□ 葉玉華 貴州省黔西南州食品藥品檢驗檢測中心

乳粉中金黃色葡萄球菌與沙門氏菌定性檢測能力驗證結(jié)果與分析

□ 葉玉華 貴州省黔西南州食品藥品檢驗檢測中心

為了提升實驗室食品中金黃色葡萄球菌與沙門氏菌的檢測能力，增強實驗室競爭能力，本實驗室參加了貴州省食品藥品檢驗所組織的乳粉中金黃色葡萄球菌與沙門氏菌定性檢測能力驗證。根據(jù)能力驗證作業(yè)指導(dǎo)書、《GB 4789.10-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》與《GB 4789.4-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌菌檢驗》的要求，分別對QC-001B-4金黃色葡萄球菌待測樣品和QC-001A-5沙門氏菌待測樣品進行增菌、分離與鑒定。兩個待測樣品中，其中QC-001B-4檢出金黃色葡萄球菌，QC-001A-5未檢出沙門氏菌，2個樣品檢測結(jié)果均獲得滿意。

乳粉；金黃色葡萄球菌；沙門氏菌；能力；驗證

金黃色葡萄球菌是人類的一種重要病原菌，在自然界中廣泛分布，水、空氣、人和動物的皮膚表面及排泄物中均可找到，隸屬于葡萄球菌屬，是革蘭氏陽性菌的代表［1］。沙門氏菌是一種常見的食源性致病菌，為革蘭氏陰性短桿菌，極易污染水源、食品等，對人類健康易構(gòu)成極大危害，可引起諸如傷寒、急性腸胃炎、敗血癥等［2］。因此，金黃色葡萄球菌和沙門氏菌的檢測在食品安全檢驗中具有重要意義。在我國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中，已將沙門氏菌和金黃色葡萄球菌作為常規(guī)檢驗項目，各種食品中均要求不得檢出沙門氏菌，為提高對食品中沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的檢測能力和水平，本實驗室參加了貴州省食品藥品檢驗所組織的乳粉中金黃色葡萄球菌與沙門氏菌定性檢測能力驗證。

1 材料與方法

1.1 待測樣品

共2份待測樣品，其中編號為QC-001B-4的樣品為添加有金黃色葡萄球菌及背景菌的乳粉，編號為QC-001A-5的樣品為添加有沙門氏菌及背景菌的乳粉，兩份樣品均采用西林瓶包裝，由貴州省食品藥品檢驗所提供。

1.2 培養(yǎng)基及試劑

緩沖蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）、亞硫酸鉍瓊脂(BS)、木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）、沙門氏菌生化鑒定試劑盒、10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯、血瓊脂平板、Baird-Parker瓊脂平板、腦心浸出液肉湯（BHI）、凍干兔血漿，均購自北京陸橋技術(shù)有限公司。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)菌株

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]、乙型副傷寒沙門氏菌[CMCC(B)50 094]購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.4 儀器

恒溫培養(yǎng)箱（DHP-9082，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、立式壓力蒸汽滅菌器（LDZM-80KCS，上海申安醫(yī)療器械廠）、電子天平（JM-A10002，余姚市紀(jì)銘稱重校驗設(shè)備有限公司）、生物顯微鏡（H6303，重慶光電儀器有限公司）、生物安全柜（BSC-IIA2，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）等。

1.5 方法

參照能力驗證作業(yè)指導(dǎo)書、《GB 4789.10-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》［3］與《GB 4789.4-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌菌檢驗》［4］進行實驗。

1.5.1 樣品前處理

根據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書提示，分別在生物安全柜中以無菌操作打開編號為QC-001B-4的西林瓶與編號為QC-001A-5的西林瓶，然后立即加入少量稀釋液進行溶解，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，反復(fù)用稀釋液清洗西林瓶內(nèi)壁，回收清洗液放入上述的無菌瓶中，合計用稀釋液40 mL。全過程20分鐘完成，此溶液即為待測樣品溶液。記為QC-001B-4待測樣品溶液與QC-001A-5的待測樣品溶液。

1.5.2 增菌

用無菌吸管吸取QC-001B-4待測樣品溶液25 mL，移至盛有225 mL 10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯中，振蕩均勻，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。

