錦州市手足口病毒核酸檢測(cè)結(jié)果分析

楊飛

摘要：目的 分析錦州市手足口病病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果，為臨床手足口病防治提供依據(jù)。方法 選取100例2015年錦州市臨床臨床診斷為手足口病病例的咽拭子標(biāo)本，提取樣本核酸，用RT-PCR方法檢測(cè)柯薩奇病毒A16型（CA16）、腸道病毒71型（EV71）、和非EV71、CA16的其他腸道病毒（EV）。結(jié)果 2015年3～12月份共采集手足口病病例標(biāo)本100份。核酸檢測(cè)結(jié)果顯示，陽(yáng)性標(biāo)本86例（86.00%）；在2015年3～12月均有手足口病患者出現(xiàn)，3～5月份病例數(shù)急劇增加，5月份為最高峰，陽(yáng)性檢出率為45.35%，6～12月份病例數(shù)逐漸下降；男孩核酸檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于女孩（P<0.05）；在不同年齡組之間，1歲組，EV71、EV陽(yáng)性數(shù)構(gòu)成比均為年齡組中最高。結(jié)論 錦州市2015年3～12月份均有手足口病發(fā)生，病原以EV71感染為主，在不同月份、年齡、性別上發(fā)病率存在一定差異。

關(guān)鍵詞：手足口??；柯薩奇病毒A16型；腸道病毒71型

中圖分類(lèi)號(hào)：R440 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）21-0184-02

Analysis of Nucleic Acid Test Results of Hand-Foot-Mouth Virus in Jinzhou City

YANG Fei

（Jinzhou Disease Prevention and Control Center，Jinzhou 121000，Liaoning，China）

Abstract：Objective To analyze the results of hand foot mouth disease in Jinzhou city，provide the basis for clinical prevention and treatment of HFMD.Methods 100 cases of clinical diagnosis in Jinzhou city in 2015 HFMD cases of throat swab specimens，samples of nucleic acid，RT-PCR was used to detect Coxsackie virus type A16（CA16），enterovirus 71（EV71），and non EV71，other intestinal virus CA16（EV）.Results From March to December in 2015 were collected 100 samples of HFMD cases.Nucleic acid detection results showed that the positive specimens of 86 cases （86.00%）；From March to December in 2015，there were hand，foot and mouth disease patients，the number of cases increased from March to May，the highest peak in May，the positive detection rate was 45.35%，from June to December the number of cases were decreased；the positive rate of boys was significantly higher than that of nucleic acid detection girl（P<0.05）；among different age groups，1 years old group，EV71，the constituent ratio were the highest in EV age group.Conclusion Hand foot mouth disease occurred in Jinzhou from March to December in 2015.The main cause of infection was EV71 infection，and there were some differences in age，sex and incidence in different months.

Key words：Hand，foot and mouth disease；Coxsackie virus A16；Enterovirus 71 type

手足口病是多種病毒引起的，患者主要表現(xiàn)為皮疹或皰疹，發(fā)病部位集中在手、足、口臀部位。手足口病是一種自限性疾病，一般可在7 d內(nèi)痊愈，但少部分患兒病情嚴(yán)重可出現(xiàn)心肌炎、腦膜炎等合并癥，病死率較高。研究指出[1]，引起手足口病的主要病原為CA16、EV71。近年來(lái)，錦州市手足口病發(fā)病率不斷上升，為掌握錦州市手足口病病原學(xué)及特點(diǎn)，本研究中對(duì)錦州市100例臨床診斷病例標(biāo)本進(jìn)行EV71和CA16核酸檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取100例2015年3～12月份錦州市臨床臨床診斷為手足口病病例的咽拭子標(biāo)本，其中女44例，男56例，年齡6個(gè)月～7歲。標(biāo)本為患者咽喉部分泌液或皰疹液，將標(biāo)本置于Hanks病毒采樣管， 劇烈震蕩10 min，3000 rpm離心30 min，取上層清液提取核酸，若不能即時(shí)檢測(cè)則保存在-20 ℃冰箱內(nèi)。

1.2方法

按照衛(wèi)生部手足口病預(yù)防控制指南要求，采用RT-PCR方法檢測(cè)患者咽拭子標(biāo)本中病原核酸。

1.3主要試劑及以期

RNA提取試劑盒：瑞士Roche公司，Roche High Pure Viral RNA Kiit；熒光定量PCR試劑盒：中山達(dá)安基股份有限公司，Coxsackievirus virus A1 6 real time RT-PCR kit，Enterovirus type71 realtime RT-PCR kit；美國(guó)ABI，Stepone-PlusTM Real-Time PCR System。endprint

1.4病毒核酸檢驗(yàn)

試劑盒說(shuō)明操作進(jìn)行病毒RNA提??；Real Time RT-PCR擴(kuò)增預(yù)混合試劑操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，反應(yīng)條件有：逆轉(zhuǎn)錄及預(yù)擴(kuò)增：40 ℃，25 min，90 ℃，3 min；擴(kuò)增：93 ℃，15 s，55 ℃，45 s，共40個(gè)循環(huán)。Ct≤34.9，且樣品FAM通道有明顯擴(kuò)增曲線為陽(yáng)性[2]。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS15.0軟件分析及處理數(shù)據(jù)，以百分比（%）表示計(jì)數(shù)資料，組間比較以？字2檢驗(yàn)，當(dāng)P<0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1核酸檢測(cè)結(jié)果分析

