枸杞多糖對腦膠質(zhì)瘤病人免疫調(diào)節(jié)作用及預(yù)后的影響

單鐵強(qiáng)，單鐵英，董 靜，潘秀蘭，趙沙河，王鳴飛，韓艷珍，袁 征，鄭海萍

枸杞多糖對腦膠質(zhì)瘤病人免疫調(diào)節(jié)作用及預(yù)后的影響

單鐵強(qiáng)1，單鐵英2，董 靜3，潘秀蘭2，趙沙河4，王鳴飛5，韓艷珍2，袁 征2，鄭海萍2

目的探討枸杞多糖(LBP)對腦膠質(zhì)瘤病人的免疫功能及預(yù)后的影響。方法將60例經(jīng)手術(shù)后病理確診的惡性腦膠質(zhì)瘤病人，隨機(jī)分為對照組和試驗組。對照組術(shù)后2周開始腫瘤放療，療程6周，放療引起的不良反應(yīng)給予常規(guī)對癥處理；試驗組在對照組治療基礎(chǔ)上服用枸杞多糖6 mg/(kg·d)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測兩組病人外周血中免疫效應(yīng)細(xì)胞：CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞變化；ELISA法檢測兩組病人血清細(xì)胞因子：腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-2(IL-2)水平變化；比較兩組病人腫瘤復(fù)發(fā)率和中位生存期。結(jié)果與對照組比較，試驗組病人外周血CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞數(shù)量增加，血清TNF-α和IL-2含量增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)；與對照組比較，試驗組腦膠質(zhì)瘤病人2年和3年腫瘤復(fù)發(fā)率降低，病人生存率提高(Plt;0.05)。結(jié)論枸杞多糖可提高腦膠質(zhì)瘤病人機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)病人抗腫瘤的能力，且能降低腫瘤的復(fù)發(fā)率，提高病人的生存率。

腦膠質(zhì)瘤；枸杞多糖；免疫細(xì)胞；細(xì)胞因子；腫瘤復(fù)發(fā)率；生存期

腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的原發(fā)性腫瘤，具有惡性程度高、生長速度快和向周圍組織呈浸潤性生長的病理特點(diǎn)。手術(shù)治療后易復(fù)發(fā)，致死率、致殘率均較高。因此，尋找新的有效藥物及治療方法尤為重要。

枸杞子屬于傳統(tǒng)中藥材，枸杞多糖(lycium bara rum polysaccharides，LBPs)是其主要成分之一。已有實驗結(jié)果顯示，LBPs對機(jī)體的免疫功能具有顯著增強(qiáng)作用，達(dá)到有效地抗腫瘤目的，它能調(diào)節(jié)機(jī)體自身免疫系統(tǒng)功能，改善免疫功能同時達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞目的[1]。目前LBPs通過增強(qiáng)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制尚不明確。本研究觀察LBPs對腦膠質(zhì)瘤病人的免疫功能調(diào)節(jié)作用，為臨床預(yù)防和治療腦膠質(zhì)瘤提供理論和依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院2011年1月—2012年6月惡性腦膠質(zhì)瘤病人30例為對照組，女14例，男16例，年齡22歲～68歲，平均45歲；選擇2012年7月—2013年1月惡性腦膠質(zhì)瘤病人30例為試驗組，女12例，男18例，年齡23歲～69歲，平均年齡46歲。兩組病人術(shù)后病理診斷為惡性腦膠質(zhì)瘤，且經(jīng)CT或MRI確診為術(shù)后腫瘤殘存，Karnofsky評分為70分。兩組病人性別、年齡、腫瘤分型及殘留部位等比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Pgt;0.05)。對照組病人經(jīng)手術(shù)治療后2周進(jìn)行放射治療，治療時間8周；放射治療期出現(xiàn)的不良反應(yīng)采用常規(guī)對癥處理如保肝、止吐等。試驗組在對照組治療基礎(chǔ)上增加口服枸杞多糖，濃度為100 μg/mL，6 mg/(kg·d)。

1.2 研究藥物 枸杞多糖(LBP)由華北制藥集團(tuán)新藥研究開發(fā)中心分離純化，純度gt;96%；腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-2(IL-2)ELISA試劑盒購自美國abcam公司；鼠抗人CD4+單克隆抗體，鼠抗人CD8+單克隆抗體購自BD公司。

