李秀娟 薛雅琳 劉曉輝 張 東 段章群 郭咪咪

(國(guó)家糧食局科學(xué)研究院1，北京 100037) (普洱健源油脂有限公司2，普洱 665100)

3種不同加工工藝漢麻仁油營(yíng)養(yǎng)組分研究

李秀娟1薛雅琳1劉曉輝2張 東1段章群1郭咪咪1

(國(guó)家糧食局科學(xué)研究院1，北京 100037) (普洱健源油脂有限公司2，普洱 665100)

對(duì)水酶法、壓榨法以及浸提法制得的漢麻仁油的脂肪酸組成、甘油三酯組成、生育酚和生育三烯酚、角鯊烯以及多酚含量進(jìn)行了分析研究。漢麻仁油中共分析出10種脂肪酸，其中主要脂肪酸為亞油酸(56.37%～56.52%)、亞麻酸(19.03%～20.32%)以及油酸(12.38%～13.03%)；漢麻仁油中甘油三酯含量最高的為L(zhǎng)LnLn，占19.86%～20.96%，其次為L(zhǎng)LLn(19.39%～19.72%)、PLLn(12.41%～12.87%)和LLL+OLLn(10.27%～10.82%)；維生素E組成為α-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚，其中γ-生育酚含量最高，為754.21～1 043.80 mg/kg；漢麻仁油中角鯊烯含量介于174.32～204.54 mg/kg。水酶法制得的漢麻仁油中多酚含量最高(53.86 mg GAE/kg)。

漢麻仁油 脂肪酸組成 甘油三酯 多酚 營(yíng)養(yǎng)組分 加工工藝

漢麻(CannabissativaL. Hemp)，又名火麻、大麻、線麻等，是一年生?？浦参?，是我國(guó)的原產(chǎn)作物之一[1]。漢麻籽脫殼后即為漢麻仁，含有豐富的脂肪(28.53%～51.06%)、蛋白質(zhì)(20.49%～37.60%)和碳水化合物(20%～30%)，另還含有其他人類需要的膳食營(yíng)養(yǎng)素：維生素(維生素A、維生素E、維生素B1、維生素B2等)、礦物質(zhì)(鉀、鈣、鈉、鎂、銅、鐵等)、膳食纖維和水，此外，還含有多酚類化合物、生物堿和植物甾醇等[1-2]。衛(wèi)生部將漢麻仁列為“既是食品又是藥品”的目錄[3]。漢麻仁油含有較高含量的不飽和脂肪酸以及維生素E等抗氧化物質(zhì)，具有較強(qiáng)的生理活性。目前，對(duì)于漢麻仁油品質(zhì)的研究多集中脂肪酸組成、維生素E總量變化趨勢(shì)[4-7]。研究采用不同加工工藝時(shí)漢麻仁油脂肪酸組成、甘油三酯結(jié)構(gòu)和營(yíng)養(yǎng)伴隨物如生育酚及生育三烯酚、角鯊烯和多酚，為漢麻仁油適度加工并最大化的保留營(yíng)養(yǎng)成分提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

漢麻籽：安國(guó)義全中藥材公司，產(chǎn)地山東；棕櫚原油：市售。

Alcalase 2.4L堿性蛋白酶：諾維信生物技術(shù)有限公司；α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚標(biāo)準(zhǔn)品：美國(guó)Sigma公司；異辛烷、甲醇、異丙醇、丙酮、乙腈、正庚烷、四氫呋喃，色譜級(jí)：賽默飛世爾公司；氫氧化鉀、乙醇、硫酸氫鈉等，分析純：北京化學(xué)試劑公司。

中草藥粉碎機(jī)：天津泰斯特儀器有限公司；強(qiáng)力電動(dòng)攪拌機(jī)(JB300-D型)：上海標(biāo)本模型廠；FE 20型實(shí)驗(yàn)pH計(jì)：梅特勒-托利多儀器有限公司；7890A型氣相色譜儀配FID檢測(cè)器、1100型液相色譜儀配示差折光檢測(cè)器、高效液相色譜(1200型)-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀(6510型)：美國(guó)安捷倫公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 漢麻仁油制備

