蔣剛健

(漯河市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 漯河 462000)

酶聯(lián)免疫吸附法檢測與甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)在梅毒檢驗(yàn)中對比分析①

蔣剛健

(漯河市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 漯河 462000)

目的：探討酶聯(lián)免疫吸附法和甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)對于梅毒的臨床診斷價(jià)值。方法：在本院2013-02～2016-04收治的梅毒疑似患者及梅毒高危患者中選取1635例，分別對其進(jìn)行甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附法檢測，其中選擇梅毒螺旋體特異性抗體明膠凝集試驗(yàn)作為確診標(biāo)準(zhǔn)，對兩種檢測方法的診斷結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果： ELISA法對于梅毒抗體的檢測靈敏度、漏診率均明顯優(yōu)于TRUST法，差異具有顯著性(P<0.05)；對于TRUST陽性標(biāo)本，ELISA法光密度值>1.0者占整體80%以上(25/30)；對于TRUST陰性標(biāo)本，ELISA法光密度值<1.0者占整體80%以上(21/22)；ELISA法中滴度同患者病程并無明顯相關(guān)性，而TRUST法滴度則歲病程逐漸變化。結(jié)論：梅毒檢測方法的選擇應(yīng)根據(jù)診斷和治療不同需要而定，其中酶聯(lián)免疫吸附法可用于梅毒篩查和檢測，甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)法可應(yīng)用于臨床療效評估及病情進(jìn)展判斷，以加強(qiáng)梅毒感染判斷的準(zhǔn)確性 ，為治療方案的制定提供可靠依據(jù)。

梅毒試驗(yàn)； 甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)； 酶聯(lián)免疫吸附法

梅毒是一種常見性傳播疾病，其致病菌為蒼白螺旋體，可通過明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)對其作出準(zhǔn)確的定性判斷。調(diào)查指出，近年來我國梅毒感染率呈逐年增加趨勢，嚴(yán)重威脅公共健康衛(wèi)生，如何有效篩查梅毒患者已成為臨床研究的熱點(diǎn)[1]。目前臨床存在多種梅毒檢測方法，其中酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay，ELISA)是一種較為常用的梅毒檢測方法，靈敏度和特異性較佳，但無法提示患者病情嚴(yán)重程度；甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(Toluidine Red Unheated Serum Reagin Test，TRUST)則可有效反應(yīng)患者病程變化，但無法解決假陽性高問題[2]。本次研究以本院近年來收治的1635例梅毒疑似或高?；颊邽橛^察樣本，分別對其進(jìn)行ELISA及TRUST檢驗(yàn)，對兩種檢測方法的診斷價(jià)值進(jìn)行評估，以期為臨床提供更為準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)的梅毒篩查方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在本院2013-02～2016-04收治的梅毒疑似患者及梅毒高?；颊咧羞x取1635例，男947例，女688例，年齡34～67歲，平均(44.9±8.3)歲，所有患者均簽署知情同意書，且本次研究已通過本院倫理委員會(huì)審批。

1.2 試劑與儀器

①基本儀器：PW-960洗板機(jī)與微量加樣器(由深圳匯松科技有限公司生產(chǎn))；ST-360酶標(biāo)儀(由上海天呈科技有限公司生產(chǎn))，儀器均經(jīng)校準(zhǔn)，且性能良好。②主要試劑：TRUST試劑盒(由上海榮盛生物藥業(yè)有限公司提供)、ELISA試劑盒(由上海科華生物工程股份有限公司提供)、TPPA試劑盒(由日本FU-JIKEBIO公司提供)。

1.3 方法

在清晨抽取患者5mL靜脈血樣，靜置5min后進(jìn)行血清分離，患者均分別接受TRUST法及ELISA法梅毒抗體檢測，其中將一項(xiàng)陽性視為初篩陽性，對于初篩陽性患者進(jìn)行再次復(fù)查，并以TPPA法檢測結(jié)果作為評估標(biāo)準(zhǔn)。在本次研究中，ELISA法及TRUST法均按照試劑盒相關(guān)操作規(guī)程實(shí)施操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用軟件SPSS18.0，計(jì)數(shù)資料表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差形式，并接受t檢驗(yàn)，計(jì)量資料則表示為百分比形式，并對其進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

