宋鵬飛 何君 黃芩 陳加媛 賀勤 徐娟 王京

·經(jīng)驗交流·

142例足癬的病原菌及其微環(huán)境分析

宋鵬飛 何君 黃芩 陳加媛 賀勤 徐娟 王京

目的 探討足癬致病真菌的菌種組成及足部微環(huán)境。方法 對142例真菌鏡檢及培養(yǎng)陽性的足癬患者使用分離培養(yǎng)及分子生物學(xué)手段進行菌種鑒定。利用皮膚生理分析儀檢測足癬患者皮損處的生理指標。觀察真菌菌種鑒定結(jié)果及皮膚微環(huán)境檢測結(jié)果。結(jié)果 經(jīng)培養(yǎng)和分子生物學(xué)鑒定, 共鑒定出11種致病菌。其中足底水皰鱗屑型患者的菌種分別為：紅色毛癬菌28株(41.79%), 須癬毛癬菌9株(13.43%), 斷發(fā)毛癬菌3株(4.48%), 紫色毛癬菌4株(5.97%), 白念珠菌1株(1.49%), 近平滑念珠菌4株(5.97%), 光滑念珠菌2株(2.99%), 絮狀表皮癬菌5株(7.46%), 小孢子菌屬2株(2.99%), 毛孢子菌屬3株(4.48%), 混合感染6株(8.96%)。趾間浸漬糜爛型患者的菌種分別為：紅色毛癬菌22株(29.33%), 須癬毛癬菌13株(17.33%), 斷發(fā)毛癬菌2株(2.67%), 紫色毛癬菌5株(6.67%), 白念珠菌4株(5.33%), 近平滑念珠菌7株(9.33%), 克柔念珠菌5株(6.67%), 光滑念珠菌2株(2.67%), 絮狀表皮癬菌3株(4.00%), 小孢子菌屬4株(5.33%), 毛孢子菌屬4株(5.33%), 混合感染4株(5.33%)。毛癬菌屬中的紅色毛癬菌是兩種類型患者中占比最高的菌種, 為主要致病菌。趾間浸漬糜爛型患者念珠菌屬的分布比例為24.00%(18/75), 顯著高于足底水皰鱗屑型患者的10.45%(7/67), 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。足底水皰鱗屑型患者皮損處的溫度為(25.99±1.15)℃、濕度為(15.63±4.33)、酸堿度為(5.94±0.60)、油脂含量為(4.84±5.08)；趾間浸漬糜爛型患者皮損處的溫度為(26.12±1.16)℃、濕度為(61.88±19.05)、酸堿度為(6.03±0.99)、油脂含量為(5.77±3.73)。足底水皰鱗屑型患者皮損處溫度、酸堿度和油脂含量與趾間浸漬糜爛型比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；趾間浸漬糜爛型患者皮損處濕度顯著高于足底水皰鱗屑型患者, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 臨床治療足癬應(yīng)根據(jù)足癬的類型和感染菌株制定個性化的治療方案, 對紅色毛癬菌和念珠菌這類真菌重點防治。在抗真菌治療的同時, 還應(yīng)注重足部護理工作,保持患病部位清潔干爽。

足癬；病原菌；皮膚微環(huán)境

足癬是由致病性真菌引起的足部皮膚病, 具有傳染性。足癬在全世界廣為流行, 在熱帶和亞熱帶地區(qū)更為普遍。在我國尤其是華南地區(qū), 足癬的發(fā)病率也相當高。足癬大致可分為水皰鱗屑型、角化過度型以及浸漬糜爛型［1］。主要的致病菌種以皮膚癬菌為主, 但是念珠菌等其他致病菌的感染也有明顯增加［2,3］。為了解本院皮膚科門診足癬致病真菌的菌種組成及足部微環(huán)境特點, 作者于2017年6～8月對就診的足癬患者進行了觀察研究, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2017年6～8月皮膚科門診就診的142例足癬患者作為研究對象, 入組標準：①具有丘疹鱗屑、水皰、角化過度、浸漬糜爛等典型的足癬臨床表現(xiàn)；②皮損取材真菌鏡檢和培養(yǎng)的結(jié)果均為陽性。入組患者均閱讀并簽署知情同意書, 填寫信息采集記錄表, 包括性別、年齡、患病類型等信息。142例患者中男82例, 女60例；年齡3～81歲,平均年齡(33.29±16.81)歲；足底水皰鱗屑型67例, 趾間浸漬糜爛型75例。由于角化過度型的直接鏡檢和培養(yǎng)的陽性率過低, 故本次研究未納入分析。