1.2.1 CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞檢測 治療第4周和第8周時，分別抽取兩組病人空腹靜脈血，使用肝素抗凝，加入不同熒光標(biāo)記的單克隆抗體各10 μL，放入室溫孵育15 min，加入紅細(xì)胞裂解液，以磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗滌2次后采用流式細(xì)胞儀檢測。測定5 000個細(xì)胞，記錄CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞分別占淋巴細(xì)胞的百分比。

1.2.2 TNF-α和IL-2含量檢測 治療第4周和第8周時，分別抽取兩組病人空腹靜脈血，使用ELISA試劑盒，嚴(yán)格按照說明書，測定兩組病人血清TNF-α和IL-2含量。

1.2.3 腫瘤復(fù)發(fā)率和中位生存期 比較兩組病人1年、2年、3年腫瘤復(fù)發(fā)率和中位生存期變化。

2 結(jié) 果

2.1 兩組病人血清TNF-α和IL-2比較 治療第4周和第8周時，試驗組腦膠質(zhì)瘤病人血清IL-2和TNF-α含量明顯增加，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。詳見表1。

組別 第4周 TNF-αIL-2 第8周 TNF-αIL-2對照組1.04±0.137.04±0.211.00±0.166.92±0.36試驗組4.37±0.271)19.16±1.261)4.24±0.231)19.05±1.851) 與對照組比較,1)Plt;0.05。

2.2 兩組病人外周血CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞數(shù)量比較 治療第4周和第8周時，試驗組病人CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞數(shù)量明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。詳見表2。

組別 第4周 CD4+T細(xì)胞CD8+T細(xì)胞 第8周 CD4+T細(xì)胞CD8+T細(xì)胞對照組36.37±4.3228.97±3.2935.29±5.2727.80±5.67試驗組39.37±0.891)32.27±2.361)38.42±3.431)31.18±0.891) 與對照組比較,1)Plt;0.05。

2.3 兩組病人腫瘤生存率和復(fù)發(fā)率比較 與對照組比較，試驗組腦膠質(zhì)瘤病人2年和3年腫瘤復(fù)發(fā)率明顯降低；3年和5年生存率明顯提高(Plt;0.05)。兩組病人1年腫瘤復(fù)發(fā)率和生存率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Pgt;0.05)。詳見表3、表4。

表3 兩組病人腫瘤復(fù)發(fā)率比較 例(%)

表4 兩組病人腫瘤生存率比較 例(%)

3 討 論

腦膠質(zhì)瘤傳統(tǒng)治療方法為手術(shù)切除、術(shù)后放療和化療，雖然手術(shù)切除后，暫緩腫瘤的壓迫癥狀，但手術(shù)治療后易復(fù)發(fā)，致死率、致殘率均較高。腫瘤病人接受手術(shù)治療后進(jìn)行化療藥物和放射治療，損傷和抑制病人機(jī)體的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致病人免疫功能下降，不僅獲得不良的治療效果，還可能發(fā)生一些不良反應(yīng)。因此，治療腫瘤關(guān)鍵是解決腫瘤病人機(jī)體的免疫功能低下。

