探究公共衛(wèi)生間微生物污染及其影響

蔡迪睿 臧旭東

摘要本實(shí)驗(yàn)選擇公共衛(wèi)生間馬桶墊及洗手盆表面隨機(jī)樣本，進(jìn)行表面微生物污染的檢測(cè)。采集樣本后，進(jìn)行細(xì)菌分離、純化培養(yǎng)，形態(tài)學(xué)觀察，記錄細(xì)菌顏色、形態(tài)、大小與數(shù)量；將細(xì)菌進(jìn)行16SrDNA檢測(cè)，測(cè)定細(xì)菌DNA序列并在NCBI上查出細(xì)菌種類。最后整理數(shù)據(jù)，得到馬桶墊上的細(xì)菌個(gè)數(shù)、種類，并分析微生物污染情況及其對(duì)人們健康的影響。

關(guān)鍵詞微生物污染 16SrDNA檢測(cè) 公共衛(wèi)生

微生物污染是主要傳染性疾病的源頭，包含食品微生物污染、空氣微生物污染、水體微生物污染等方面。在日常生活、工作環(huán)境中存在在著種類繁多、數(shù)量巨大的微生物。它們無處不在，而人們光憑肉眼無法看到，這就使得人們很容易忽視它們所造成的污染，對(duì)微生物污染的防范措施不夠系統(tǒng)，導(dǎo)致對(duì)生活環(huán)境及人類健康造成影響。探究不同環(huán)境下微生物的污染是目前探究環(huán)境污染的重要課題之一，了解工作、生活環(huán)境中衛(wèi)生物污染的現(xiàn)狀，對(duì)人們提高公共環(huán)境衛(wèi)生保護(hù)意識(shí)和減少傳染病的發(fā)生與傳播有著重大的意義。

1材料和方法

1.1樣品的采集

（1）采樣地點(diǎn)：武漢病毒研究所一號(hào)樓公共衛(wèi)生間馬桶墊、洗手盆。

（2）采樣方法：于50 mL離心管中放置10 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8.5%的生理鹽水；用5x5 cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用鑷子夾住浸有無菌生理鹽水液的脫脂棉，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)脫脂棉、連續(xù)采樣3個(gè)規(guī)格板面積；將脫脂棉于放入裝10 mL采樣液的試管中，蓋上蓋子，4～C保存。

1.2細(xì)菌的分離與純化

（1）移液器移取浸泡樣品生理鹽水100μL于LB固體培養(yǎng)基平板中，三角玻棒消毒后，將樣品在培養(yǎng)基表面上均勻涂布；倒置平板，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h后取出，計(jì)數(shù)。

（2）選擇不同形態(tài)的菌落進(jìn)行劃線培養(yǎng)并記錄細(xì)菌群落的大小、形狀、表面與邊緣的模樣、顏色等。

（3）接種環(huán)挑取單菌落，交叉劃線法在新的LB平板上劃線，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 h后取出得到各個(gè)細(xì)菌的純培養(yǎng)物。

1.3細(xì)菌的16S rDNA序列鑒定

1.3.1實(shí)驗(yàn)試劑

溶菌酶（20 mg/mL）、超純水、PCR mix（2xTS-INGKE MasterMix）、瓊脂糖、引物（表1）。

1.3.2實(shí)驗(yàn)方法

1.3.2.1核酸提取

1.3.2.2基因擴(kuò)增

（1）基因擴(kuò)增體系見表2。

（2）基因擴(kuò)增程序見表3。

（3）電泳檢測(cè)

稱取1g瓊脂糖置于100 mL TAE電泳緩沖液中，加熱融化，待溫度降至60℃左右時(shí)，均勻鋪板，制成1%的瓊脂糖凝膠。PCR反應(yīng)結(jié)束后，加樣，以100V電壓進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。電泳結(jié)束后，染色，用凝膠成像儀觀察，拍照，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1樣品的采集

本實(shí)驗(yàn)共采集6份樣品（表4）。

2.2細(xì)菌的分離與純化

（1）對(duì)所采樣品分所得細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表5。

（2）計(jì)算公式：細(xì)菌菌落總數(shù)（efu/100c㎡）（物體表面微生物污染）：物體表面菌落數(shù)=平皿上菌落的平均數(shù)×采樣液體稀釋倍數(shù)/采樣面積（c㎡）。

通過計(jì)算，得馬桶，洗手臺(tái)細(xì)菌數(shù)（表6）。

2.3細(xì)菌的16SrDNA序列鑒定

2.3.1部分電泳檢測(cè)結(jié)果

PCR部分檢測(cè)結(jié)果如圖1所示。

在實(shí)驗(yàn)過程中，有一部分分離純化所得細(xì)菌并未檢測(cè)到16S rDNA片段，可能是未成功提取到基因組DNA的原因，后期可再提取DNA，重新擴(kuò)增。

2.3.2測(cè)序統(tǒng)計(jì)結(jié)果

16S rDNA測(cè)序鑒定結(jié)果見表7。

由鑒定結(jié)果可知，在馬桶墊上，比較常見的菌屬為芽孢桿菌屬，其中部分細(xì)菌對(duì)人類健康有不同程度的危害。例如梭形芽孢桿菌可引起腹瀉，嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致低白蛋白血癥，嬰幼兒等免疫力低下人群易感染患??；蠟樣芽孢桿菌可引起嘔吐、腹瀉；雷氏普羅維登斯菌也是馬桶中的主要的細(xì)菌，雖然其引發(fā)的感染十分少見，但其可以引起敗血癥等嚴(yán)重的疾??；松鼠葡萄球菌，可以引起尿道感染、心內(nèi)膜炎、腹膜炎等疾病。

洗手臺(tái)內(nèi)，比較常見的細(xì)菌為蠟樣芽孢桿菌（可引起嘔吐、腹瀉），還有一些芽孢桿菌屬下其它的病原菌。相對(duì)于馬桶而言，洗手臺(tái)表面的病原菌數(shù)量少、致病性弱，但也存在大量引起嘔吐、腹瀉的蠟樣芽胞桿菌。

3討論

本次實(shí)驗(yàn)是在病毒研究所一號(hào)大樓內(nèi)進(jìn)行，選取的采樣地點(diǎn)均是工作人員日常接觸最頻繁的區(qū)域。大樓內(nèi)的衛(wèi)生間有定期的清潔和消毒，但從此次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果中可以看到，即便是清潔后的地方仍然會(huì)存在大量的細(xì)菌，其中還包含有不少病原菌。為了公眾的健康，預(yù)防各類傳染疾病，人們應(yīng)該提高對(duì)公共區(qū)域清潔消毒工作的重視，創(chuàng)造一個(gè)潔凈衛(wèi)生的工作、生活環(huán)境。

任何地方都會(huì)存在著不同程度的微生物污染，它們對(duì)人類最大的影響就是會(huì)引發(fā)各種疾病，所以要做到時(shí)刻注意自己的衛(wèi)生與身體的健康狀況，盡最大可能防止微生物污染對(duì)身體的影響。