2015年3～12月份共采集手足口病病例標(biāo)本100份。核酸檢測(cè)結(jié)果顯示，陽(yáng)性標(biāo)本86例（86.00%），其中普通病例樣本81例，重癥樣本5例。其中，EV71陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)64份，陽(yáng)性率為74.40%，重癥樣本4例，占重癥陽(yáng)性的80.00%；其次為其他腸道病毒（EV）陽(yáng)性數(shù)18例，陽(yáng)性率為20.90%，最后為CA16，檢出陽(yáng)性標(biāo)本4例，陽(yáng)性率為4.70%，1例為重癥樣本，占重癥陽(yáng)性的20.00%。

2.2不同性別、年齡核酸檢測(cè)結(jié)果分析

86份陽(yáng)性病例標(biāo)本中，女孩病例28例（32.60%），男孩病例58例（67.40%），男孩核酸檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于女孩（P<0.05）。在不同年齡組之間，1歲組，EV71、EV陽(yáng)性數(shù)構(gòu)成比均為年齡組中最高，2歲年齡，CA16陽(yáng)性率高于其他年齡組，其次為EV和EV71，低于1歲組，但較其他年齡組要高，見(jiàn)表1。

2.3不同月份核酸檢測(cè)結(jié)果

在2015年3～12月均有手足口病患者出現(xiàn)，其中3～5月份病例數(shù)急劇增加，5月份為最高峰，5月份陽(yáng)性檢出率為45.35%，6～12月份病例數(shù)逐漸下降，9月份時(shí)稍有升高，但總體呈下降趨勢(shì)，見(jiàn)表2。

3討論

目前手足口病流行較普遍，主要在亞洲地區(qū)流行，已成為嚴(yán)重的公共社會(huì)問(wèn)題。準(zhǔn)確對(duì)手足口流行的病毒進(jìn)行檢測(cè)，可對(duì)手足口病的預(yù)防與治療提供指導(dǎo)意義。采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)手足口患者糞便中或咽拭子中的病原體，每份標(biāo)本都是單管封閉式擴(kuò)增檢測(cè)，使標(biāo)本間交叉感染的風(fēng)險(xiǎn)大大降低，且操作方便簡(jiǎn)便，能夠快速地發(fā)出報(bào)告[3-4]。通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，2015年引起本市手足口病的腸道病毒以EV71為主，其次為CA16；而在5例重癥病例中EV71陽(yáng)性4例，占重癥總陽(yáng)性的80%，顯示重癥病例以EV71病毒感染為主，表明該病毒傳染性強(qiáng)，致病率高，患兒病情進(jìn)展快，易引起神經(jīng)毒性，可侵犯心、腦、肺等重要器官，患兒死亡率高。

手足口病四季均口發(fā)病，但冬季發(fā)病較少，最易發(fā)病季節(jié)為春末夏初。本研究顯示，2012年本市3～12月均有發(fā)病，發(fā)病月份以5分月為最高峰，至7份以后發(fā)病逐漸下降，但仍以EV71引起的感染為主。在男女比例上，男孩發(fā)病明顯高于女孩，與該病主要經(jīng)糞-口和呼吸道飛沫傳播，并且污染的手、日常用品和食品均會(huì)傳播病毒，而男孩相對(duì)好活動(dòng)，使傳染的幾率大大增加。從年齡上看，1歲組，EV71、EV陽(yáng)性數(shù)構(gòu)成比均為年齡組中最高，2歲年齡，CA16陽(yáng)性率高于其他年齡組，其次為EV和EV71，低于1歲組，但較其他年齡組要高，可見(jiàn)1～2歲仍是手足口病的高發(fā)年齡段，其原因?yàn)榇穗A段兒童對(duì)病毒的防御能力相對(duì)較差，故發(fā)病率較高，因此需要特別加強(qiáng)對(duì)該年齡段兒童手足口病病原的檢測(cè)，以便能夠早期發(fā)現(xiàn)病例，并采取隔離措施，以防疾病進(jìn)一步傳播。因此，錦州市手足口病2015年3～12月份都有病例發(fā)生，腸道病毒仍以EV71為主，主要發(fā)病人群分布于1～2歲年齡段，且5～6月份為手足口的發(fā)病高峰期。手足口病患兒感染后不能得到終生免疫，且再次發(fā)病的幾率仍較高。而目前尚無(wú)此病防御疫苗，因此應(yīng)加強(qiáng)對(duì)手足口病的預(yù)防和治療。提高實(shí)驗(yàn)室病毒檢出率，并有效鑒別診斷RV71感染病例，有助于臨床選擇臨床治療方案，可有效減少重癥和死亡病例[5]。

綜上所述，錦州市2015年3～12月份均有手足口病發(fā)生，病原以EV71為主，在不同月份、年齡、性別上發(fā)病率存在一定差異。

參考文獻(xiàn)：

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[5]孫景異，王晨，高秀媛，等.2010-2011年西城區(qū)（南區(qū)）手足口病原監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J].國(guó)際病毒學(xué)雜志，2012，19（4）：165-167.

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