近代藥理研究表明，LBP可增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，無論是對機(jī)體體液免疫還是對細(xì)胞免疫[1-5]。本研究觀察LBP對腦膠質(zhì)瘤病人外周血免疫功能調(diào)節(jié)的作用。免疫細(xì)胞如CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞在機(jī)體外周血中比例及細(xì)胞因子在血清中含量，均可反映機(jī)體免疫功能強(qiáng)弱。機(jī)體的抗腫瘤免疫主要依靠T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫，血液中發(fā)揮功能T淋巴細(xì)胞分為兩個亞群CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，而CD8+T細(xì)胞是在CD4+T細(xì)胞輔助和其產(chǎn)生的大量細(xì)胞因子作用下才能殺傷腫瘤細(xì)胞。有研究結(jié)果表明：腫瘤病人外周血中，當(dāng)CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞在外周血所占比例減少時，機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答降低，有利于腫瘤發(fā)生。CD4+T細(xì)胞是一群具有調(diào)節(jié)體液和細(xì)胞介導(dǎo)免疫功能細(xì)胞，分為Th1型和Th2型細(xì)胞。Th1型細(xì)胞釋放白介素-2和干擾素-γ(IFN-γ)，參與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，Th2細(xì)胞釋放白介素-4、5、10，參與體液介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。CD8+T細(xì)胞是細(xì)胞毒性T細(xì)胞，對機(jī)體內(nèi)腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用。成熟的CD8+T細(xì)胞激活后表達(dá)Fas配體(FasL)，它們與Fas配結(jié)后誘導(dǎo)表面Fas分子發(fā)生三聚化，之后與傳導(dǎo)分子結(jié)合，由后者聚集并激活半胱天冬蛋白酶-8(caspase-8)殺傷瘤細(xì)胞，F(xiàn)as途徑認(rèn)為是殺傷靶細(xì)胞主要方式[6-9]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)LBP治療第4周和8周時，試驗組腦膠質(zhì)瘤病人外周血CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞比例增加，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。說明LBP可明顯增加病人外周血CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞數(shù)量，有利于機(jī)體對腫瘤細(xì)胞起到殺傷作用。

細(xì)胞因子IL-2在機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié)起重要作用[10-12]，IL-2能增強(qiáng)外周血中免疫細(xì)胞如單核細(xì)胞產(chǎn)生大量TNF-α，達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞目的。IL-2能激活淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞(LAK細(xì)胞)和自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)，NK細(xì)胞激活后能釋放IFN-γ和其他細(xì)胞因子殺傷瘤細(xì)胞。LAK細(xì)胞不但殺傷機(jī)體新出現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞，且也殺傷不同種類的腫瘤細(xì)胞[13-16]。TNF-α除對腫瘤細(xì)胞直接殺傷作用外，TNF-α在CD8+T細(xì)胞成熟為效應(yīng)T細(xì)胞，轉(zhuǎn)化為記憶性T細(xì)胞過程中起重要作用。TNF-α含量減少時發(fā)生效應(yīng)性CD8+T細(xì)胞數(shù)量下降，使其不轉(zhuǎn)化為記憶性T細(xì)胞，這些結(jié)果表明，TNF-α不僅對腫瘤細(xì)胞具有直接殺傷作用，還可通過增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞作用抑制腫瘤細(xì)胞生長。有研究結(jié)果表明，LBP治療第4周和8周時，試驗組腦膠質(zhì)瘤病人外周血TNF-α和IL-2含量增加，有利于殺傷腫瘤細(xì)胞。

本研究中對照組和經(jīng)枸杞多糖治療組的1年復(fù)發(fā)率和生存率，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Pgt;0.05)；治療組3年、5年復(fù)發(fā)率均明顯低于對照組，3年、5年生存率均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。表明枸杞多糖可降低術(shù)后腦膠質(zhì)瘤病人3年、5年的復(fù)發(fā)率和提高3年、5年的生存率，但對1年復(fù)發(fā)率和1年的生存率影響不明顯。這可能與枸杞多糖提高術(shù)后腦膠質(zhì)瘤病人機(jī)體免疫功能密切相關(guān)。

綜上所述，枸杞多糖能促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤病人與殺傷腫瘤有關(guān)的免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子含量增加，增強(qiáng)病人機(jī)體的免疫能力達(dá)到殺傷腫瘤目的，并降低腦膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)率和延長病人的生存期。但其確切的分子生物學(xué)機(jī)制及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制還不清楚，有待進(jìn)一步研究。

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2016-11-12)

(本文編輯 薛妮)

R739.4 R255.2

B

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.20.040

1672-1349(2017)20-2632-03

河北省科技計劃項目(No.15277781D)

1.河北省秦皇島市海港醫(yī)院(河北秦皇島 066000)；2.河北工程大學(xué)；3.河北省邯鄲市疾病預(yù)防與控制中心；4.河北省永年縣第一醫(yī)院；5.河北省邯鄲市婦幼醫(yī)院

單鐵英，E-mail：sty751218@163.com

信息：單鐵強(qiáng)，單鐵英，董靜，等.枸杞多糖對腦膠質(zhì)瘤病人免疫調(diào)節(jié)作用及其預(yù)后的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(20)：2632-2634.