何金芬

摘 要：本文主要對(duì)種子檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用實(shí)踐進(jìn)行分析。具體是對(duì)RFLP技術(shù)、RAPD技術(shù)以及免疫3種檢驗(yàn)技術(shù)的優(yōu)劣勢(shì)進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上，通過查閱相關(guān)資料對(duì)其在各類農(nóng)作物中的應(yīng)用原理與應(yīng)用效果進(jìn)行歸納。希望各種檢驗(yàn)技術(shù)在農(nóng)作物種子檢測(cè)中的應(yīng)用，在提高其純度方面發(fā)揮一定的輔助作用。

關(guān)鍵詞：檢驗(yàn)技術(shù)；RFLP技術(shù)；RAPD技術(shù)；免疫技術(shù)；應(yīng)用實(shí)踐

中圖分類號(hào)：S-1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20171232006

種子為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的基礎(chǔ)，種子質(zhì)量與農(nóng)民收入以及種子經(jīng)銷商效益之間存在密切的關(guān)聯(lián)性。在種子市場國際化局勢(shì)中，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用的種子質(zhì)量應(yīng)該得到切實(shí)的保障，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展與先進(jìn)，多樣化技術(shù)在種子質(zhì)量檢測(cè)中獲得較大的應(yīng)用空間，尤其是分子標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用為品種檢定供應(yīng)了新穎手段，就此本文展開相關(guān)論述。

1 RFLP技術(shù)在種子純度檢測(cè)中的應(yīng)用

RFLP（限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性）為在DNA水平上首次應(yīng)用在種子純度與品種鑒定領(lǐng)域的技術(shù)，因?yàn)樵摷夹g(shù)在應(yīng)用之時(shí)投入時(shí)間、精力、資金量大，程序繁雜等緣故，所以其通常不被應(yīng)用在種子質(zhì)量檢測(cè)工作中，但是借用某品種特殊RFLP標(biāo)記可以精確性的標(biāo)記該品種，并且維護(hù)其多形態(tài)穩(wěn)定性方面體現(xiàn)出一定的優(yōu)越性，重復(fù)性優(yōu)良、精準(zhǔn)性高，體現(xiàn)出共顯特征?，F(xiàn)階段，RFLP技術(shù)在云南玉溪市玉米、小麥、蠶豆、水稻、甘蔗等農(nóng)作品質(zhì)檢測(cè)上具有一定的應(yīng)用頻率。

Smith應(yīng)用38個(gè)探針精確的辨識(shí)了78個(gè)玉米雜交種，同時(shí)發(fā)現(xiàn)RFLP同工酶與蛋白質(zhì)電泳現(xiàn)象無法辨識(shí)玉米雜交種這一問題。Vacine等人應(yīng)用RFLP技術(shù)辨識(shí)了54種意大利尋常小麥品種。RFLP技術(shù)在種子品質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用流程可以做出如下概述：提取DNA是首要步驟，繼而應(yīng)用限制性內(nèi)切酶酶切DNA，并應(yīng)用凝膠電泳分解DNA片段，將DNA片段轉(zhuǎn)移至濾膜上；應(yīng)用放射性標(biāo)記的探針雜交呈現(xiàn)特定的DNA片段（Southern雜交）與對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

2 RAPD技術(shù)在種子檢測(cè)中的應(yīng)用

RAPD（隨機(jī)擴(kuò)增的多態(tài)性DNA）技術(shù)劣勢(shì)體現(xiàn)在穩(wěn)定性與重復(fù)性差方面上，所以其不是種子檢測(cè)首選技術(shù)，但是若某一作物沒有任何分子生物學(xué)研究基礎(chǔ)的情景下，對(duì)其進(jìn)行指紋圖譜建設(shè)與遺傳多樣性解析工作，體現(xiàn)出快捷性與簡潔性特征，不會(huì)產(chǎn)生放射性污染，投入資金低廉、分辯率較高、靈活性強(qiáng)，RAPD技術(shù)在農(nóng)作物、蔬菜作物與果樹方面已經(jīng)有所應(yīng)用。

