海鮮菇工廠化瓶栽優(yōu)良菌株的篩選

黃亮+王玉+班立桐+楊紅澎+張利強(qiáng)+楊華

摘要：利用拮抗試驗(yàn)和酯酶同工酶電泳試驗(yàn)考察國內(nèi)外常見的5個(gè)海鮮菇主栽品種（編號(hào)1～5分別對(duì)應(yīng)的是菌株來源為日本、日本、市售、市售、福建三明真菌研究所），并對(duì)其進(jìn)行出菇比較，以期篩選出適宜工廠化的優(yōu)良菌株。結(jié)果表明，5種菌株間均有拮抗現(xiàn)象；酯酶同工酶試驗(yàn)表明，這5種海鮮菇菌株可以分為4類，即2、3號(hào)為一類，1、4、5號(hào)各為一類。5種菌株瓶栽出菇后的農(nóng)藝性狀差異較大，其中4號(hào)菌株菇形最好、叢高一致、菇蓋均一性最好，且子實(shí)體產(chǎn)量居第2，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率達(dá)到77.5%；5號(hào)菌株菇形較好，子實(shí)體產(chǎn)量最高，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率最高，為78.1%。因此可見，4號(hào)、5號(hào)菌株是適合工廠化瓶栽的海鮮菇菌株。

關(guān)鍵詞：海鮮菇；拮抗試驗(yàn)；酯酶同工酶；出菇試驗(yàn)；工廠化瓶栽；優(yōu)良菌株

中圖分類號(hào)： S646.904 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2017）20-0135-03

海鮮菇（Hypsizygus marmoreus）別稱真姬菇、玉蕈等，其菇形優(yōu)，質(zhì)地脆，味道鮮，具有海蟹味，在日本被稱為“蟹味菇”，是一種藥食兩用的珍稀菌，深受廣大消費(fèi)者喜愛[1-2]。海鮮菇中蛋白質(zhì)含量高，且含有豐富的礦物質(zhì)及多種維生素，在食用菌中有“金枝玉葉”之稱[3]。其中含有的大量必需氨基酸、各種維生素、粗纖維、木質(zhì)素，長(zhǎng)期食用能起到良好的保健和預(yù)防疾病的作用[4-5]。我國海鮮菇工廠化生產(chǎn)起步較晚，近幾年才出現(xiàn)瓶栽模式，對(duì)海鮮菇的研究不夠系統(tǒng)和深入，導(dǎo)致我國海鮮菇工廠化生產(chǎn)出來的蘑菇產(chǎn)量、質(zhì)量都與國外水平先進(jìn)的國家如日本、美國等相比還有很大的差距。我國對(duì)于海鮮菇菌種工廠化管理比較混亂，各個(gè)工廠的技術(shù)水平和管理水平參差不齊，經(jīng)常出現(xiàn)同種異名或者異名同種的現(xiàn)象。由于菌種的管理到位有利于工廠化生產(chǎn)海鮮菇的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)，鑒于此，對(duì)于海鮮菇工廠化優(yōu)良菌株的選育很有必要。

1 材料與方法

1.1 菌種

本試驗(yàn)采用拮抗試驗(yàn)和酯酶同工酶電泳試驗(yàn)考察國內(nèi)外常見的5個(gè)海鮮菇主栽品種，詳見表1。

1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯綜合培養(yǎng)基[6]：200 g馬鈴薯，1.5 g硫酸鎂，20 g瓊脂，1.0 g磷酸二氫鉀，20 g葡萄糖，水1 000 mL。

栽培瓶培養(yǎng)基：70 %木屑，10 %棉籽殼，10 %米糠，9%玉米粉，1%石灰。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 海鮮菇拮抗試驗(yàn) 參照NY/T 1845—2010《食用菌菌種區(qū)別性鑒定 拮抗反應(yīng)》操作：將5種海鮮菇菌株兩兩接種到預(yù)先配制好的馬鈴薯綜合培養(yǎng)基平板上，2株菌株同時(shí)接種于同一平板上，間距約3 cm，24 ℃恒溫培養(yǎng)20 d左右。待菌絲體長(zhǎng)滿平板后觀察海鮮菇2個(gè)接種塊交界處是否有褐色的拮抗線出現(xiàn)。

1.3.2 海鮮菇酯酶同工酶電泳試驗(yàn) 將不同海鮮菇菌株于馬鈴薯綜合培養(yǎng)基上培養(yǎng)20 d，培養(yǎng)溫度24 ℃，稱取0.5 g菌絲，放于預(yù)冷研缽中，加入液氮研磨至乳白色疏松狀，加入2倍體積樣品緩沖液，4 ℃、10 000 r/min離心10 min。取上清液，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后，顯影觀察測(cè)量，并計(jì)算相對(duì)遷移率Rf，Rf=蛋白條帶移動(dòng)距離/溴酚藍(lán)移動(dòng)距離。

