王雪偉， 任劍波， 王小怡， 王 博， 高 哲， 郭大瑋

(山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院， 轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心， 山西 太原 030001)

近來(lái)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，人類(lèi)1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框109 (human chromosome 1 open reading frame 109，c1orf109)基因(BmOrfGenBank ID：NM_017850.1)在多種腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，在乳腺癌Hs578T細(xì)胞中，c1orf109的外源性表達(dá)可誘導(dǎo)乳腺癌Hs578T細(xì)胞的增殖。c1orf109啟動(dòng)子區(qū)、CAAT盒和TATA盒是其基礎(chǔ)調(diào)節(jié)的順式作用元件，GC盒在此基礎(chǔ)上抑制c1orf109的轉(zhuǎn)錄。而染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(chromatin immunoprecipitation，ChIP)和凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)均證明GC盒有結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白1(specificity protein 1，Sp1)的位點(diǎn)[1]。許多研究發(fā)現(xiàn)，Myc相關(guān)鋅指蛋白(Myc-associated zinc-finger protein，MAZ)表達(dá)水平異常可以促進(jìn)許多腫瘤生長(zhǎng)及炎癥進(jìn)展過(guò)程[2-6]。亦有文獻(xiàn)報(bào)道MAZ和Sp1常共同參與同一個(gè)基因的表達(dá)調(diào)控，結(jié)合位點(diǎn)序列類(lèi)似，并有重疊或共享結(jié)合位點(diǎn)的情況[7-10]，但也有文獻(xiàn)表明在某些基因的啟動(dòng)區(qū)， Sp1和MAZ只結(jié)合各自的結(jié)合位點(diǎn)[11]。Sp1和MAZ有時(shí)共同激活基因的表達(dá)[8,12-13]，有時(shí)共同抑制基因的表達(dá)，如MAZ基因[7]；而對(duì)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)基因的表達(dá)，Sp1與MAZ的作用相反，前者增強(qiáng)其表達(dá)，后者則抑制其表達(dá)[9]。關(guān)于c1orf109基因，目前尚未見(jiàn)到MAZ及Sp1對(duì)其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的報(bào)道。

材 料 和 方 法

1 主要試劑

THP-1細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心；HeLa細(xì)胞及熒光報(bào)告系統(tǒng)的綠色熒光序列由山西醫(yī)科大學(xué)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心崔永萍教授惠贈(zèng)；DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自Gibco；胎牛血清購(gòu)自天津康源生物技術(shù)有限公司；青、鏈霉素混合液(100×)購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶和化學(xué)發(fā)光法EMSA試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司；EMSA所用探針的寡核苷酸均由Thermo Scientific合成；Biotin-11-dUTP購(gòu)自Thermo Fisher；LipofectamineTM3000 Reagent購(gòu)自Invitrogen；Sp1表達(dá)質(zhì)粒pN3-Sp1FL購(gòu)自Addgene；pReceiver-MAZ表達(dá)質(zhì)粒購(gòu)自Fulengen。

2 主要方法

2.1細(xì)胞培養(yǎng) 對(duì)凍存的THP-1和HeLa細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，THP-1細(xì)胞以含10%胎牛血清與1%青、鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液、HeLa細(xì)胞以含10%胎牛血清與1%青、鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液于37 ℃、5% CO2的條件下常規(guī)培養(yǎng)。

2.2細(xì)胞核蛋白提取 復(fù)蘇的細(xì)胞穩(wěn)定傳2～3代后， 分別取指數(shù)增長(zhǎng)期的THP-1和HeLa細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠媒K濃度為10 mg/L的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激不同的時(shí)間。然后采用細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒分別提取THP-1細(xì)胞和HeLa細(xì)胞的核蛋白，保存于-80 ℃。BCA法進(jìn)行核蛋白定量并利用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。

