孫 萌*，周長(zhǎng)征

（1.濟(jì)南護(hù)理職業(yè)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250102；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355）

?藥物研究?

鹽酸小檗堿/蒙脫石復(fù)合散的初步藥效學(xué)研究

孫 萌1*，周長(zhǎng)征2

（1.濟(jì)南護(hù)理職業(yè)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250102；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355）

目的 對(duì)鹽酸小檗堿/蒙脫石復(fù)合散進(jìn)行初步藥效學(xué)研究。方法 以大腸桿菌為菌種，稀釋涂布平板法進(jìn)行體外抑菌實(shí)驗(yàn)。結(jié)果 不同濃度鹽酸小檗堿/蒙脫石復(fù)合散均對(duì)大腸桿菌有抑制作用。結(jié)論 復(fù)合散對(duì)大腸桿菌具有顯著作用。

鹽酸小檗堿/蒙脫石復(fù)合散；大腸桿菌；體外抑菌

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

1.1 試劑

營(yíng)養(yǎng)肉湯（上海盛思生化科技有限公司）；瓊脂（杭州天和微生物試劑有限公司）；鹽酸小檗堿（純度98%，陜西森弗高科實(shí)業(yè)有限公司）；醫(yī)用蒙脫石（濟(jì)南康眾醫(yī)藥科技有限公司）；復(fù)合散（自制）；大腸桿菌（菌號(hào)：ATCC25922，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）

1.2 儀器

超凈工作臺(tái)（上海申順生物科技有限公司）；恒溫培養(yǎng)箱（上海精密儀器廠）；恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；恒溫培養(yǎng)搖床（KYC-100C，南京密碼科技有限公司）

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 試劑配制

營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的制備：取肉湯18 g溶解于1000 mL蒸餾水中，再經(jīng)121℃高壓滅菌，冷卻備用。

營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的制備：取瓊脂38 g溶解于1000 mL蒸餾水中，再經(jīng)121℃高壓滅菌，冷卻備用。

2.2 大腸桿菌繁殖體懸液的制備[1-2]

以保存中心的菌種為第0代，后接種培養(yǎng)的菌種為第1代，培養(yǎng)第2代菌種，在此基礎(chǔ)上培養(yǎng)第3代，以第3代菌種進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。

（1）凍干菌種的復(fù)蘇

吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基加入菌種管，使菌種均勻分散。

（2）菌種的接種傳代

取（1）項(xiàng)中菌種接種到試管內(nèi)，在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h，得第1代菌種，依次培養(yǎng)得第3代菌種。

（3）菌懸液的制備

測(cè)定第3代菌種的粗濃度，調(diào)整菌濃度為1.5×108 cfu/mL，用瓊脂液稀釋成1×104 cfu/mL菌懸液，振蕩孵育24 h，在4℃下備用。

2.3 稀釋涂布平板

（1）涂布操作方法

吸取0.1 mL菌液于瓊脂平板上涂布，每個(gè)稀釋度重復(fù)涂布三次。

（2）菌落計(jì)數(shù)

涂布的菌種在37 ℃下培養(yǎng)24 h后統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)。

（3）對(duì)照菌懸液

取10支無(wú)菌試管，編號(hào)為1～10號(hào)，前9支中均加入0.9 mL瓊脂培養(yǎng)液，在1號(hào)中加0.1 mL菌液，從1號(hào)中吸0.1 mL菌液加入第2管，依次稀釋至第9管，得稀釋度為10-1～10-9的菌液。取10-7菌液涂布平板，重復(fù)三次，在37℃下培養(yǎng)24 h，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，得到1 mL菌液的菌落數(shù)為250×108個(gè)。

（4）抗菌藥液抑菌效果

分別取鹽酸小檗堿和復(fù)合散，配成8 mg/mL的溶液，為貯存液，然后稀釋成4 mg/mL、2 mg/mL、1 mg/mL、0.5 mg/mL、0.25 mg/mL、0.125 mg/mL、0.0625 mg/mL不同濃度。按對(duì)照菌液方法稀釋，取稀釋度為10-7的菌液涂布，在37℃下培養(yǎng)24 h，見(jiàn)表1。

表1 不同濃度藥液對(duì)大腸桿菌抑菌效果（n，%）

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

當(dāng)根據(jù)結(jié)果可知，當(dāng)復(fù)合散濃度由1 mg/mL增到2 mg/mL時(shí)，對(duì)大腸桿菌的抑菌率由65.6%增加至72.4%，趨于平穩(wěn)，可為最佳得抑菌濃度，鹽酸小檗堿/蒙脫石復(fù)合散對(duì)大腸桿菌具有顯著作用。

[1] 夏金蘭,王 春,劉新星.抗菌劑及其抗菌機(jī)理.中南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2004,35(1):31-38.

[2] 林秀蕓.十六角蒙脫石與制霉菌素治療小兒霉菌性腸炎的比較[J].新藥與臨床,1995,4(5):279.

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ISSN.2095-8242.2017.056.11050.01

本文編輯：趙小龍

孫萌