甲基睪酮對(duì)中華鳑鲏體色的影響

陳小江+王建國(guó)+王權(quán)

摘要： 為探索甲基睪酮對(duì)中華鳑鲏體色的影響，分別將50日齡和80日齡中華鳑鲏各分6組，每組重復(fù)，隨機(jī)分別養(yǎng)在24個(gè)相同規(guī)格、容積為0.5 m3的循環(huán)水養(yǎng)殖缸內(nèi)，每缸放養(yǎng)80尾。對(duì)照組（Control）投喂不添加甲基睪酮（17α-MT）的基礎(chǔ)飼料，處理組（TG1、TG2、TG3、TG4、TG5）分別投喂17α-MT含量為10、20、30、40、50 mg/kg的試驗(yàn)飼料。試驗(yàn)時(shí)間56 d，期間對(duì)試驗(yàn)魚的體色及肌肉中所沉積的類胡蘿卜素進(jìn)行比較研究。結(jié)果表明，17α-MT添加量40、50 mg/kg 的飼料組對(duì)50日齡中華鳑鲏色素沉積明顯（P<0.05），80日齡的中華鳑鲏各處理組與對(duì)照組差異不顯著（P<0.05）。17α-MT添加量在30 mg/kg以上，50日齡的中華鳑鲏體色明顯開始起效，效應(yīng)時(shí)間需28 d，80日齡中華鳑鲏各處理組與對(duì)照組差異不顯著。

關(guān)鍵詞： 17α-甲基睪酮；添加量；飼喂時(shí)間；中華鳑鲏；類胡蘿卜素；體色

中圖分類號(hào)： S965.819 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2017）22-0192-03

天然雄激素與合成雄激素類物質(zhì)均屬于內(nèi)分泌干擾物[1]。天然雄激素包括睪酮、雄酮、雄烯二酮等，影響水產(chǎn)動(dòng)物的內(nèi)分泌系統(tǒng)，導(dǎo)致部分水產(chǎn)動(dòng)物雄性比例提高，雌魚顯現(xiàn)雄性副特征、卵巢精巢并生、生殖力降低，還會(huì)引起哺乳動(dòng)物呈現(xiàn)雄性化特點(diǎn)[2]。

合成雄激素如17α-甲基睪酮 （ 17α-MT ），為呈白色或乳白色的結(jié)晶性粉末，能促進(jìn)雄性性器官發(fā)育成熟和第二性征的形成和維持。不同濃度的17α-MT對(duì)魚類產(chǎn)生的生物效應(yīng)因品種而異，低濃度有利于魚類生長(zhǎng)，高濃度易致魚畸形或死亡，一定劑量的17α-MT還能改變部分魚類的性別，導(dǎo)致雌魚雄性化[3]。投飼或埋植雄激素給河鱸（Perca fluviatilis）、褐牙鲆（Paralichthys olivaceus）和石斑魚（Epinephelus）、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）、大西洋鱈（Gadus morhua）數(shù)月后，可得到有成熟精液的功能性雄魚[4-8]。大量激素誘導(dǎo)試驗(yàn)成功并取得良好誘導(dǎo)效果，其中以17α-MT誘導(dǎo)轉(zhuǎn)雄成效最佳[9]。投喂經(jīng)17α-MT處理后的飼料給紅劍尾魚（Xiphophorous helleri）、珍珠瑪麗魚（Molliensia viliferia）以及紅斑馬魚（Brachydanio rerio），發(fā)現(xiàn)其體色更鮮艷[10-12]。

中華鳑鲏 （Rhodeus sinensis）是中國(guó)著名的原生觀賞魚類之一。20世紀(jì)60年代，觀賞魚進(jìn)入歐洲，被稱為中國(guó)彩虹。有關(guān)中華鳑鲏?mèng)~的研究報(bào)道主要集中在生物學(xué)習(xí)性及分子生物學(xué)方面[13-16]。通過在飼料中添加甲基睪酮誘導(dǎo)中華鳑鲏?mèng)~體色改變方面研究還未見報(bào)道，本研究采用不同甲基睪酮含量的飼料投喂不同月齡的中華鳑鲏，通過測(cè)定魚體類胡蘿卜素總量及體色變化情況來判斷其對(duì)鳑鲏體色的影響，為開發(fā)觀賞性中華鳑鲏提供參考。