1.3.3 子實(shí)體農(nóng)藝性狀調(diào)查 將5種海鮮菇菌株分別接種在相同培養(yǎng)基的栽培瓶中培養(yǎng)至出菇，每個(gè)菌株接32瓶，在相同的培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)，待海鮮菇子實(shí)體生長(zhǎng)至八分熟即進(jìn)行采收，測(cè)定這5種海鮮菇的叢高、單株質(zhì)量、子實(shí)體數(shù)、菌蓋厚度、菌蓋直徑、生物學(xué)轉(zhuǎn)化率等相關(guān)數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 海鮮菇菌株間的拮抗反應(yīng)

拮抗反應(yīng)是異宗結(jié)合食用菌品種鑒定的常用方法，已經(jīng)在許多食用菌菌種鑒定中使用。待不同菌株的菌絲生長(zhǎng)邊緣靠近時(shí)，從正面觀察其繼續(xù)生長(zhǎng)情況，從反面觀察色素沉著情況。由表2可知，這5種菌株兩兩相互為1個(gè)對(duì)比組，共有10個(gè)對(duì)比組。由圖1可以看出，所有對(duì)比組正面菌絲都不融合，且背面全部都產(chǎn)生了拮抗線，可以初步確定這5種菌株是海鮮菇的5個(gè)不同品種。

2.2 不同菌株的酯酶同工酶檢驗(yàn)

2.2.1 海鮮菇酯酶同工酶電泳結(jié)果 由圖2可以看出，這5個(gè)樣品有互不相同的電泳條帶類型與條帶數(shù)，可以說明這5個(gè)菌株間沒有親緣關(guān)系，為不同的海鮮菇品種。

從圖2還可以看出，供試5個(gè)菌株的酯酶同工酶的酶譜條帶的Rf值位于0.08～0.71之間，條帶數(shù)4～7條不等，并且每個(gè)條帶的寬窄度、顏色的深淺均表現(xiàn)出一定的差異。其中1號(hào)、3號(hào)有5條帶，2號(hào)、5號(hào)有4條帶，4號(hào)條帶數(shù)最多，為7條。因此可以看出，這5個(gè)品種都有部分條帶是相同的，但沒有2個(gè)是完全相同的，可以確定它們有一定的親緣關(guān)系，但關(guān)系較遠(yuǎn)。

2.2.2 海鮮菇酯酶同工酶聚類分析 在酶譜中，相應(yīng)位置有酶帶表示為1，沒有酶帶表示為0，根據(jù)表2統(tǒng)計(jì)各海鮮菇菌株的酯酶同工酶信息，用SPSS軟件進(jìn)行聚類分析，得到各海鮮菇菌株酯酶同工酶的聚類樹（圖3），然后對(duì)各菌株進(jìn)行遺傳分析。

由圖3可知，1號(hào)、4號(hào)、5號(hào)樣品與其他樣品遷移率和條帶數(shù)的差異較大。將5種海鮮菇菌株分為4類：1號(hào)、4號(hào)、5號(hào)各為一類，2號(hào)、3號(hào)為一類。酯酶同工酶結(jié)果表明，這種分析方法在研究海鮮菇的分類地位及親緣關(guān)系方面較其拮抗反應(yīng)的結(jié)果更細(xì)微。

2.3 5種海鮮菇菌株的出菇比較

2.3.1 5種海鮮菇生產(chǎn)周期比較 由表3可知，后熟時(shí)間最短的是5號(hào)菌株，為56 d，其次為4號(hào)菌株，為57d，較長(zhǎng)的是1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)菌株，其中1號(hào)、2號(hào)菌株為62 d，3號(hào)菌株為60 d。由此可見，若用4號(hào)、5號(hào)菌株，則可以有較短的后熟時(shí)間，從而縮短整個(gè)培養(yǎng)周期。4號(hào)、5號(hào)菌株的現(xiàn)蕾時(shí)間最短都出現(xiàn)在進(jìn)入出菇房后8 d，而現(xiàn)蕾最遲的為1號(hào)，在進(jìn)入出菇房后12 d才現(xiàn)蕾。從成本、周期角度考慮，4號(hào)、5號(hào)菌株為最佳選擇。endprint

2.3.2 5種海鮮菇子實(shí)體農(nóng)藝性狀比較 菇蓋基本展開后，海鮮菇菌株隨機(jī)抽取8瓶，觀察記錄采收時(shí)間、后熟時(shí)間、現(xiàn)蕾時(shí)間、子實(shí)體叢質(zhì)量、子實(shí)體個(gè)數(shù)、叢高、子實(shí)體單個(gè)質(zhì)量、菌蓋厚度、菌蓋直徑等子實(shí)體形態(tài)、菇形等，并計(jì)算其平均值，結(jié)果見表4。

