兩個大環(huán)柄菇屬野生菌的鑒定與生境觀測

顧新偉 趙玉蓮 劉 昆 宋小亞 吳邦仁

（1麗水市農(nóng)作物站，浙江麗水323000；2麗水市蓮都區(qū)聯(lián)城農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)站，浙江麗水323000；3麗水市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江麗水323000）

通常認(rèn)為，大環(huán)柄菇屬多為可食用大型真菌，其中不乏具有獨(dú)特風(fēng)味和保健功能的珍貴食用菌[1，2]。大環(huán)柄菇屬真菌子實(shí)體大型，菌蓋常有粗大鱗片，菌柄具可活動的菌環(huán)，大環(huán)柄菇屬共同的宏觀特征常使基層食用菌專業(yè)人員誤認(rèn)。根據(jù)相關(guān)報道，我國該屬物種共6個，其中，脫皮大環(huán)柄菇（Macrolepiota detersa）和裂皮大環(huán)柄菇（M.excoriata）是我國于2010年認(rèn)定的2個新種[1-3]。根據(jù)國內(nèi)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果，大環(huán)柄菇分離應(yīng)用研究多集中于高大環(huán)柄菇（M.procera）。浙江省域報道的大環(huán)柄菇屬種群仍停留于20世紀(jì)80年代的高大環(huán)柄菇與粗鱗大環(huán)柄菇（M.rachodes）2個種，而按照最新的真菌分類與系統(tǒng)學(xué)研究成果，粗鱗大環(huán)柄菇現(xiàn)歸青褶傘屬（Chlorophyllum rachodes），我國通常仍歸環(huán)柄菇屬（Lepiota rachodes）。因此，高大環(huán)柄菇為浙江唯一記錄的大環(huán)柄菇屬物種[4]。

鑒于大環(huán)柄菇在不同生境中有較大的形態(tài)差異，各種間宏觀形態(tài)又具有一定相似性，筆者對采集到的2個大環(huán)柄菇屬子實(shí)體標(biāo)本，在進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定的同時開展rDNA-ITS分析。通過形態(tài)特征與核酸序列比對結(jié)果相互驗(yàn)證，確定兩個標(biāo)本并非浙江省原記錄的高大環(huán)柄菇。

1 材料與方法

1.1 生境觀測分別在浙江麗水市蓮都區(qū)聯(lián)城街道辦事處對面林地，采集標(biāo)本編號M1，在麗水市白云山森林公園右南坡林地，采集標(biāo)本編號M2，觀察兩個大環(huán)柄菇發(fā)生點(diǎn)土壤、肥力、地表植被等主要生境。調(diào)取兩個發(fā)生點(diǎn)附近氣象觀測站相關(guān)數(shù)據(jù)，分析標(biāo)本發(fā)生條件因子，為分離馴化提供參考。

1.2 子實(shí)體形態(tài)特征鑒定對采集的標(biāo)本重點(diǎn)觀察記錄菌蓋形態(tài)、大小、表面及邊緣特征，鱗片形態(tài)、顏色，菌肉質(zhì)地與顏色，菌褶顏色、形態(tài)以及與菌柄的關(guān)系，菌柄長度與直徑、表面特征及內(nèi)部結(jié)構(gòu)、質(zhì)地、基部形態(tài)，菌環(huán)著生位置、形態(tài)、質(zhì)地和表面特征等宏觀特征。將觀察結(jié)果與最新發(fā)表的參考文獻(xiàn)進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢索比對[1-3]。

1.3 rDNA-ITS分析將形態(tài)存在顯著差異的二個標(biāo)本的ITS擴(kuò)增產(chǎn)物由生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測序，測得的序列與GenBank核酸序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，通過BLASTn檢索具有最大相似性的物種。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)生地主要生境兩個標(biāo)本均于9月27日發(fā)現(xiàn)（采集），附近氣象監(jiān)測站提供的數(shù)據(jù)顯示，兩個站點(diǎn)的采集前后一周降水及溫濕度數(shù)據(jù)非常接近。其中白云山莊站采集前一周為陰雨天氣，最大日降雨量23.5 mm，七天總降雨量67.6 mm。出菇前后溫濕度情況見圖1、2。

圖1 出菇期最高、平均、最低溫度

圖2 出菇期平均、最低相對濕度

M1標(biāo)本采集于村莊附近古香樟樹下，野生子實(shí)體1個。距東北側(cè)4 m為村莊道路，距西南20 m為溪灘開墾的果園和菜地，120 m外是甌江小支流。香樟樹下無其它木本植物，郁閉度約75%，地上混生以禾本科為主的多種一年生雜草，雜草與子實(shí)體高度基本相當(dāng)，地表有上年的枯草和香樟枯枝落葉構(gòu)成的有機(jī)質(zhì)，較肥厚。土壤為沙壤土，土地濕潤。該種當(dāng)?shù)爻Ｒ?，采集?dāng)天還發(fā)現(xiàn)另外兩處，共3個，均呈單生狀，生境相似。