本次研究中，1635例患者共計(jì)52例初篩陽性(4例TRUST陽性，22例ELISA陽性，26例雙陽性)，陽性率為3.06%，49例樣本均經(jīng)由TPPA復(fù)查確診為梅毒抗體陽性。在樣本復(fù)查中，ELISA共計(jì)檢出48例陽性，TRUST共計(jì)檢出30例陽性，TPPA共計(jì)確認(rèn)49例陽性。以TPPA檢測結(jié)果作為評估標(biāo)準(zhǔn)，兩種檢測方法對于梅毒抗體的診斷價(jià)值對比見表1，由表中數(shù)據(jù)可知，ELISA法對于梅毒抗體的檢測靈敏度、漏診率均明顯優(yōu)于TRUST法，差異具有顯著性(P<0.05)。

表1 LISA與TRUST對于梅毒抗體 的診斷價(jià)值對比結(jié)果

2.2 光密度值分布

見表2。由表中數(shù)據(jù)可知，對于TRUST陽性標(biāo)本，ELISA法光密度值>1.0者占整體80%以上(25/30)；對于TRUST陰性標(biāo)本，ELISA法光密度值<1.0者占整體80%以上(21/22)，由表中數(shù)據(jù)可知，ELISA法中滴度同患者病程并無明顯相關(guān)性，而TRUST法滴度則歲病程逐漸變化。

表2 52例初篩梅毒患者ELISA光密度值分布

3 討論

梅毒是一種常見慢性性傳播疾病，主要為梅毒螺旋體感染所致一系列慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病，可造成機(jī)體多系統(tǒng)、多臟器功能受損，造成患者出現(xiàn)功能障礙等多種癥狀，嚴(yán)重時(shí)可危及其生命安全[3]。相關(guān)資料顯示，梅毒可通過多種途徑傳播，如血源性傳播、性接觸傳播、間接接觸傳播等。特別是隨著近年來我國居民生活觀念的轉(zhuǎn)變，梅毒感染率呈逐年上升趨勢[4]。調(diào)查指出，目前我國部分地區(qū)梅毒發(fā)病率已達(dá)到2.32%，嚴(yán)重威脅公共健康。因此，加強(qiáng)梅毒篩查與檢驗(yàn)具有十分重要的臨床意義。

目前臨床公認(rèn)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)是最為有效的梅毒檢測方法，其中以TPPA較為常用。TPPA主要通過對Nichols株梅毒螺旋體特異性抗原進(jìn)行提取，包被以紅色明膠顆粒，對梅毒病原抗體進(jìn)行檢測，其敏感性和特異性較佳[5]。盡管TPPA在梅毒檢測方面具有顯著優(yōu)勢，但由于試劑盒成本較高，無法作為常規(guī)篩查項(xiàng)目全面普及。因此，尋找一種更為簡便、經(jīng)濟(jì)、有效的梅毒篩查及檢測方法十分重要。

TRUST是一種梅毒血清學(xué)試驗(yàn)，主要用于抗心磷脂抗體檢測，但由于TRUST無法解決假陰性及假陽性較高的問題，其臨床應(yīng)用局限性較大。ELISA法主要是利用雙抗原夾心法對梅毒螺旋體特異性IgG、IgM抗體進(jìn)行檢測，是目前應(yīng)用較為廣泛的一種梅毒篩查和檢測方法。在本次研究中，ELISA法對于梅毒患者的檢測敏感率及漏診率均明顯優(yōu)于TRUST法(P<0.05)，提示在梅毒篩查及檢測方面ELISA法具有更為顯著的優(yōu)勢，同賈麗[6]等報(bào)道中的結(jié)論基本一致。同ELISA相比，TPPA法可有效檢出潛伏梅毒病毒，從而對妊娠梅毒和胎傳梅毒進(jìn)行有效控制。但是需要注意的是，梅毒患者在治療后其梅毒螺旋體抗原水平顯著下降，盡管仍存在一定IgG抗體，但其水平不隨患者病情進(jìn)展出現(xiàn)變化，因此在TPPA試驗(yàn)中式中呈陰性。因此TPPA試驗(yàn)無法應(yīng)用于大批量、自動(dòng)化檢測，且對于再感染、復(fù)發(fā)等評估效果較差。在梅毒篩查方面，使用ELISA法取代TPPA法可在保證檢測精度的前提下提高篩查效率。