1.2 方法

1.2.1 真菌培養(yǎng)與鑒定 使用消毒的取樣刀刮取患者皮損處的鱗屑, 置于含氯霉素的沙式斜面培養(yǎng)基中, 25～27℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng), 隔天觀察菌落生長情況, 連續(xù)4周。將長出的菌落接種至馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基或尿素瓊脂培養(yǎng)基中, 做進一步分離培養(yǎng)。觀察菌落的形態(tài)、大小、生長速度、色素以及對鏡下結(jié)構(gòu)進行鑒定。對于念珠菌使用顯示培養(yǎng)基, 依據(jù)顏色不同進行菌種鑒定。

1.2.2 分子生物學(xué)鑒定 對于真菌培養(yǎng)未能做出準確鑒定的菌株, 采用分子生物學(xué)手段做進一步的物種鑒定。首先,采用十六烷基三甲溴化(CTAB)法對樣本的基因組DNA進行提取。其次, 根據(jù)測序區(qū)域的選擇, 使用高效和高保真的酶進行聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR), 確保擴增效率和準確性(引物對應(yīng)區(qū)域：ITS1區(qū)引物為ITS1F- ITS2；ITS2區(qū)引物為ITS2-3F- ITS2-4R)。最后, 對PCR的擴增產(chǎn)物進行Sanger雙向測序, 測序結(jié)果在GeneBank數(shù)據(jù)庫中進行比對鑒定。

1.2.3 皮膚生理分析 在實驗室環(huán)境內(nèi), 患者保持靜止30 min以上, 再利用皮膚生理分析儀檢測足部皮損處皮膚的溫度、濕度、酸堿度和油脂含量等生理指標, 確定真菌寄生的微環(huán)境。

1.3 觀察指標 觀察真菌菌種鑒定結(jié)果及皮膚微環(huán)境檢測結(jié)果(足部皮損處皮膚的溫度、濕度、酸堿度和油脂含量),統(tǒng)計念珠菌屬的分布比例。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 真菌菌種鑒定結(jié)果 經(jīng)培養(yǎng)和分子生物學(xué)鑒定, 共鑒定出11種致病菌。其中足底水皰鱗屑型患者的菌種分別為：紅色毛癬菌28株(41.79%), 須癬毛癬菌9株(13.43%), 斷發(fā)毛癬菌3株(4.48%), 紫色毛癬菌4株(5.97%), 白念珠菌1株(1.49%), 近平滑念珠菌4株(5.97%), 光滑念珠菌2株(2.99%),絮狀表皮癬菌5株(7.46%), 小孢子菌屬2株(2.99%), 毛孢子菌屬3株(4.48%), 混合感染6株(8.96%)。趾間浸漬糜爛型患者的菌種分別為：紅色毛癬菌22株(29.33%), 須癬毛癬菌13株(17.33%), 斷發(fā)毛癬菌2株(2.67%), 紫色毛癬菌5株(6.67%), 白念珠菌4株(5.33%), 近平滑念珠菌7株(9.33%),克柔念珠菌5株(6.67%), 光滑念珠菌2株(2.67%), 絮狀表皮癬菌3株(4.00%), 小孢子菌屬4株(5.33%), 毛孢子菌屬4株(5.33%), 混合感染4株(5.33%)。毛癬菌屬中的紅色毛癬菌是兩種類型患者中占比最高的菌種, 為主要致病菌。見表1。趾間浸漬糜爛型患者念珠菌屬的分布比例為24.00%(18/75),顯著高于足底水皰鱗屑型患者的10.45%(7/67), 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.48,P=0.03＜0.05)。