2.3結(jié)合探針設(shè)計(jì) 據(jù)報(bào)道， MAZ和Sp1結(jié)合序列分別為5’- GGGCGG -3’和5’- GGGAGGG -3’[7]。利用PROMO 3.0.2對(duì)c1orf109基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游-2 500 bp～-1 bp的DNA序列進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)，篩選出其中1段序列c1orf109WT -1 689～-1 670 bp(5’-TTCCCCGCCCTCCCCACCAA-3’)， 合成探針109進(jìn)行EMSA實(shí)驗(yàn)。為了分析Sp1與MAZ結(jié)合點(diǎn)的關(guān)系， 合成突變探針109M:c1orf109WT -1 692～-1 670 bp mutSp1 (5’-TGTTAAAAGCCCTCCCCACCAA-3’)和109S : c1orf109WT -1 692～-1 670 bp mutMAZ(5’-TGTTCCCCGCCCAAAACACCAA-3’)，分別將Sp1結(jié)合點(diǎn)和MAZ結(jié)合點(diǎn)突變。以Her等[11]報(bào)道的mut48探針(5’-GTCTTTGCGGGGGGGAGGGGA-3’)和mut38 探針(5’-GTCTGGGCGGGGTTTAGGGGA-3’)分別作為MAZ和Sp1的陽(yáng)性對(duì)照探針。同時(shí)， 為競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)合成無(wú)關(guān)探針20(已做EMSA實(shí)驗(yàn)無(wú)DNA-蛋白結(jié)合帶)為5’-TCCCAGCAACTGGAGCAGCTTCAT-3’。

2.4EMSA實(shí)驗(yàn) TE緩沖液(pH 8.0)溶解寡核苷酸單鏈后，按末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶說(shuō)明書(shū)配制探針標(biāo)記體系，以獲得生物素標(biāo)記的單鏈寡核苷酸。將互補(bǔ)的寡核苷酸單鏈和PCR Buffer(10×)以9∶9∶2比例混勻，總體積20 μL，95 ℃孵育10 min，室溫2 h退火，獲得生物素標(biāo)記的雙鏈探針， -20 ℃保存?zhèn)溆?。然后配制探針蛋白結(jié)合體系， 室溫結(jié)合20 min，恒壓、I=11～17 mA、TBE緩沖液(0.5×)條件下采用5.5%SDS-PAG進(jìn)行電泳60 min；然后恒流、U=5～11 V條件下半干轉(zhuǎn)膜60 min，轉(zhuǎn)印至帶正電荷尼龍膜上，封閉、洗滌、底物反應(yīng)、暗室曝光。其中Super-shift實(shí)驗(yàn)中，探針、核蛋白及MAZ抗體需4 ℃孵育過(guò)夜。

2.5質(zhì)粒構(gòu)建 利用實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的c1orf109啟動(dòng)子區(qū)驅(qū)動(dòng)的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)報(bào)告載體，此報(bào)告載體(記作109)中EGFP的表達(dá)代表c1orf109蛋白的表達(dá)情況，且為了分析MAZ和Sp1在c1orf109基因啟動(dòng)子區(qū)的活動(dòng)，本實(shí)驗(yàn)利用c1orf109報(bào)告載體中相關(guān)的限制性?xún)?nèi)切酶去掉不同c1orf109啟動(dòng)子區(qū)的一些片段，構(gòu)建含有不同長(zhǎng)度c1orf109啟動(dòng)子區(qū)分析質(zhì)粒表達(dá)載體，切去-1 795～-1 506 bp的質(zhì)粒記作109A，切去-1 795～-918 bp的質(zhì)粒記作109B，切去-918～23 bp的質(zhì)粒記作109C，其啟動(dòng)子區(qū)見(jiàn)圖1。

2.6細(xì)胞轉(zhuǎn)染后激光共聚焦顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)分析 取穩(wěn)定生長(zhǎng)的HeLa細(xì)胞，以2～8×105密度用無(wú)雙抗培養(yǎng)基接種于6孔板，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)12 h后轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染24 h后用激光共聚焦顯微鏡采集圖像，流式細(xì)胞術(shù)分析。 其中分析MAZ及Sp1對(duì)c1orf109的作用時(shí)，用c1orf109啟動(dòng)子區(qū)驅(qū)動(dòng)的EGFP報(bào)告載體與 MAZ表達(dá)質(zhì)粒和Sp1表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，即MAZ和Sp1過(guò)表達(dá)。陰性對(duì)照用共轉(zhuǎn)染同等量的pGL3空表達(dá)載體來(lái)控制。

Figure 1. The schematic diagram ofc1orf109 promoter region.

圖1c1orf109啟動(dòng)子區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)來(lái)表示。應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差(one-way ANOVA)分析，以L(fǎng)SD或Dunnett’s T3法進(jìn)行組間兩兩比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 轉(zhuǎn)錄因子MAZ可與c1orf109啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合，且兩者有共享結(jié)合位點(diǎn)的情況

Her等[11]報(bào)道過(guò)，大鼠的PNMT基因啟動(dòng)子區(qū)有結(jié)合點(diǎn)mut48和mut38，僅分別與MAZ和Sp1結(jié)合。EMSA結(jié)果顯示，c1orf109WT的-1 689 bp～-1 670 bp片段可以結(jié)合來(lái)自于THP-1細(xì)胞核蛋白的轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1，見(jiàn)圖2。

