劉曉瑩，鄒偉，于學(xué)平

中國因卒中死亡的患者每年有160萬[1-2]，其中有18%～47%是出血性卒中患者[3]。出血性卒中即非外傷性腦出血，是卒中的一個分型，其病理損害主要包括原發(fā)性腦損傷和繼發(fā)性腦損傷。原發(fā)性腦損傷是指出血后的占位效應(yīng)，顱內(nèi)容積增大、內(nèi)環(huán)境遭到破壞而導(dǎo)致的顱內(nèi)壓升高等；繼發(fā)性腦損傷是指由初級損傷誘發(fā)的血液循環(huán)障礙、代謝紊亂、腦水腫、血液分解產(chǎn)物釋放等[4-5]。目前仍無有效的治療方法改善出血性卒中高發(fā)病率和高死亡率的現(xiàn)狀。越來越多的證據(jù)表明先天性免疫應(yīng)答和炎癥損傷參與了腦出血后神經(jīng)功能損傷的病理過程[4，6-9]。巨噬細胞誘導(dǎo)的C型凝集素受體（macrophage-inducible C-type lectin，Mincle）會結(jié)合壞死細胞中釋放的SAP130配體而激發(fā)下游反應(yīng)[10-11]。在壞死或外界刺激下，Mincle使下游脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase，Syk）磷酸化，促使NF-κB通路激活，產(chǎn)生促炎因子，并促進中性粒細胞浸潤[11-12]。在包括缺血性卒中和腦外傷在內(nèi)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，Mincle/Syk通路已被證實作為激發(fā)點參與炎癥反應(yīng)的發(fā)生[13-14]。最新研究表明，抑制Mince/Syk通路有助于控制蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期的炎性腦損傷[10]。本文就Mincle/Syk信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進展進行綜述，以期為研究出血性卒中發(fā)病機制提供新思路，為治療出血性卒中提供新靶點。

1 Mincle的結(jié)構(gòu)與分布

Mincle也叫作CLEC4E，連同Dectin-1、Dectin-2、MCL、MMR及DC-SIGN都隸屬于C型凝集素受體（C-type lectin receptor，CLR）家族[15-17]，是由Makoto Matsumoto等[18]于1999年在小鼠腹腔巨噬細胞中發(fā)現(xiàn)的。目前對Mincle受體結(jié)構(gòu)的研究尚不完善，Makoto Matsumoto等[18]指出它是一種含有219個氨基酸的Ⅱ型跨膜蛋白，其中包括含氨基端的胞內(nèi)區(qū)，一段跨膜區(qū)和含有羧基端的胞外區(qū)。Mincle受體在人類基因組中由于胞外區(qū)缺乏多態(tài)性，而使其生物學(xué)活性處于相對保守狀態(tài)[19]。Mincle受體主要在髓系細胞中表達，特別是某些抗原提呈細胞如巨噬細胞、樹突狀細胞，在B細胞及大腦的小膠質(zhì)細胞中也可發(fā)現(xiàn)受體的表達[19-21]。Yue He等[10]最新的實驗結(jié)果表明，Mincle在蛛網(wǎng)膜下腔出血（Subarachnoid Hemorrhage，SAH）大鼠腦組織的小神經(jīng)膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元中均有表達，但在星形細胞中無表達。Christine Ribbing等[22]發(fā)現(xiàn)肥大細胞表面也是Mincle受體表達分布的區(qū)域。