水酶法：漢麻仁粉碎后以1∶4(m/V)料液比加入去離子水，攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH至8.50，加入2%的堿性蛋白酶， 60 ℃下酶解2 h，滅酶，4 000 r/min離心10 min，獲得游離油、液相、殘?jiān)?，收集游離油，于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

壓榨法：60 ℃、15 min/次壓榨，壓榨2次，過(guò)濾，收集得到漢麻仁油，于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

浸提法：漢麻仁碾磨后，置于三角瓶中，以石油醚(沸程30～60 ℃) 為浸提溶劑，超聲30 min，于4 000 r/min條件下離心10 min，轉(zhuǎn)移上清液至蒸餾瓶中，40 ℃水浴中減壓蒸餾，少量殘留的石油醚用弱氮吹儀吹干，得到漢麻仁油，于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 脂肪酸組成測(cè)定

漢麻仁油脂肪酸組成測(cè)定參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[8-9]。

1.2.3 甘油三酯分析

樣品處理參考AOCS標(biāo)準(zhǔn)[10]；漢麻仁油甘油三酯的定性采用1200-6510型高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀[11-12]；定量采用高效液相色譜法(示差折光檢測(cè)器)以面積歸一化法確定相對(duì)百分含量。

1.2.4 生育酚和生育三烯酚含量測(cè)定

稱取漢麻仁油樣品0.25 g，溶于25 mL正庚烷，定容后過(guò)0.45 μm尼龍膜，待上機(jī)分析。色譜條件：Si60色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫25 ℃；流動(dòng)相為正庚烷/四氫呋喃(1 000/40，V/V)，進(jìn)樣量10 μL，熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)295 nm，發(fā)射波長(zhǎng)330 nm[13]。

1.2.5 角鯊烯測(cè)定

準(zhǔn)確稱取100 mg樣品，加5 mL正己烷混勻，300 μL甲酯化試劑，振蕩后加入3 mL飽和食鹽水，再次劇烈振蕩，4 000 r/min離心5 min，取上清液，氣相色譜分析。氣相色譜條件：進(jìn)樣口250 ℃，進(jìn)樣量1 μL，分流比20∶1，HP-5色譜柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；程序升溫，初始溫度160 ℃，15 ℃/min升至220 ℃，保持2 min，5 ℃/min升至280 ℃保持12 min。FID檢測(cè)器，溫度為300 ℃[14]。

1.2.6 多酚的分析

漢麻仁油中多酚含量以總酚含量計(jì)，采用福林酚顯色法。

提?。悍Q取 4 g漢麻仁油樣品于50 mL離心管中，加入正己烷和甲醇/水溶液(80/20，V/V)，離心，將下層清液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，上層溶液中再加入正己烷和甲醇/水溶液(80/20，V/V)，離心。上述步驟重復(fù)3次，將收集的下層清液用甲醇/水溶液(80/20，V/V)定容至10 mL，獲得多酚提取液，顯色前過(guò)0.45 μm有機(jī)膜。

顯色：移取1 mL多酚提取液于10 mL試管中，加入福林酚試劑、7.5%碳酸鈉溶液以及蒸餾水。振蕩 1 min 后，置于70 ℃水浴中反應(yīng)30 min，750 nm 處測(cè)定吸光度。結(jié)果以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，每千克漢麻仁油中毫克沒(méi)食子酸當(dāng)量計(jì)(mg GAE /kg)[15-16]。

1.2.7 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。顯著性差異采用One-Way ANOVA檢驗(yàn)以及DUCAN檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 脂肪酸組成

測(cè)定了水酶法、壓榨法以及浸提法制得的漢麻仁油脂肪酸組成，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 3種加工工藝漢麻仁油脂肪酸組成/%

注：結(jié)果以平均值±SD表示，同一行不同字母表示有顯著性差異(P<0.05)，余同。

從漢麻仁油中共分析出10種脂肪酸，其中主要脂肪酸為亞油酸(56.37%～56.52%)、亞麻酸(19.03%～20.32%)以及油酸(12.38%～13.03%)。飽和脂肪酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)介于10.05%～10.57%，而單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為12.80%～13.43%、75.54%～76.72%。對(duì)3種不同加工工藝漢麻仁油主要脂肪酸的差異性分析，結(jié)果顯示：對(duì)于亞油酸，水酶法和浸提法差異不明顯(P>0.05)，而與壓榨法有明顯差異(P<0.05)；對(duì)于亞麻酸和油酸，3種提取方法差異明顯(P<0.05)。脂肪酸組成與前人[4，6-7，17]研究結(jié)果相近。