2.2 皮膚微環(huán)境檢測結(jié)果 足底水皰鱗屑型患者皮損處的溫度為(25.99±1.15)℃、濕度為(15.63±4.33)、酸堿度為(5.94±0.60)、油脂含量為(4.84±5.08)；趾間浸漬糜爛型患者皮損處的溫度為(26.12±1.16)℃、濕度為(61.88±19.05)、酸堿度為(6.03±0.99)、油脂含量為(5.77±3.73)。足底水皰鱗屑型患者皮損處溫度、酸堿度和油脂含量與趾間浸漬糜爛型比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；趾間浸漬糜爛型患者皮損處的濕度顯著高于足底水皰鱗屑型患者, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=19.42,P=0.00＜0.05)。見表2。

表1 142例患者真菌菌種分類［n(%)］

表2 皮膚微環(huán)境檢測結(jié)果比較(±s)

表2 皮膚微環(huán)境檢測結(jié)果比較(±s)

注：與足底水皰鱗屑型患者比較, aP＜0.05

生理指標足底水皰鱗屑型(n=67)趾間浸漬糜爛型(n=75)tP溫度(℃)25.99±1.1526.12±1.160.700.48濕度(%)15.63±4.33 61.88±19.05a19.420.00酸堿度 5.94±0.60 6.03±0.990.650.51油脂含量 4.84±5.08 5.77±3.731.250.21

3 討論

足癬在皮膚科門診是一種常見的淺部真菌病, 好發(fā)于溫暖潮濕的環(huán)境［4,5］。人的足底和趾間沒有皮脂腺, 從而缺乏抑制皮膚絲狀真菌的脂肪酸, 生理防御機能較差, 而這些部位的皮膚汗腺卻很豐富, 出汗比較多, 加之空氣流通性差、局部潮濕溫暖, 有利于絲狀真菌的生長。此外, 足底部位皮膚角質(zhì)層較厚, 角質(zhì)層中的角蛋白是真菌的豐富營養(yǎng)物質(zhì),有利于真菌的生長。有研究發(fā)現(xiàn), 足部的真菌群落擁有令人難以置信的多樣性［6］, 足部真菌群落多樣性復(fù)雜, 可能是足癬復(fù)發(fā)率高和足部真菌耐藥性強的原因。

本次研究的足癬類型主要為水皰鱗屑型和浸漬糜爛型,是足癬最為常見的類型［7,8］。研究結(jié)果顯示, 共鑒定出11種致病菌, 其中紅色毛癬菌50株, 占比為35.21%, 是主要致病菌, 念珠菌屬25株, 占比為17.61%, 居于第二, 與以往的文獻報道較一致［9］, 提示今后應(yīng)對這些真菌重點防治。本次研究結(jié)果中, 趾間浸漬糜爛型患者念珠菌屬的分布比例為24.00%(18/75), 顯著高于足底水皰鱗屑型患者的10.45%(7/67),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。趾間浸漬糜爛型患者皮損處的濕度顯著高于足底水皰鱗屑型患者, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

綜上所述, 念珠菌感染主要見于皮膚微環(huán)境更加潮濕的趾間部位, 在今后臨床治療足癬的過程中, 應(yīng)根據(jù)足癬的類型制定個性化的治療方案, 在抗真菌治療的同時, 還應(yīng)注重足部護理工作, 保持患病部位清潔干爽。

［1］ 張學(xué)軍. 皮膚性病學(xué). 第8版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2013:84-85.

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［7］ 張道軍, 黃云麗, 張衛(wèi)衛(wèi), 等. 淺部真菌病2600例病原菌分析.中國皮膚性病學(xué)雜志, 2012.26(6):501-503.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.23.116

深圳市科技計劃項目(項目編號：JCYJ20160428181039686)；深圳市福田區(qū)衛(wèi)生公益性科研項目(項目編號：FTWS2015008)

518033 中山大學(xué)附屬第八醫(yī)院皮膚科

王京

2017-10-09］