EMSA冷競(jìng)爭(zhēng)結(jié)果顯示，分別用無(wú)關(guān)未標(biāo)探針20，109M探針用量的1 200倍、未標(biāo)陽(yáng)性對(duì)照探針mut48，109M探針用量的300倍、100倍、70倍、40倍來(lái)競(jìng)爭(zhēng)已標(biāo)記的c1orf109M探針結(jié)合蛋白，無(wú)關(guān)未標(biāo)探針未表現(xiàn)出競(jìng)爭(zhēng)作用，而隨未標(biāo)陽(yáng)性對(duì)照探針mut48競(jìng)爭(zhēng)倍數(shù)遞減，其競(jìng)爭(zhēng)探針109M結(jié)合MAZ的作用逐漸減弱；EMSA冷競(jìng)爭(zhēng)結(jié)果顯示，未標(biāo)陽(yáng)性對(duì)照探針mut38，109S探針用量的1 200倍，對(duì)已標(biāo)探針109M結(jié)合THP-1核蛋白有明顯的競(jìng)爭(zhēng)作用，突變掉Sp1結(jié)合點(diǎn)的探針109M也可結(jié)合Sp1，見(jiàn)圖2。

Figure 2. The probe 109, mutation probe 109M and 109S combined with MAZ and Sp1 from the nuclear proteins of cells were analyzed by EMSA.

圖2探針109及其突變探針109M和109S與細(xì)胞核提取物中的MAZ、Sp1結(jié)合的EMSA實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Super-shift結(jié)果顯示，探針109M，加HeLa細(xì)胞核蛋白及MAZ抗體后均有明顯的超遷移條帶；探針109S，加HeLa細(xì)胞核蛋白及MAZ抗體后也有明顯的超遷移條帶；c1orf109啟動(dòng)子區(qū)可結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子MAZ，且在c1orf109WT -1 689 bp～-1 670 bp上MAZ和Sp1兩者共享結(jié)合位點(diǎn)，見(jiàn)圖2。

2 轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1抑制c1orf109基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)

為了分析MAZ和Sp1在c1orf109基因啟動(dòng)子區(qū)的活動(dòng)，本實(shí)驗(yàn)用含不同長(zhǎng)度的c1orf109啟動(dòng)子區(qū)的c1orf109報(bào)道載體和0.5 μg的MAZ或Sp1表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，24 h后采用激光共聚焦顯微鏡觀察和流式細(xì)胞術(shù)分析，其中流式細(xì)胞術(shù)分析以EGFP的平均熒光強(qiáng)度值來(lái)評(píng)估c1orf109基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況。激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1后， EGFP表達(dá)減少，且過(guò)表達(dá)Sp1組的表達(dá)量減少更明顯。轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1抑制c1orf109基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，且Sp1的抑制作用明顯大于MAZ；去MAZ和Sp1的結(jié)合點(diǎn)后，過(guò)表達(dá)MAZ和Sp1后EGFP表達(dá)量也相應(yīng)減少，見(jiàn)圖3。

Figure 3. The confocal scanning microscopic observation results of transcription factor MAZ and Sp1 repressing the expression ofc1orf109invitro(×400).

圖3在體外實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1抑制c1orf109基因表達(dá)的激光共聚焦顯微成像觀察結(jié)果

對(duì)于c1orf109的所有表達(dá)載體，流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果所示，過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1后EGFP光蛋白表達(dá)減少，且過(guò)表達(dá)Sp1組的表達(dá)量減少更明顯。轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1抑制c1orf109基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，且明顯Sp1的抑制作用大于MAZ；去MAZ和Sp1的結(jié)合點(diǎn)后，過(guò)表達(dá)MAZ和Sp1后，EGFP表達(dá)量也相應(yīng)減少，與激光共聚焦顯微鏡分析結(jié)果相一致。MAZ和Sp1的抑制作用不僅僅只依靠與c1orf109啟動(dòng)子區(qū)的直接結(jié)合，見(jiàn)圖4。

Figure 4. The results of flow cytometry analysis that transcription factor MAZ and Sp1 repressed the expression ofc1orf109invitro. Mean±SD.n=3.*P<0.05，**P<0.01vspN3-Sp1 group;#P<0.05vsempty expression vector group.