Hu對(duì)Brassica屬作物進(jìn)行鑒定過程中，發(fā)現(xiàn)4個(gè)引物可以辨識(shí)14個(gè)硬花球花椰菜與12個(gè)花椰菜。Sticher應(yīng)用RAPD技術(shù)證明9個(gè)RAPD多態(tài)性片斷可精確的辨識(shí)27個(gè)大麥品系[1]。趙久然、李啟云分別應(yīng)用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)建設(shè)了玉米自交系與其雙親的DNA指紋圖譜，其在玉米自交系與雜交種真實(shí)性與純度鑒定領(lǐng)域中擁有較高的應(yīng)用頻率。朱青竹等人應(yīng)用16個(gè)引物對(duì)來自中國、美國、法國與澳大利亞等不同國家的棉花品種（系）進(jìn)行RAPD分析，發(fā)現(xiàn)了5個(gè)多態(tài)性優(yōu)良的引物。

為了達(dá)到彌補(bǔ)RAPD重復(fù)性差的缺陷，通常在對(duì)種子檢測(cè)過程中創(chuàng)設(shè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。作為DNA多態(tài)性標(biāo)記位點(diǎn)的條帶應(yīng)帶有可重復(fù)性特征，重復(fù)性優(yōu)良是其最重要的取舍憑據(jù)，而條帶的強(qiáng)弱不應(yīng)該作為取舍的憑據(jù)。參照Thormann對(duì)十字花科植物解析結(jié)果，發(fā)現(xiàn)RAPD產(chǎn)物強(qiáng)弱和該產(chǎn)物在基因組中的拷貝數(shù)之間不存在直接的關(guān)聯(lián)性，但是和引物、模板的同源性程度相關(guān)聯(lián)。

3 免疫技術(shù)在種子純度檢測(cè)中的應(yīng)用

免疫技術(shù)在種子純度檢測(cè)上的典型應(yīng)用為大麥。Deichl等人應(yīng)用定量免疫電泳技術(shù)鑒定了釀造大麥的多樣化品種；Burbidge等人從禾谷類貯藏蛋白單克隆抗體內(nèi)提取出抗體21/23，把食用大麥Cape與釀造大麥Clipper精確的區(qū)分開，與此同時(shí)建設(shè)了斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫法[2]。Brinke等人應(yīng)用玉米自交系的特點(diǎn)醇溶蛋白制得的單克隆抗體和7個(gè)自交系進(jìn)行酶聯(lián)免疫測(cè)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其間存在顯著的交叉反應(yīng)。

在免疫技術(shù)在種傳病毒檢測(cè)領(lǐng)域中獲得廣泛應(yīng)用的情況下，抗原檢測(cè)技術(shù)被研制與應(yīng)用。沈建國等人應(yīng)用抗原獲得與一步RT-PCR 相結(jié)合的方法，同時(shí)借助完善相關(guān)條件的方法，確定一步IC-RT-PCR 的反應(yīng)流程，并且對(duì)該方法特異性與現(xiàn)實(shí)檢測(cè)效果進(jìn)行辯證。并對(duì)菜豆莢斑駁病毒免疫捕獲一步RT-PCR 檢驗(yàn)。

4 結(jié)束語

在知識(shí)經(jīng)濟(jì)一體化時(shí)代中，國內(nèi)種子檢驗(yàn)技術(shù)獲得優(yōu)質(zhì)的發(fā)展空間，種子檢測(cè)研討工作日漸深入化，但是與他類學(xué)科相比較，種子檢測(cè)發(fā)展成熟度依然缺乏。所以在日后的研究與實(shí)踐工作中，應(yīng)該積極的將高端技術(shù)與傳統(tǒng)技術(shù)整合在一起，構(gòu)建一套行之有效的技術(shù)體系，從根本上處理與農(nóng)作物檢測(cè)相關(guān)的現(xiàn)實(shí)問題，為農(nóng)業(yè)最大效益的取得提供基礎(chǔ)條件。

參考文獻(xiàn)

[1]時(shí)偉芳，謝宗銘，楊麗明，王建華，孫群.基于近紅外光譜技術(shù)的春小麥單粒種子活力鑒定[J].麥類作物學(xué)報(bào)，2016（2）：200-205.

[2]劉小慧，鄒滿鈺，印麗萍，郭水良.檢疫性雜草假高粱與近緣植物種子的波譜鑒別方法[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2015（4）：421-427.