杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的提取工藝研究

李小鋒 杜劍松 康興東（江西普正制藥有限公司吉安331409）

●中西藥苑●

杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的提取工藝研究

李小鋒 杜劍松 康興東
（江西普正制藥有限公司吉安331409）

目的：確定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的最佳提取工藝，為全杜仲膠囊的生產(chǎn)工藝優(yōu)化提供參考依據(jù)。方法：采用正交試驗(yàn)法，以松脂醇二葡萄糖苷的提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選杜仲的最佳提取工藝。結(jié)果：正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，提取次數(shù)對(duì)松脂醇二葡萄糖苷的提取率有明顯的影響，結(jié)合大生產(chǎn)工藝的實(shí)際情況，最終確定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的最佳提取工藝為6倍量水、提取2次、提取時(shí)間2 h/次。結(jié)論：本提取工藝研究結(jié)果為全杜仲膠囊的生產(chǎn)工藝優(yōu)化提供了試驗(yàn)參考依據(jù)。

杜仲；松脂醇二葡萄糖苷；提取工藝；正交試驗(yàn)

杜仲為杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹皮[1]，是常用的滋補(bǔ)藥材，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎、降壓的功效。全杜仲膠囊是杜仲的單方制劑，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、降血壓的功效，用于腎虛腰痛、腰膝無(wú)力；高血壓見(jiàn)上述癥狀者。藥典中記載的其提取工藝是先用85%乙醇加熱回流提取2 h，藥渣再加水煎煮2次，2 h/次[1]。現(xiàn)代研究結(jié)果顯示，杜仲中的木脂素類化合物是其主要有效成分之一，是杜仲降壓的主要組分[2]。松脂醇二葡萄糖苷是杜仲中含量最豐富的木脂素類化合物之一，也是《中國(guó)藥典》控制全杜仲膠囊及杜仲藥材質(zhì)量的指標(biāo)性成分。本研究以松脂醇二葡萄糖苷的提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)杜仲的提取工藝進(jìn)行了探討性研究，為全杜仲膠囊的生產(chǎn)工藝優(yōu)化提供了參考依據(jù)。先報(bào)告如下：

1 材料與儀器

1.1 藥材杜仲藥材購(gòu)于江西樟樹，由江西普正制藥有限公司吳永忠副研究員鑒定為杜仲。破碎成小段后作為實(shí)驗(yàn)用樣品。

1.2 儀器高效液相色譜儀：Waters2695型高效液相色譜儀；色譜柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm×5μm）（美國(guó)Waters公司）；JK-100型超聲波清洗器（合肥金尼克機(jī)械制造有限公司）；SHB-ⅢS型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；E-5203A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海振捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HHS-24型電熱恒溫水浴鍋（上海東星建材實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器（上海雅榮生化設(shè)備儀器有限公司）。

1.3 試劑及試藥松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定研究院，批號(hào)111537-201204，純度90.6%），乙腈、甲醇為色譜純，水為雙重蒸餾水，其余試劑為分析純。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件色譜柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm×5μm）（美國(guó)Waters公司）；流動(dòng)相：乙腈-水（13∶87）；檢測(cè)波長(zhǎng)：277 nm。理論板數(shù)按松脂醇二葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1 000。分別取對(duì)照品及樣品溶液10μl進(jìn)樣，通過(guò)外標(biāo)法計(jì)算松脂醇二葡萄糖苷的含量。

1.4.2 對(duì)照溶液的制備精密稱取松脂醇二葡萄糖苷5.30 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇適量使之溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為106.0μg/ml的對(duì)照品溶液。

1.4.3 提取溶劑的選擇取杜仲4份，每份各30 g。按照設(shè)計(jì)方案進(jìn)行試驗(yàn)，分別測(cè)定提取液中松脂醇二葡萄糖苷的轉(zhuǎn)移率。提取方案設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 提取溶劑的選擇試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

1.4.4 杜仲提取工藝正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)分別取杜仲藥材30 g，共9份，按L9（34）正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行9組試驗(yàn)，提取液合并定容至2 000 ml，得供試品溶液1～9，分別測(cè)定溶液中松脂醇二葡萄糖苷的含量，計(jì)算松脂醇二葡萄糖苷的提取率。正交試驗(yàn)的因素水平參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 杜仲水提正交試驗(yàn)因素水平表

2 結(jié)果

2.1 提取溶劑的選擇試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明“6倍水，提2次，2 h/次”的提取率最高，85%乙醇提取2次的提取率最低。這說(shuō)明以水為溶劑對(duì)松脂醇二葡萄糖苷的提取效果最好。見(jiàn)表3。

表3 杜仲提取溶劑選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 杜仲提取工藝正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果由松脂醇二葡萄糖苷提取率結(jié)果可知，3個(gè)因素對(duì)松脂醇二葡萄糖苷提取率影響的大小為：提取次數(shù)＞提取時(shí)間＞加水倍數(shù)，主要影響因素為提取次數(shù)，且方差分析有顯著性差異；而第3次的提取率小于10%，考慮到成本等因素，最終選擇提取2次；直觀分析結(jié)果表明，加8倍量水提取率最高，但與加6倍量水、10倍量水提取率相差不大，考慮到生產(chǎn)成本，最終選擇加6倍量水。結(jié)果還表明，提取2 h的提取率最高，故最終確定提取時(shí)間為2 h；最終確定的最佳提取工藝為6倍水，提取2次，2 h/次。見(jiàn)表4。

表4 杜仲提取工藝正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

松脂醇二葡萄糖苷是杜仲的主要活性成分，全杜仲膠囊以松脂醇二葡萄糖苷作為質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分[1]，因此本研究以松脂醇二葡萄糖苷作為指標(biāo)性成分對(duì)提取工藝進(jìn)行評(píng)價(jià)是可行的。杜仲提取溶劑選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，用水作為提取溶劑比用乙醇溶液提取效果更好。杜仲中的木脂素類成分在乙醇中的溶解性較在水中好，根據(jù)相似相溶的原理，用乙醇溶液進(jìn)行提取，提取率應(yīng)更高，但本研究結(jié)果顯示水提的效果更好，這可能與杜仲中含有大量的杜仲膠成分有關(guān)。

相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道中，多以超聲提取、微波提取為主，提取溶劑多采用不同濃度的乙醇來(lái)提取[3～6]。而本研究基于全杜仲膠囊現(xiàn)有的提取工藝，結(jié)合大生產(chǎn)工藝的實(shí)際要求，經(jīng)過(guò)溶劑選擇實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)，最終確定杜仲的最佳提取工藝為“加6倍水，提取2次，2 h/次”，這為全杜仲膠囊的生產(chǎn)工藝優(yōu)化提供了試驗(yàn)參考依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2015年版:一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.165,862

[2]吳衛(wèi)華.杜仲抗高血壓有效部位的制備及降壓效應(yīng)研究[D].廣州:中南大學(xué),2007

[3]潘亞磊,郭玲麗,謝培,等.杜仲松脂醇二葡萄糖苷的提取工藝優(yōu)化[J].化學(xué)與生物工程,2016,33(2):42-45

[4]呂強(qiáng).杜仲總木脂素及松脂醇二葡萄糖苷的提取純化研究[D].吉首:吉首大學(xué),2013

[5]鄭雪,劉澤緯,丁來(lái)欣,等.杜仲葉中松脂醇二葡萄糖苷的提取分離及含量測(cè)定[J].食品科學(xué),2012,33(6):166-170

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R284.2

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10.13638/j.issn.1671-4040.2017.08.102

2017-06-21）