2 Mincle與炎癥反應(yīng)

Mincle已被廣泛證實，作為致病刺激的受體，隨之引發(fā)了先天的促炎癥反應(yīng)[23]。然而，最新的研究指出，Mincle不單純誘導(dǎo)促炎癥反應(yīng)，還是一種免疫調(diào)節(jié)劑，它參與并促進了抗炎細胞因子的表達，并對抗調(diào)節(jié)促炎癥信號通路[24]。實驗顯示，白細胞介素10（interleukin-10，IL-10）分泌增多可增強老鼠對病原菌的易感性[25]。而Mincle在巨噬細胞上的IL-10表達中起重要作用[26-27]。除了誘導(dǎo)抗炎細胞因子分泌外，Mincle最近還被發(fā)現(xiàn)關(guān)系到促炎信號的下行調(diào)節(jié)。Mincle基因敲除小鼠腹腔感染真菌后炎性細胞因子及中性粒細胞募集均較少[28]。Mincle可與結(jié)核分枝桿菌結(jié)合，激活巨噬細胞產(chǎn)生炎性因子和一氧化碳。此外機體在受到輻射等刺激時，會引發(fā)胸腺細胞死亡和中性粒細胞浸潤，此時Mincle將發(fā)揮其免疫監(jiān)視的作用，減少炎性浸潤造成的組織細胞損傷，有利于后期恢復(fù)。還有學(xué)者在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清中檢測到Mincle信使核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）水平升高[29]。可見Mincle廣泛參與多種免疫反應(yīng)及炎癥反應(yīng)過程，而炎癥反應(yīng)正是出血性卒中后腦水腫加重的誘因，可引起嚴重的繼發(fā)性腦損傷。由此可見抑制Mincle及其相關(guān)的炎性反應(yīng)通路，可為防止出血性卒中炎性腦損傷、降低腦水腫造成的風(fēng)險提供新思路。

3 Mincle/Syk信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與出血性卒中

CLR信號通過Syk-Card9通路生成一個獨特的轉(zhuǎn)錄激活程序。Syk與CLR胞內(nèi)磷酸化ITAM基序或銜接蛋白相綁定以啟動信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是通過以下幾種模塊完成的：①PLCγ2，在Dectin-1激活后被磷酸化誘發(fā)Ca2+流出，繼而通過激活鈣調(diào)磷酸酶觸發(fā)了NFAT轉(zhuǎn)錄因子的核外露[30-31]。PLCγ2-DC無法通過激活MAPK來分泌炎性細胞因子和指導(dǎo)T細胞Th1/Th17極化[30，32]。②Card9-Bcl10-Malt1復(fù)合體對由Dectin-1配體凝膠多糖所誘發(fā)的基因表達及TDM和TDB至關(guān)重要[33-34]。Card9-Bcl10-Malt1導(dǎo)致NF-κB激活而不需要激活MAPKs ERK1/2、JNK和p38[33，35-36]。同時有證據(jù)表明PLCγ將Syk與Card9相鏈接[30]。③Dectin-1和Syk激活的同時也激活了Raf-1受體，導(dǎo)致RelA磷酸化，從而介導(dǎo)了NF-kb調(diào)解基因的表達[37]。SAP130作為Mincle的一種結(jié)合蛋白是U2 snRNP的一個組件，固定存在于活細胞的細胞核中[11，38]，當組織損傷、細胞壞死時，SAP130將被釋放出來，作為配體與Mincle受體相結(jié)合，使下游Syk磷酸化，進而激活Card9依賴的級聯(lián)信號。其中Card9含量的多少與免疫反應(yīng)效果直接相關(guān)，而Card9-Bcl10-Malt1復(fù)合體在NF-κB途徑的激活中扮演至關(guān)重要的角色。一旦NF-κB信號通路被激活，包括腫瘤壞死因子α、IL-6等在內(nèi)的相關(guān)炎性因子將呈現(xiàn)高表達。已有研究證實NF-κB參與了出血性卒中的炎性反應(yīng)過程[39]，而關(guān)于其上游的Mincle的研究還比較少見。