2.2 甘油三酯組成

采用液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定漢麻仁油甘油三酯時(shí)，APCI質(zhì)譜圖中同時(shí)存在信號(hào)強(qiáng)度較大的準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+和失去1個(gè)脂肪酸的碎片離子峰[M+H-脂肪酸]+，通過(guò)對(duì)碎片離子峰豐度的比較推斷該斷裂脂肪酸種類及位于甘油骨架的位置。圖1為漢麻仁油甘油三酯總離子流圖。以保留時(shí)間23.65 min的色譜峰為例，說(shuō)明甘油三酯結(jié)構(gòu)定性過(guò)程。首先進(jìn)行全掃描，得到m/z為597.477 8、599.492 3及877.715 3的離子，推斷m/z877.715 3為[M+H]+準(zhǔn)分子離子，而m/z597.477 8、m/z599.492 3為甘油三酯的[M+H-RCOOH]+碎片離子。再以m/z877.715 3為母離子，設(shè)置碰撞電壓，得到二級(jí)質(zhì)譜圖(見(jiàn)圖2)，再次得到m/z為597.477 8和599.492 3的碎片離子，因此推斷m/z877.715 3為L(zhǎng)LLn。

圖1 漢麻仁油甘油三酯總離子流圖

圖2 m/z 877.7153二級(jí)質(zhì)譜圖

采用1.2.3方法測(cè)定了3種加工工藝制得的漢麻仁油甘油三酯組成及含量，見(jiàn)表2。漢麻仁油中含量最高的甘油三酯為L(zhǎng)LnLn，占19.86%～20.96%，其次為L(zhǎng)LLn(19.39%～19.72%)、PLLn(12.41%～12.87%)和LLL+OLLn(10.27%～10.82%)。這些主要甘油三酯占漢麻仁油甘油三酯60%以上。從主要組成甘油三酯?；梢钥闯觯瑏営退?、油酸以及亞麻酸?；嫉搅舜蟛糠郑@也反映出這3種脂肪酸為漢麻仁油主要脂肪酸。采用顯著性分析后發(fā)現(xiàn)，對(duì)于LLnLn、PLLn以及LLL+OLLn，水酶法和浸提法無(wú)顯著性差異(P>0.05)，而與壓榨法差異顯著(P<0.05)；對(duì)于LLLn，3種不同加工工藝均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

表2 3種加工工藝漢麻仁油甘油三酯組成/%

2.3 生育酚和生育三烯酚

漢麻仁油共檢測(cè)出3種類型生育酚，分別為α-生育酚、γ-生育酚以及δ-生育酚，其中γ-生育酚含量最高，為754.21～1 043.80 mg/kg(表3)；以棕櫚油作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，確定生育三烯酚含量[13]，未檢出生育三烯酚。

表3 3種加工工藝漢麻仁油生育酚含量/mg/kg

顯著性檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，3種不同加工工藝制得的漢麻仁油α-生育酚含量無(wú)顯著性差異(P>0.05)，而γ-生育酚及δ-生育酚差異及其顯著(P<0.05)，采用浸提法制得的漢麻仁油γ-生育酚及δ-生育酚含量最高。這是由于生育酚屬于脂溶性物質(zhì)，采用石油醚浸提利于其從油料的遷移。但是，通常在實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中，采用浸提法制得的油脂需要精煉才能滿足食用要求，這必然會(huì)導(dǎo)致生育酚的損失。相比董海勝等[18]的研究(超臨界萃取法)，采用水酶法、壓榨法以及浸提法制得的漢麻仁油γ-生育酚含量要高，這可能與油脂提取方式或油料品種、種植生長(zhǎng)環(huán)境不同有關(guān)。

2.4 角鯊烯

角鯊烯是一種脂質(zhì)不皂化物，具有提高體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能，是一種無(wú)毒性的具有防病治病作用的海洋生物活性物質(zhì)。研究分析了3種不同加工工藝漢麻仁油角鯊烯分布狀況，其含量介于174.32～204.54 mg/kg之間(表4)。