用無菌吸管吸取QC-001A-5待測樣品溶液25 mL，移至盛有225 mL BPW培養(yǎng)液中，振蕩均勻，36 ℃±1℃培養(yǎng)18 h。18 h培養(yǎng)完成后，將樣品混合物移取1 mL，轉(zhuǎn)種于10 mL TTB內(nèi)，于42 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。同時另取1 mL，轉(zhuǎn)種于10 mL SC內(nèi)，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。

1.5.3 分離培養(yǎng)與鑒定

將QC-001B-4樣品培養(yǎng)物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板上，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)完成后，挑取可疑菌落進行染色鏡檢和血漿凝固酶實驗。

將QC-001A-5樣品培養(yǎng)物，分別劃線接種到BS平板和XLD平板上，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)完成后，挑取可疑菌落進行下一步生化實驗。

表1 QC-001B-4待測樣品選擇性平板菌落特征與鑒定

表2 QC-001A-5待測樣品菌落特征與生化鑒定結(jié)果

2 結(jié)果與分析

2.1 QC-001B-4待測樣品鑒定結(jié)果

結(jié)果見表1，待測樣品劃線接種于Baird-Parker平板與血平板后，兩種平板上出現(xiàn)了典型的金黃色葡萄球菌可疑菌落特征，分別對其進行革蘭氏染色鏡檢與血漿凝固酶實驗，均呈陽性，與標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC(B)26 003結(jié)果完全相同，綜合以上結(jié)果，可以斷定QC-001B-4樣品檢出金黃色葡萄球菌。

2.2 QC-001A-5待測樣品鑒定結(jié)果

結(jié)果見表2，待測樣品在BS平板與XLD平板呈現(xiàn)的菌落均為可疑菌落特征，對其進行生化鑒定，在三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)酸，底層產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣，不產(chǎn)硫化氫，賴氨酸脫羧酶實驗為陽性，靛基質(zhì)實驗為陰性，尿素酶實驗為陰性，氫化鉀實驗也為陰性，ONPG實驗為陽性。可判定QC-001A-5樣品菌落為非沙門氏菌。

3 討論

能力驗證是一種重要的實驗室質(zhì)量管理手段，可提高實驗室管理水平，提高實驗室檢測能力，增強客戶對實驗室的信任度，對實驗室的生存和發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義［5,6］。本次能力驗證樣品數(shù)量為兩個，一個為金黃色葡萄球菌的待測樣品，另一個為沙門氏菌的待測樣品，在對兩個待測樣品進行前處理時，應(yīng)分開單獨在生物安全柜中操作，避免樣品的混淆與交叉污染。使用標(biāo)準(zhǔn)菌株做陽性質(zhì)控時也要注意避免對樣品的污染，應(yīng)先操作待測樣品，再操作標(biāo)準(zhǔn)菌株陽性質(zhì)控樣。

分離與鑒定金黃色葡萄球菌時，除了使用國標(biāo)規(guī)定的Baird-Parker平板與血平板外，還可使用金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基，該類培養(yǎng)基特異性強且結(jié)果直觀，可避免干擾菌對結(jié)果的影響。

分離與鑒定沙門氏菌時，在使用選擇性培養(yǎng)基分離培養(yǎng)時，應(yīng)同時采用2種以上的培養(yǎng)基，建議采用沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，沙門氏菌顯色培養(yǎng)基在分離及結(jié)果判定方面有較高的特異性。在BS與XLD培養(yǎng)基上的可疑沙門氏菌的特征形態(tài)多樣，其中BS培養(yǎng)基的選擇性最差，而在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上，可疑沙門氏菌特征明顯，容易辨別。

［1］彭曉蘭.金黃色葡萄球菌食物中毒66例報告[J].海南醫(yī)學(xué),1998(3):187.

［2］曹際娟．腸道沙門氏菌分子檢測與分子分型[M].北京:中國質(zhì)檢出版社,2013.

［3］中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會,國家食品藥品監(jiān)督管理總局.GB 4789.10-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010.

［4］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 4789.4-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌菌檢驗[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010.

［5］中國實驗室國家認(rèn)可委員會.GB/T15483.1-2004.利用實驗室間比對的能力驗證：能力驗證計劃的建立和運作[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004.

［6］江志杰,王似錦,高春.食品中沙門氏菌檢出能力驗證結(jié)果與分析[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報,2015(5):1929-1935.