4 Mincle參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)展

De Rivero Vaccari Juan Carlos等[13]實驗發(fā)現(xiàn)，腦外傷后Mincle在大腦皮層神經(jīng)元細胞中被SAP130激活，并產(chǎn)生腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）。外傷后腦組織及腦脊液中Mincle表達增多，抑制Mincle通路后，TNF表達減少。Thiruma V Arumugam等[40]提出Mincle/Syk信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了缺血性卒中小鼠的病理生理過程。也有實驗表明[14]，Mincle在人和鼠缺血腦組織中的免疫細胞及非免疫細胞中均有表達；Mincle、Syk參與的先天免疫系統(tǒng)在腦缺血及再灌注的病理過程中起關(guān)鍵作用。Yue He等[10]實驗發(fā)現(xiàn)，Mincle在小膠質(zhì)細胞及神經(jīng)元中有表達；SAH后Mincle/Syk信號通路被激活，炎性因子及MPO表達增多，抑制其通路激活則相應(yīng)指標表達降低，并可減輕神經(jīng)功能損傷程度。Yi Xie等[41]在此基礎(chǔ)上，以Mincle/Syk為靶點，利用人白蛋白干預(yù)SAH大鼠，取得了很好的抑制免疫及抗炎的效果。

5 Mincle參與出血性卒中治療的前景展望

Mincle作為CLR家族中“年輕的成員”，人們對其機理的研究尚不全面，但因其參與了多種疾病的先天性免疫應(yīng)答過程，并與炎癥反應(yīng)的激活密切相關(guān)而得到了學(xué)術(shù)界廣泛關(guān)注。并且大量實驗數(shù)據(jù)表明，Mincle在腦組織，特別是小膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元中均有表達。同時Mincle/Syk信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路也被發(fā)現(xiàn)參與了包含缺血性卒中在內(nèi)的多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的神經(jīng)炎性反應(yīng)，特異性的抑制該通路激活可以抑制神經(jīng)炎癥，抗凋亡及改善神經(jīng)功能損傷。對于有著相同結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)和相似生理病理機制的腦出血，Mincle在其發(fā)病及治療中的作用還未得到關(guān)注。基于以上研究成果和本綜述回顧情況，全面而深入地探索Mincle/Syk通路在腦出血神經(jīng)炎性反應(yīng)中的作用可能會成為理解腦出血發(fā)病機制和有效治療腦出血的新方法。

[1] JOHNSTON S C，MENDIS S，MATHERS C D.Global variation in stroke burden and mortality：estimates from monitoring，surveillance，and modelling[J]. Lancet Neurol，2009，8（4）：345-354.

[2] CHEN Z. The mortality and death cause of national sample areas[M]. Beijing：Peking Union Medical University Press，2008.

[3] LIU L，WANG D，WONG K S，et al. Stroke and stroke care in China：huge burden，signi ficant workload，and a national priority[J]. Stroke，2011，42（12）：3651-3654.

[4] KEEP R F，HUA Y，XI G. Intracerebral haemorrhage：mechanisms of injury and therapeutic targets[J].Lancet Neurol，2012，11（8）：720-731.

[5] URDAY S，BESLOW L A，GOLDSTEIN D W，et al. Measurement of perihematomal edema in intracerebral hemorrhage[J]. Stroke，2015，46（4）：1116-1119.

[6] FANG H，WANG P F，ZHOU Y，et al. Toll-like receptor 4 signaling in intracerebral hemorrhageinduced in fl ammation and injury[J/OL]. J Neuroin fl ammation，2013，10：27. https：//doi.org/10.1186/1742-2094-10-27

[7] HWANG B Y，APPELBOOM G，AYER A，et al.Advances in neuroprotective strategies：potential therapies for intracerebral hemorrhage[J].Cerebrovasc Dis，2011，31（3）：211-222.

[8] ZHOU Y，WANG Y，WANG J，et al. In fl ammation in intracerebral hemorrhage：from mechanisms toclinical translation[J/OL]. Prog Neurobiol，2014，115：25-44. https：//doi.org/10.1016/j.pneurobio.2013.11.003

[9] LEI C，LIN S，ZHANG C，et al. High-mobility group box1 protein promotes neuroin fl ammation after intracerebral hemorrhage in rats[J/OL].Neuroscience，2013，228：190-199. https：//doi.org/10.1016/j.neuroscience.2012.10.023

[10] HE Y，XU L，LI B，et al. Macrophage-Inducible C-Type Lectin/Spleen Tyrosine Kinase Signaling Pathway Contributes to Neuroin fl ammation After Subarachnoid Hemorrhage in Rats[J]. Stroke，2015，46（8）：2277-2286.