圖4流式細(xì)胞術(shù)分析體外實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1抑制c1orf109轉(zhuǎn)錄表達(dá)的結(jié)果

討 論

1 轉(zhuǎn)錄因子MAZ與c1orf109啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合

Liu等[1]報(bào)道，c1orf109啟動(dòng)子區(qū)，CAAT盒和TATA盒是基礎(chǔ)調(diào)節(jié)的順式作用元件，GC盒在此基礎(chǔ)上抑制c1orf109的轉(zhuǎn)錄，并證明GC盒有結(jié)合Sp1的位點(diǎn)。但目前并未有人報(bào)道轉(zhuǎn)錄因子MAZ可以與c1orf109啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。MAZ是一種作用較廣泛的轉(zhuǎn)錄因子，研究發(fā)現(xiàn)MAZ表達(dá)水平異常可以促進(jìn)許多腫瘤生長(zhǎng)及炎癥進(jìn)展過(guò)程，是癌癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中十分重要的影響因子之一[2-6]，而c1orf109基因在多種腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，如在乳腺癌Hs578T細(xì)胞中，c1orf109的外源性表達(dá)誘導(dǎo)乳腺癌Hs578T細(xì)胞的增殖[1, 14]；且據(jù)報(bào)道 Spl和MAZ常參與同一個(gè)基因的表達(dá)調(diào)控[8-14]。綜上所述， 本文通過(guò)PROMO軟件預(yù)測(cè)c1orf109基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游-2 500 bp～-1 bp的DNA序列與MAZ的結(jié)合位點(diǎn)，合成相關(guān)結(jié)合探針與HeLa細(xì)胞核提取物孵育并經(jīng)EMSA分析顯示轉(zhuǎn)錄因子MAZ可與c1orf109啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。

2 轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1結(jié)合位點(diǎn)的關(guān)系

MAZ和Sp1的結(jié)合序列分別為5’-GGGCGG-3’ 和 5’-GGGAGGG-3’，序列非常相似，已有報(bào)道在MAZ基因[7]、HTlAr基因[8]、eNOS基因[9]、PNMT基因[10]和PTHr基因[12-13]上，MAZ與Sp1的結(jié)合位點(diǎn)有重疊，甚至兩者的結(jié)合點(diǎn)共享；但亦有報(bào)道在大鼠的PNMT基因[11]上MAZ和Sp1與它們各自的結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合是相互獨(dú)立的。為了進(jìn)一步分析在c1orf109基因的啟動(dòng)子區(qū)兩者的結(jié)合關(guān)系，本文分別用突變此結(jié)合位點(diǎn)MAZ點(diǎn)和Sp1點(diǎn)的相關(guān)生物素標(biāo)記探針109S、109M與未標(biāo)相關(guān)的陽(yáng)性對(duì)照探針競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合THP-1細(xì)胞核蛋白， EMSA分析結(jié)果顯示，突變Sp1結(jié)合位點(diǎn)的探針109M也既可以結(jié)合MAZ也可結(jié)合Sp1。Super-shift結(jié)果示，探針109S也可結(jié)合MAZ。提示在c1orf109啟動(dòng)子區(qū)轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1兩者有共享結(jié)合位點(diǎn)的情況。

3 MAZ與Sp1對(duì)c1orf109的復(fù)雜調(diào)節(jié)機(jī)制

據(jù)報(bào)道，MAZ和Sp1介導(dǎo)的對(duì)MAZ基因的抑制作用是相互獨(dú)立的，組蛋白的去乙?；竻⑴cMAZ的抑制作用，但在Sp1的抑制作用中卻招募DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1。因此推測(cè)看家基因的下調(diào)可能由結(jié)合MAZ和Sp1后招募不同的抑制子來(lái)完成[15]。本實(shí)驗(yàn)用限制性?xún)?nèi)切酶去不同的c1orf109啟動(dòng)子區(qū)的一些片段構(gòu)建含有不同長(zhǎng)度啟動(dòng)子區(qū)c1orf109分析質(zhì)粒表達(dá)載體的109A、109B、109C來(lái)進(jìn)一步分析Sp1和MAZ在c1orf109啟動(dòng)子區(qū)的活動(dòng)。經(jīng)體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)、激光共聚焦顯微鏡觀察和流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示，截掉了MAZ和Sp1的結(jié)合位點(diǎn)后，過(guò)表達(dá)MAZ和Sp1對(duì)c1orf109的表達(dá)仍有抑制作用。綜上提示MAZ和Sp1不僅只通過(guò)直接結(jié)合c1orf109啟動(dòng)子區(qū)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)c1orf109基因的調(diào)控，可能還招募其它的轉(zhuǎn)錄因子來(lái)參與對(duì)c1orf109的抑制, 由轉(zhuǎn)錄因子Sp1 和MAZ介導(dǎo)的分子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)c1orf109轉(zhuǎn)錄表達(dá)的抑制調(diào)控很重要，并且這種分子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)機(jī)制可能很復(fù)雜；轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1的復(fù)雜調(diào)節(jié)在遺傳學(xué)上有重要意義，進(jìn)而影響生物的生理進(jìn)程。