由表4可知，1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)菌株的子實(shí)體數(shù)量比較接近，都很少，平均都不超過17個(gè)，而4號(hào)子實(shí)體數(shù)量最多，平均達(dá)到50個(gè)以上，5號(hào)子實(shí)體平均數(shù)量也達(dá)到了35個(gè)左右；5號(hào)叢高具有明顯的優(yōu)勢(shì)，平均達(dá)到14.53 cm，其他4種都比較矮，其中4號(hào)最矮，平均只有8.55 cm；3號(hào)菌蓋平均厚度最大，達(dá)到了1.15 cm，1號(hào)菌蓋厚度最小，為0.68 cm，其他3種子實(shí)體平均厚度適中；5號(hào)菌蓋平均直徑最小，為1.87 cm，2號(hào)、3號(hào)菌株平均直徑最大，都超過了2.40 cm，由于在商品轉(zhuǎn)運(yùn)過程中，菌蓋大容易被碰掉，因此菌蓋小的子實(shí)體商品性能較好。

從菇的外形來看，4號(hào)最佳，菇形緊湊，比較整齊；其次為5號(hào)，菇形為細(xì)長(zhǎng)狀，菇蓋小，菇形比較整齊；1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)菇形參差不齊，而且部分有瘤狀物出現(xiàn)（圖片未顯示），從而影響了外觀。從子實(shí)體單個(gè)質(zhì)量來說，3號(hào)比較突出，子實(shí)體平均單個(gè)質(zhì)量達(dá)到8.86 g，但整齊度較差。

經(jīng)直觀分析，1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)菌株產(chǎn)子實(shí)體農(nóng)藝性狀不佳，不適合工廠化栽培推廣；4號(hào)菌株產(chǎn)子實(shí)體的菇形整齊，產(chǎn)量也高，子實(shí)體數(shù)量也多，5號(hào)菌株菌柄比較高，產(chǎn)量同樣也不低，值得推薦。

2.3.3 5種海鮮菇菌株子實(shí)體產(chǎn)量及生物學(xué)轉(zhuǎn)化率 由表5可知，5號(hào)菌株出菇的產(chǎn)量最高，為164.13 g，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率達(dá)78.1%，其次為4號(hào)菌株，平均生物學(xué)轉(zhuǎn)化率為77.5%，與1、2、3號(hào)菌株之間存在顯著差異。

3 討論與結(jié)論

真姬菇有灰色、白色品系，灰色品系被稱為蟹味菇，而通體雪白，叢生，長(zhǎng)度5～8 cm的白色品系，人們稱之為白玉菇。我國在白玉菇菇蕾形成后，通過調(diào)控栽培環(huán)境的溫、光、氣、濕，主要是對(duì)二氧化碳濃度進(jìn)行控制，促使菇柄伸長(zhǎng)至8～16 cm，為了與白玉菇區(qū)別，商品名改稱為海鮮菇。以上三者單位體積栽培料轉(zhuǎn)化率通常以海鮮菇較高，其次是蟹味菇，白玉菇最低[7]。

由于在拮抗試驗(yàn)中，5種海鮮菇菌株兩兩之間都出現(xiàn)了拮抗線，可以初步判定為海鮮菇的5個(gè)不同品種，它們之間的親緣關(guān)系不明顯。再通過對(duì)這5種菌株酯酶同工酶酶譜比較發(fā)現(xiàn)，它們的酯酶同工酶酶譜相差較大，條帶差異性也較大，進(jìn)一步證明其親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。經(jīng)聚類分析，將5個(gè)海鮮菇菌株分為4組。以出菇情況為主要篩選指標(biāo)，比較這5種菌株在工廠化瓶栽中的表現(xiàn)，結(jié)果表明，1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)均具有產(chǎn)量低、菇形差、培養(yǎng)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)，其中3號(hào)菌株菇蓋出現(xiàn)脫分化的瘤狀物，影響蘑菇的外觀；而4號(hào)、5號(hào)菌株則明顯優(yōu)于前3種，具周期短、產(chǎn)量高、外形美觀等優(yōu)點(diǎn)。

對(duì)子實(shí)體的農(nóng)藝性狀調(diào)查顯示，4號(hào)菌株產(chǎn)子實(shí)體雖然叢高不是最高的，但是菇形好、叢高一致、菇蓋均一性好，且子實(shí)體產(chǎn)量較高，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率達(dá)到77.5%；5號(hào)菌株菇形較好，子實(shí)體產(chǎn)量最高，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率最高，為78.1%。綜合分析可知，選取4號(hào)、5號(hào)菌株作為優(yōu)良菌株規(guī)模化種植，可以提高海鮮菇的產(chǎn)量、質(zhì)量，是適合工廠化瓶栽的菌株。

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