[11] YAMASAKI S，ISHIKAWA E，SAKUMA M，et al.Mincle is an ITAM-coupled activating receptor that senses damaged cells[J]. Nat Immunol，2008，9（10）：1179-1188.

[12] YASUKAWA S，MIYAZAKI Y，YOSHII C，et al. An ITAM-Syk-CARD9 signalling axis triggers contact hypersensitivity by stimulating IL-1 production in dendritic cells[J/OL]. Nat Commun，2014，5：3755. http：//dx.doi.org/10.1038/ncomms4755

[13] DE RIVERO VACCARI J C，BRAND F J 3RD，BERTI A F，et al. Mincle signaling in the innate immune response after traumatic brain injury[J]. J Neurotrauma，2015，32（4）：228-236.

[14] SUZUKI Y，NAKANO Y，MISHIRO K，et al.Involvement of Mincle and Syk in the changes to innate immunity after ischemic stroke[J/OL]. Sci Rep，2013，3：3177. http：//dx.doi.org/10.1038/srep03177

[15] BROWN G D. Sensing necrosis with Mincle[J]. Nat Immunol，2008，9（10）：1099-1100.

[16] KINGETER L M，LIN X. C-type lectin receptorinduced NF-κB activation in innate immune and in fl ammatory responses[J]. Cell Mol Immunol，2012，9（2）：105-112.

[17] HARDISON S E，BROWN G D. C-type lectin receptors orchestrate antifungal immunity[J]. Nat Immunol，2012，13（9）：817-822.

[18] MATSUMOTO M，TANAKA T，KAISHO T，et al. A novel LPS-inducible C-type lectin is a transcriptional target of NF-IL6 in macrophages[J]. J Immunol，1999，163（9）：5039-5048.

[19] FLORNES L M，BRYCESON Y T，SPURKLAND A，et al. Identi fication of lectin-like receptors expressed by antigen presenting cells and neutrophils and their mapping to a novel gene complex[J].Immunogenetics，2004，56（7）：506-517.

[20] MCKIMMIE C S，ROY D，F(xiàn)ORSTER T，et al.Innate immune response gene expression pro files of N9 microglia are pathogen-type speci fic[J]. J Neuroimmunol，2006，175（1-2）：128-141.

[21] KAWATA K，ILLARIONOV P，YANG G X，et al.Mincle and human B cell function[J]. J Autoimmun，2012，39（4）：315-322.

[22] RIBBING C，ENGBLOM C，LAPPALAINEN J，et al. Mast cells generated from patients with atopic eczema have enhanced levels of granule mediators and an impaired Dectin-1 expression[J]. Allergy，2011，66（1）：110-119.

[23] RICHARDSON M B，WILLIAMS S J. MCL and Mincle：C-type lectin receptors that sense damaged self and pathogen-associated molecular patterns[J/OL]. Front Immunol，2014，5：288. https：//doi.org/10.3389/ fimmu.2014.00288

[24] OSTROP J，LANG R. Contact，Collaboration，and Con fl ict：Signal Integration of Syk-Coupled C-Type Lectin Receptors[J]. J Immunol，2017，198（4）：1403-1414.

[25] TURNER J，GONZALEZ-JUARRERO M，ELLIS D L，et al. In vivo IL-10 production reactivates chronic pulmonary tuberculosis in C57BL/6 mice[J].J Immunol，2002，169（11）：6343-6351.

[26] YAMASAKI S，MATSUMOTO M，TAKEUCHI O，et al. C-type lectin Mincle is an activating receptor for pathogenic fungus，Malassezia[J]. Proc Natl Acad Sci USA，2009，106（6）：1897-1902.