4 轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1的調(diào)節(jié)作用對(duì)c1orf109的表達(dá)有重要意義

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道， 轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1對(duì)基因表達(dá)調(diào)節(jié)的作用不盡相同。本文用構(gòu)建的由c1orf109啟動(dòng)子區(qū)驅(qū)動(dòng)的綠色熒光報(bào)告質(zhì)粒與MAZ或Sp1表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞24 h后，激光共聚焦顯微鏡觀察及流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示，MAZ和Sp1均對(duì)c1orf109基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)有明顯的抑制作用，并且Sp1的抑制作用更強(qiáng)。根據(jù)報(bào)道，2種及以上的轉(zhuǎn)錄因子對(duì)基因的同一方向的調(diào)節(jié)這種功能性冗余概念已多次被提出，這種冗余調(diào)節(jié)對(duì)于相關(guān)基因的表達(dá)很重要，且細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的功能冗余性和遺傳冗余性是生物進(jìn)化、生物復(fù)雜性和多樣性的基礎(chǔ)，有重要的理論意義和實(shí)際意義，應(yīng)該深入研究[16]。如轉(zhuǎn)錄因子E2F家族表現(xiàn)有功能冗余性調(diào)節(jié)，在正常和腫瘤細(xì)胞中與染色質(zhì)結(jié)合的E2F家族可能是活性轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的路標(biāo)[17]。Snail家族是經(jīng)典的轉(zhuǎn)錄抑制子，在淋巴細(xì)胞的發(fā)育中轉(zhuǎn)錄因子Snail家族扮演重要角色，SNAI2和SNAI3的消除對(duì)影響成熟T細(xì)胞和B細(xì)胞的產(chǎn)生有重要作用[18]。在早期發(fā)展和細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化中，MAZ和Sp1及SP其它家族成員存在功能性冗余，且由Sp1家庭的轉(zhuǎn)錄因子(Sp1和Sp3)和MAZ介導(dǎo)的染色質(zhì)修飾和染色質(zhì)重塑的分子網(wǎng)絡(luò)機(jī)制，是未來(lái)了解富含GC啟動(dòng)子的基因表達(dá)的關(guān)鍵[19]。而在c1orf109基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)調(diào)控中，MAZ和Sp1共同抑制其表達(dá)的這種冗余機(jī)制提示MAZ和Sp1對(duì)c1orf109的抑制調(diào)控對(duì)c1orf109基因表達(dá)有重要意義。c1orf109基因表達(dá)對(duì)機(jī)體的相關(guān)生命活動(dòng)可能也有重要意義。據(jù)報(bào)道，c1orf109基因本身在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)，如在乳腺癌Hs578T細(xì)胞中，c1orf109的外源性表達(dá)誘導(dǎo)乳腺癌Hs578T細(xì)胞的增殖；且c1orf109基因還是CK2激酶的底物之一[1]，新的證據(jù)表明，被檢測(cè)的所有癌癥中CK2激酶表達(dá)上調(diào)[20-21]；因此，c1orf109基因與癌癥有著不可忽略的聯(lián)系，提示轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1對(duì)c1orf109的重要調(diào)節(jié)作用，可能對(duì)與c1orf109表達(dá)異常相關(guān)癌癥的病理生理過(guò)程有重要意義。

總之，本實(shí)驗(yàn)首次報(bào)道c1orf109啟動(dòng)子區(qū)可以結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子MAZ，并且發(fā)現(xiàn)MAZ和Sp1有共享結(jié)合位點(diǎn)的現(xiàn)象；轉(zhuǎn)錄因子MAZ及Sp1共同抑制c1orf109的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，且Sp1的抑制作用強(qiáng)于MAZ；MAZ和Sp1不僅只通過(guò)結(jié)合c1orf109啟動(dòng)子區(qū)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)c1orf109基因的調(diào)控，可能還招募其它的轉(zhuǎn)錄因子來(lái)參與對(duì)c1orf109的抑制；綜上所述轉(zhuǎn)錄因子MAZ和Sp1的復(fù)雜調(diào)節(jié)及作用方向一致的冗余調(diào)節(jié)在遺傳學(xué)上有重要意義，進(jìn)而影響生物的生理進(jìn)程。

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