王樹(shù)森（天津市第一中心醫(yī)院移植中心細(xì)胞移植科，衛(wèi)生部危重病急救醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300192）

胰腺在低溫低壓下原位灌注UW器官保存液后0～4℃保存，在最短的時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)移至GMP實(shí)驗(yàn)室，胰腺經(jīng)過(guò)消毒、修剪后插管灌入膠原酶，緩慢逐漸加壓灌注直至胰腺組織充分膨脹。將灌注好的胰腺組織切成8～12塊后轉(zhuǎn)移至450 ml或600 ml的Ricordi消化罐中，迅速升溫至37℃后機(jī)械震蕩同時(shí)每分鐘抽取組織，進(jìn)行雙硫腙染色，顯微鏡下觀察胰島分離情況，當(dāng)胰島與外分泌組織充分分離時(shí)，終止消化，迅速灌入4℃1640溶液，并將組織液收集至自配的緩沖溶液中。組織液離心洗滌2～3次后，依據(jù)IEQ計(jì)數(shù)（一個(gè)直徑150 μm的胰島為一個(gè)胰島當(dāng)量）。將消化后的胰島置于UW液中靜止30分鐘以上，然后在COBE2991血細(xì)胞淘洗機(jī)上以連續(xù)密度梯度離心法純化胰島，根據(jù)每管中胰島細(xì)胞的純度將其分為高純度、中等純度和低純度。離心后，進(jìn)行雙人計(jì)數(shù)，對(duì)胰島大小、碎片、密度及形態(tài)進(jìn)行量化評(píng)分，估算培養(yǎng)瓶數(shù)量，并置于5% CO2培養(yǎng)箱22℃培養(yǎng)移植。