通過(guò)顯著性分析發(fā)現(xiàn)，采用壓榨法和浸提法制得的漢麻仁油中角鯊烯含量無(wú)明顯差異(P>0.05)，而與水酶法差異較大(P<0.05)，2種工藝漢麻仁油角鯊烯含量明顯高于水酶法。與文獻(xiàn)結(jié)果對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，漢麻仁油角鯊烯含量明顯低于初榨橄欖油(2 709.7～7 856.5 mg/kg)、米糠油(651.04 mg/kg)等；但高于葵花籽油、一級(jí)大豆油和一級(jí)菜籽油，與油茶籽油含量接近[19]。

表4 3種加工工藝漢麻仁油角鯊烯含量/mg/kg

2.5 多酚

多酚類化合物具有抗氧化能力，是天然的抗氧化劑，在植物油尤其是橄欖油中廣泛存在。研究分析了3種不同加工工藝制取漢麻仁油多酚含量(見(jiàn)表5)。多酚含量最高的是水酶法制得的漢麻仁油(53.86 mg GAE/kg)。通過(guò)顯著性分析，3種加工工藝制得的漢麻仁油多酚含量存在顯著性差異(P<0.05)。相比橄欖油[14-16]，漢麻仁油中多酚相對(duì)較低。

表5 3種加工工藝漢麻仁油多酚含量/mg GAE/kg

3 結(jié)論

分析了水酶法、壓榨法和浸提法制得的漢麻仁油脂肪酸組成、甘油三酯組成、生育酚、角鯊烯和多酚含量。3種加工方式制取的漢麻仁油主要脂肪酸為亞油酸、亞麻酸和油酸；LLnLn、LLLn、PLLn以及LLL+OLLn是其含量較高的甘油三酯；漢麻仁油共檢測(cè)出3種類型生育酚，分別為α-生育酚、γ-生育酚以及δ-生育酚，其中γ-生育酚含量最高，其角鯊烯含量介于174.32至204.54 mg/kg之間，多酚含量為32.87～53.86 mg GAE/kg。同時(shí)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示加工工藝的不同可導(dǎo)致漢麻仁油部分營(yíng)養(yǎng)組分含量存在顯著性差異。

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Nutrition Components of Hemp Seed Oil by Different Processing Technology

Li Xiujuan1Xue Yalin1Liu Xiaohui2Zhang Dong1Duan Zhangqun1Guo Mimi1
(Academy of State Administration of Grain1, Beijing 100037) (Puer Jianyuan Oil Co., Ltd.2, Puer 665100)

Fatty acid composition, triglyceride profile and the content of tocopherol, squalene and polyphenols in hemp seed oil got by aqueous enzymatic, pressing and solvent extraction method were studied. More than ten kinds of fatty acids were analyzed in hemp seed oil, and the main fatty acids were linoleic acid (56.37%～56.52%), linolenic acid (19.03%～20.32%) and oleic acid (12.38%～13.03%). Triglycerides of hemp seed oil had the highest amount of LLnLn accounting for 19.86%～20.96%, followed by LLLn (19.39%～19.72%), PLLn(12.41%～12.87%) and LLL+OLLn (10.27%～10.82%). Tocopherol in hemp seed oil included α-, γ-and δ-type, and the content of γ-tocopherol was the highest level as 754.21～1 043.80 mg/kg. The content of squalene was 174.32～204.54 mg/kg. Polyphenols were found in highest concentrations (53.86 GAE mg/kg) in hemp seed oil obtained from aqueous enzymatic method.

hemp seed oil, fatty acid composition, triglyceride profile, polyphenols, nutrient components, processing technology

S565

A

1003-0174(2017)12-0105-05

863 計(jì)劃( 2013AA102104)，國(guó)家糧食公益性行業(yè)科研專項(xiàng)( 201513003-7)

2016-12-19

李秀娟，女，1984年出生，助理研究員，糧油食品檢驗(yàn)

薛雅琳，女，1960年出生，教授級(jí)高級(jí)工程師，糧油品質(zhì)檢驗(yàn)與分析技術(shù)