1 材料與方法

1.1 飼養(yǎng)條件和試驗(yàn)時(shí)間

選用江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院自繁中華鳑鲏?mèng)~苗，在試驗(yàn)開始前2個(gè)星期挑選體色一致、規(guī)格均勻的健康個(gè)體，轉(zhuǎn)移進(jìn)室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)（圖1），選長(zhǎng)江水源，水溫控制在24～25 ℃，溶氧保持在6.0～8.0 mg/L，pH值7.5～8.0，投喂不含17α-MT的基礎(chǔ)餌料。試驗(yàn)開始時(shí)50日齡和80日齡中華鳑鲏隨機(jī)分養(yǎng)在24個(gè)相同規(guī)格、容積為0.5 m3的循環(huán)水養(yǎng)殖缸內(nèi)，每缸放養(yǎng)80尾。試驗(yàn)共6組，每組重復(fù)，分別投喂 17α-MT含量為0 mg/kg（對(duì)照組，Control）、10 mg/kg（處理組1，TG1）、20 mg/kg（處理組2，TG2）、30 mg/kg（處理組3，TG3）、40 mg/kg（處理組4，TG4）、50 mg/kg（處理組5，TG5）的試驗(yàn)飼料。每日10：00和17：30定時(shí)投飼，投飼率占魚體質(zhì)量的3%～5%，試驗(yàn)時(shí)間56 d。

1.2 試驗(yàn)飼料的配制

本試驗(yàn)選用魚粉20.00%，黃粉蟲干17.00%，面粉1300%，南瓜粉5.00%，玉米粉20.00%，麥麩10.00%，海帶粉2.00%，金盞菊0.45%，啤酒酵母0.50%，磷酸二氫鈣100%，甜菜堿0.50%，螺旋藻粉0.50%，紅辣椒粉0.50%，大蒜粉0.50%，紅蟲粉4.00%，魚油2.00%，大豆油3.00%，防霉劑0.05%，配制成人工配合飼料。17α-MT溶于乙醇配制成1 mg/mL母液，通過再稀釋混于配合飼料，按17α-MT含量為0、10、20、30、40、50 mg/kg配制試驗(yàn)餌料。

1.3 藥品及儀器

17α-MT，純度大于98%，購自Sigma公司；丙酮、石油醚、硫酸鈉，均為AR級(jí)。儀器包括紫外可見分光光度計(jì)（UV1902型）、掃描型紫外分光光度計(jì)（UV756型）、TE3102S型電子天平、THZ-92B型水浴恒溫振蕩器。

1.4 樣品收集方法

分別在飼喂0、14、28、42、56 d，每組隨機(jī)取4尾魚，處死、

除去內(nèi)臟后置于4 ℃無霜冰箱中干燥24 h。24 h后測(cè)定魚體類胡蘿卜素含量并記錄增色效果。類胡蘿卜素提取方法參照黃永政的方法[12]。

1.5 總類胡蘿卜素的計(jì)算與數(shù)據(jù)處理

式中：X為胡蘿卜素含量；A為448 nm處最大吸光度；y為提取液使用體積；A%1 cm=2 500（胡蘿卜素分子平均吸收系數(shù)）；g為分析樣品質(zhì)量[17]。采用SPSS 14.0 統(tǒng)計(jì)分析，先單因素方差分析，若處理間差異顯著，再用Ducans 多重比較進(jìn)行分析，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 17α-MT不同添加量對(duì)中華鳑鲏體色的影響endprint

由表1可知，試驗(yàn)56 d，50日齡中華鳑鲏對(duì)照組魚體總類胡蘿卜素含量1.921 7±0.146 1，處理1組（10 mg/kg）、處理2組（20 mg/kg）、處理3組（30 mg/kg）類胡蘿卜素含量與對(duì)照組差異不顯著（P>005），而處理4組（40 mg/kg）和處理5組（50 mg/kg）含量較高，分別為（3.357 8±0.121 5）、（3434 5±0.121 9） mg/100 g，顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。80日齡中華鳑鲏?mèng)~體對(duì)照組總類胡蘿卜素含量最低，為 （2.324 1±0.142 1） mg/100 g，含量最高的是處理組4（40 mg/kg），總類胡蘿卜素含量為 （3.181 2±0.182 5） mg/100 g，但各處理組間差異不顯著（P>0.05）。

2.2 17α-MT飼喂時(shí)間的變化對(duì)中華鳑鲏?mèng)~體色的影響

由圖1可知，各處理組的總類胡蘿卜素含量隨飼喂時(shí)間的變化不同，處理組與對(duì)照組的變化趨勢(shì)相似，隨著養(yǎng)殖時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，到56 d時(shí)，總類胡蘿卜素含量達(dá)到最高。各處理組在 56 d 時(shí)，總類胡蘿卜素平均含量分別為2.034 5、2.312 1、2585 3、3.357 8、3.434 5 mg/100 g。處理組4、處理組5與對(duì)照組差異明顯，其表現(xiàn)為在飼養(yǎng)28 d時(shí)，總類胡蘿卜素含量快速上升，而后增長(zhǎng)放緩。