臨床研究指出，人體在感染梅毒螺旋體后，會(huì)產(chǎn)生特異性抗體、抗心磷脂非特異性抗體，其中梅毒特異性抗體具有出現(xiàn)早、存在時(shí)間長的特點(diǎn)，因此可作為梅毒螺旋體感染診斷的重要依據(jù)，如TPPA法、ELISA法均以梅毒特異性抗體作為檢測對象。盡管上述兩種檢測方法具有敏感性高，準(zhǔn)確性佳的特點(diǎn)，但由于梅毒特異性抗體同患者病情進(jìn)展變化相關(guān)性不顯著，因此采用ELISA法、TPPA法對梅毒患者進(jìn)行病情評估時(shí)往往無法得到可靠結(jié)論。TRUST法主要以心磷脂類作為檢測用抗原，陳述文[7]等研究指出，在采用TRUST法對梅毒感染者進(jìn)行診斷時(shí)，初期梅毒病灶滴度較低，二期梅毒者滴度呈顯著上升趨勢，三期患者則逐漸降低；周亮等研究認(rèn)為，采用ELISA法作為梅毒患者初篩方法，采用TRUST作為病情評估方法，可有效提高梅毒螺旋體感染診斷效果。在本次研究中，ELISA法中滴度同患者病程并無明顯相關(guān)性，而TRUST法滴度則歲病程逐漸變化，同相關(guān)報(bào)道中的結(jié)論基本一致，提示TRUST法可應(yīng)用于梅毒患者病情進(jìn)展及療效評估中[8]。

綜上所述，梅毒檢測方法的選擇應(yīng)根據(jù)診斷和治療不同需要而定，其中ELISA法可用于梅毒篩查和檢測，TRUST法可應(yīng)用于臨床療效評估及病情進(jìn)展判斷，以加強(qiáng)梅毒感染判斷的準(zhǔn)確性 ，為治療方案的制定提供可靠依據(jù)。

[1]謝桂容，楊林. 甲苯胺紅血清試驗(yàn)與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在妊娠期女性梅毒篩查中的應(yīng)用對比[J]. 中國性科學(xué),2015，24(10):55-57

[2]郭家權(quán)，洪敏，林永前. 酶聯(lián)免疫吸附法檢測與甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)在梅毒檢驗(yàn)中應(yīng)用價(jià)值的比較[J]. 廣東醫(yī)學(xué),2014, 35(5):738-740

[3]謝海莉，趙進(jìn)，李偉，等. 梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能檢測分析[J]. 中國皮膚性病學(xué)雜志,2013, 27(1):49-51

[4]夏浩海，錢小蓮. 快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在梅毒診斷中的應(yīng)用[J]. 國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2015，35(8):1141-1142

[5]邵先兵，張燕，張娜. 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)及甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)在梅毒檢測中的檢驗(yàn)效能評價(jià)[J]. 中國性科學(xué),2015，24(5):49-52

[6]賈麗. 梅毒螺旋體不同檢測方法的比較[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,8(29):91-92

[7]陳述文，梁連輝，蔡常輝. 四種方法檢測早期梅毒螺旋體感染的臨床應(yīng)用評價(jià)[J]. 國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012, 33(21):2633-2634

[8]傅琳玲，丁琦，方晶，等. 不同感染狀態(tài)下梅毒患者血清白介素2、10和12檢測結(jié)果分析[J]. 臨床皮膚科雜志,2012, 41(6):351-353

蔣剛健(1984～)男，河南漯河人，本科，中級主管技師。

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2017-04-17)