M2標(biāo)本發(fā)生森林公園一護(hù)林點(diǎn)進(jìn)出路口旁，周邊馬尾松、泡桐和小葉櫟組成的混交林，高大茂密，郁閉度約65%。地上長一種一年生闊葉植物，高約1 m（后被護(hù)林員砍除），地表因經(jīng)常清掃，枯枝落葉較少，土壤為混雜砂石的粘土。子實(shí)體生長區(qū)域面積約3.5 m2，共生23個，呈散生至群生狀。

2.2 主要形態(tài)特征M1發(fā)現(xiàn)時已呈完全開傘狀。菌蓋直徑11 cm，扁半球形，中間無凸起，邊緣有白色至污白色內(nèi)菌膜殘余，表面被由表皮皸裂成的片狀或塊狀鱗片；鱗片褐色至棕褐色，邊緣少，有脫落，近中間漸密，中間呈龜裂狀連成整片；裸露的表面菌肉會形成平伏的纖毛狀鱗片，呈淡黃白色至灰白色。菌肉白色，肉質(zhì)，較厚。菌褶白色，寬，不等長，離生。菌柄長21 cm，直徑0.7～0.9（1.1）cm，上細(xì)下漸粗，淡棕紅色，表面具密集的粉粒狀棕褐色鱗片，纖維質(zhì)，中間松軟，拔取時基部殘缺。菌環(huán)上位生，中間部分較厚，近肉質(zhì)，灰褐色；邊緣部分膜質(zhì)，薄，脆，向上呈杯狀，部分殘缺。

M2發(fā)現(xiàn)時尚未開傘。菌蓋初時呈球形至橢圓形，直徑3～5.5 cm，幼嫩時表皮呈棕褐色，后逐步皸裂；開傘前中部及以下被由表皮皸裂成的大片棕褐色殼狀鱗片，有少量脫落，剛開傘時呈半球形，直徑5～9 cm，邊緣及底部鱗片脫落；開傘后平展，直徑13～19.5 cm，中間部位被龜裂狀菌皮，周圍具殼狀鱗片；皸裂后裸露的菌肉白色，表面呈纖毛狀。菌肉白色，肉質(zhì)，較厚。菌褶白色，老后變淡棕色，寬，密，離生。菌柄初時長15～26 cm，至開傘時長19～31 cm，直徑1.8～2.5 cm，圓柱形（上下幾乎等粗），表面被棕色細(xì)鱗片；菌柄中段鱗片呈橫向波浪形有序排列，易擦除；基部膨大至近球形，直徑3～3.7 cm。菌環(huán)上位生，中間部分較厚，近肉質(zhì)，上面白色，下面呈灰褐色與白色相間的環(huán)狀，向上呈杯狀；邊緣部分膜質(zhì)，薄，白色，向下呈裙?fàn)?，易碎（圖3）。

圖3 子實(shí)體形態(tài)

2.3 rDNA-ITS分析結(jié)果子實(shí)體基因組DNA的ITS區(qū)域PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)測序及修正分析后，標(biāo)本M1得到一條688 bp的有效堿基序列，序列經(jīng)核酸序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，其與GenBank上傳的“GQ254066.1”標(biāo)本堿基吻合度99%，具99%相似性，同源性最高，該對照標(biāo)本種名（Macrolepiota sp.）尚未確認(rèn)；標(biāo)本M2得到一條686 bp的有效堿基序列，序列經(jīng)核酸序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，其與GenBank上傳的“KJ524560.1”標(biāo)本堿基吻合度99%，相似性96%，同源性最高，該對照標(biāo)本確認(rèn)種名為Macrolepiota detersa（圖4）。

圖4 標(biāo)本M1（左）與M2（右）子實(shí)體ITS區(qū)域堿基序列

3 討論

在浙江省M1被廣泛稱為高大環(huán)柄菇，但其形態(tài)與最新發(fā)布的描述有很大的差異[1]，本次核酸序列比對也表明其與高大環(huán)柄菇的相似性僅92%，證明其同源性只能停留在屬的層面。核酸序列數(shù)據(jù)庫中，大環(huán)柄菇屬的許多上傳堿基序列沒有確認(rèn)到種，要確認(rèn)尚需結(jié)合形態(tài)學(xué)鑒別[5]。根據(jù)宏觀形態(tài)觀測，該標(biāo)本最近似于具托大環(huán)柄菇（M.velosa）[1]。由于工作失誤，沒有取得該種形態(tài)鑒別關(guān)鍵部位——菌托，因而需重新采集完整標(biāo)本進(jìn)行最終確認(rèn)。

大環(huán)柄菇子實(shí)體大型，菌蓋容易破損或與菌柄分離，影響到許多已馴化大環(huán)柄菇的商品性開發(fā)[6]。脫皮大環(huán)柄菇從菌柄基本伸長到菌蓋開傘有3～5 d時間，在這段時間采收，既能保證子實(shí)體單株產(chǎn)量的表達(dá)，又使其質(zhì)量和商品性得到保障。同時，根據(jù)野生狀態(tài)生境分析，脫皮大環(huán)柄菇屬于高溫型菌株，在我國大部分地區(qū)可在春夏和夏秋季栽培，生產(chǎn)時段長。因此，該菌株可能具有較大的馴化栽培前景。