[27] ISHIKAWA T，ITOH F，YOSHIDA S，et al.Identi fication of distinct ligands for the C-type lectin receptors Mincle and Dectin-2 in the pathogenic fungus Malassezia[J]. Cell Host Microbe，2013，13（4）：477-488.

[28] BUGARCIC A，HITCHENS K，BECKHOUSE A G，et al. Human and mouse macrophage-inducible C-type lectin（Mincle）bind Candida albicans[J].Glycobiology，2008，18（9）：679-685.

[29] NAKAMURA N，SHIMAOKA Y，TOUGAN T，et al. Isolation and expression pro filing of genes upregulated in bone marrow-derived mononuclear cells of rheumatoid arthritis patients[J]. DNA Res，2006，13（4）：169-183.

[30] XU S，HUO J，LEE K G，et al. Phospholipase Cgamma2 is critical for Dectin-1-mediated Ca2+fl ux and cytokine production in dendritic cells[J]. J Biol Chem，2009，284（11）：7038-7046.

[31] GOODRIDGE H S，SIMMONS R M，UNDERHILL D M. Dectin-1 stimulation by Candida albicans yeast or zymosan triggers NFAT activation in macrophages and dendritic cells[J]. J Immunol，2007，178（5）：3107-3115.

[32] TASSI I，CELLA M，CASTRO I，et al. Requirementof phospholipase C-gamma2（PLCgamma2）for Dectin-1-induced antigen presentation and induction of TH1/TH17 polarization[J]. Eur J Immunol，2009，39（5）：1369-1378.

[33] GROSS O，GEWIES A，F(xiàn)INGER K，et al. Card9 controls a non-TLR signalling pathway for innate anti-fungal immunity[J]. Nature，2006，442（7103）：651-656.

[34] WERNINGHAUS K，BABIAK A，GROSS O，et al. Adjuvanticity of a synthetic cord factor analogue for subunit Mycobacterium tuberculosis vaccination requires FcRgamma-Syk-Card9-dependent innate immune activation[J]. J Exp Med，2009，206（1）：89-97.

[35] SAIJO S，IKEDA S，YAMABE K，et al. Dectin-2 recognition of alpha-mannans and induction of Th17 cell differentiation is essential for host defense against Candida albicans[J]. Immunity，2010，32（5）：681-691.

[36] HARA H，ISHIHARA C，TAKEUCHI A，et al. The adaptor protein CARD9 is essential for the activation of myeloid cells through ITAM-associated and Tolllike receptors[J]. Nat Immunol，2007，8（6）：619-629.

[37] GRINGHUIS S I，DEN DUNNEN J，LITJENS M，et al. Dectin-1 directs T helper cell differentiation by controlling noncanonical NF-kappaB activation through Raf-1 and Syk[J]. Nat Immunol，2009，10（2）：203-213.

[38] DAS B K，XIA L，PALANDJIAN L，et al.Characterization of a protein complex containing spliceosomal proteins SAPs 49，130，145，and 155[J].Mol Cell Biol，1999，19（10）：6796-6802.

[39] LIU H，SUN X，ZOU W，et al. Scalp acupuncture attenuates neurological de ficits in a rat model of hemorrhagic stroke[J/OL]. Complement Ther Med，2017，32：85-90. https：//doi.org/10.1016/j.ctim.2017.03.014

[40] ARUMUGAM T V，MANZANERO S，F(xiàn)URTADO M，et al. An atypical role for the myeloid receptor Mincle in central nervous system injury[J]. J Cereb Blood Flow Metab，2017，37（6）：2098-2111.

[41] XIE Y，GUO H，WANG L，et al. Human albumin attenuates excessive innate immunity via inhibition of microglial Mincle/Syk signaling in subarachnoid hemorrhage[J/OL]. Brain Behav Immun，2017，60：346-360. https：//doi.org/10.1016/j.bbi.2016.11.004