由圖2可知，各處理組總類胡蘿卜素含量變化相似，均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸上升，在42 d時(shí)總類胡蘿卜素含量快速上升，在56 d時(shí)總類胡蘿卜素平均含量最高，分別為2.422 3、2.6 24 3、2.821 7、3.181 2、3.151 3 mg/100 g，處理組與對(duì)照組差異不明顯。

3 討論

3.1 17α-甲基睪酮對(duì)中華鳑鲏體色影響的機(jī)制

魚類體色基于皮膚中的色素細(xì)胞，神經(jīng)和內(nèi)分泌兩大系統(tǒng)參與體色調(diào)節(jié)機(jī)制。類胡蘿卜素是脂溶性色素，使魚體表呈現(xiàn)黃、紅等各種顏色，具有相當(dāng)重要的作用。絕大多數(shù)魚類由于無法自身合成，需要通過從食物中攝取，并將其轉(zhuǎn)化成所需類胡蘿卜素，進(jìn)一步沉積于肌肉或體表，使呈現(xiàn)不同顏色[18]。一般雌魚色素沉積主要集中在卵巢和卵黃，沉積于體表和肌肉的類胡蘿卜素較少。雄魚在性成熟后，色素的沉積主要集中在體表和肌肉，所以雄魚在繁殖季節(jié)一般都較雌魚艷麗，出現(xiàn)“婚姻色”。

魚類性腺發(fā)育成何種性別，一定程度是受性激素控制，據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，性腺分化未深的魚類，投飼含17α-MT的餌料，可使其性腺髓質(zhì)分化為精巢組織而抑制其皮質(zhì)分化為卵巢組織[19]。在雌魚轉(zhuǎn)化為雄魚的過程中，生殖腺的皮質(zhì)部?jī)?yōu)先發(fā)育為具備功能的卵巢時(shí)，髓質(zhì)部仍有精原囊存在，當(dāng)給予 17α-MT時(shí)，促使精原囊逐漸增殖并分化為各級(jí)精細(xì)胞，從而出現(xiàn)雌雄嵌合體，隨著卵細(xì)胞萎縮退化和精巢的發(fā)育，成為具有正常生理功能的雄魚[20]。性腺分化程度越低，雄性化效果越高，更有利于類胡蘿卜素的著色效果，這與該試驗(yàn)結(jié)果相符。

3.2 17α-甲基睪酮含量及飼喂時(shí)間對(duì)中華鳑鲏?mèng)~體色的影響

本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)56 d，17α-MT含量40、50 mg/kg 的飼料組對(duì)50日齡中華鳑鲏的色素量沉積明顯，但對(duì)80日齡中華鳑鲏色素沉積量不明顯。李云等在飼料中添加10 mg/kg 17α-MT對(duì)3月齡紅劍尾魚和5月齡珍珠瑪麗魚進(jìn)行體色影響試驗(yàn)，結(jié)果顯示3月齡增色效果均好于5月齡[10]。黃永政在飼料中添加10～50 mg/kg 17α-MT對(duì)1月齡紅斑馬魚和3月齡紅斑馬魚進(jìn)行體色影響試驗(yàn)，結(jié)果顯示1月齡增色效果好于3月齡，性腺分化程度越低，其增色效果越好[2]，本試驗(yàn)結(jié)果與之相符。

不同濃度的17α-MT對(duì)各種魚類有不同的生物學(xué)效應(yīng)，12.5 mg/kg 17α-MT可誘導(dǎo)赤點(diǎn)石斑魚完全性逆轉(zhuǎn)[21]；低濃度17α-MT （1～10 mg/kg）影響鯉魚生長(zhǎng)及性逆轉(zhuǎn)[22]。本次試驗(yàn)17α-MT濃度40、50 mg/kg對(duì)50日齡的增色效果明顯。17α-MT被魚類攝入后，表現(xiàn)出效應(yīng)時(shí)間，效應(yīng)時(shí)間與17α-MT的添加量及魚類性腺發(fā)育程度有關(guān)。本試驗(yàn)中，從總類胡蘿卜素含量變化，可以看出17α-MT藥效的變化，50日齡中華鳑鲏在28 d時(shí)，17α-MT添加量在30mg/kg以上明顯開始起效，持續(xù)增色直至試驗(yàn)結(jié)束；80日齡中華鳑鲏各處理組差異不顯著，效應(yīng)時(shí)間無法考證?？偟膩碚f，17α-MT作用于50日齡中華鳑鲏相對(duì)80日齡中華鳑鲏增色效果好，投喂時(shí)間越早，性腺分化程度越低，甲基睪酮起作用時(shí)間越早，增色效果越好。

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