制片和染色技術(shù)[M].上海:科學(xué)技術(shù)出版社,1994(1):158-160.

[4] 祁珊珊. 過碘酸-Schiff(PAS) 染色方法的改良及其在病理診斷中的應(yīng)用[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2016,32(7):825-826.

[5] 凌啟波. 實(shí)用病理特殊染色和組化技術(shù)[M]. 廣州：廣東高等教育出版社,1989(1):209.

時(shí)間：2017-7-18 11:52 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170718.1152.030.html

1深圳市人民醫(yī)院病理科 5180202廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院病理科，廣州 510010

陳敬文，男，主管技師。E-mail： a780916@163.com

R 446

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1001-7399(2017)07-0817-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.07.030

接受日期：2017-05-12