李曉艷， 努爾麥麥提·阿卜力孜， 孫 蓮

(新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院， 烏魯木齊 830011)

桑枝(RamulusMori) 是?？浦参锷?MorusalbaL.)的干燥嫩枝，其藥用價值極高，具有祛風(fēng)活絡(luò)、通利關(guān)節(jié)、燥濕利水之功效[1]。研究表明桑枝中主要含有多糖、生物堿、黃酮和氨基酸等成分[2-10]，具有良好的降血糖、降血脂、抗菌消炎、提高機體免疫力等生物活性和生理活性作用，主要用于治療糖尿病、高血脂等疾病[11-14]。本研究采用薄層層析法(TLC)對桑枝中氨基酸成分進行定性分離鑒別，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器Linomat-5 型半自動點樣儀(德國CAMAG公司)，REPROSTAR-3型薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)(德國CAMAG公司)，AL204型電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)，KQ-700DE型超聲波提取儀(昆山市超聲儀器有限公司)，TDL-40B型離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)，SHB-Ш 型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)，DHG-9245A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)。

1.2試劑硅膠G板、高效硅膠G板、硅膠GF254板、硅膠H板(青島海洋化工廠)，聚酰胺薄膜(浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠)，精氨酸、纈氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蘇氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、胱氨酸、酪氨酸、絲氨酸對照品(北京博奧拓達科技有限公司)，茚三酮(天津永晟精細化工有限公司)，正丁醇、冰醋酸(天津市富宇精細化工有限公司)。

1.3藥材桑枝樣品采自新疆10個不同地區(qū)(喀什市、和田市、庫爾勒市、阿克蘇市、和田縣、疏勒縣、沙雅縣、莎車縣、洛浦縣、庫爾勒恰爾巴格鄉(xiāng))，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院天然藥物教研室帕麗達·阿布力孜教授鑒定為桑科植物桑(MorusalbaL.)的枝。采集的新鮮桑枝切成小段，粉碎后在60～70℃烘干，然后過40目篩，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1供試品溶液的制備稱取干燥的桑枝粉末2.0 g，置于錐形瓶中，加50 mL蒸餾水，超聲提取30 min，抽濾, 將濾液蒸餾濃縮，10 000 r/min離心10 min, 蒸餾水定容至10 mL,即得。

2.2對照品溶液的制備

2.2.1 氨基酸對照品溶液的制備 稱取“1.2”項下所述13種氨基酸對照品各100 mg，分別用蒸餾水溶解定容至100 mL，制得濃度為1.0 mg/mL的13種氨基酸對照品溶液。

2.2.2 混合氨基酸對照品溶液的制備 稱取纈氨酸、精氨酸，蘇氨酸對照品各100 mg，加蒸餾水溶解并定容至100 mL，即得。

2.3薄層色譜條件的考察

2.3.1 展開系統(tǒng)的選擇 將2 μL的混合氨基酸對照品溶液和3 μL的供試品溶液，在同一硅膠G薄層板上點樣，分別用0.2%茚三酮的正丁醇-冰醋酸-水 (4∶2.2∶3)、正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5 )、正丁醇-冰醋酸-水(4∶3∶1),正丁醇-冰醋酸-水(4∶2.2∶1) ，正丁醇-冰醋酸-水(6∶2.2∶1) 5種不同展開系統(tǒng)展開，取出晾干后，105 ℃加熱顯色至斑點清晰，根據(jù)斑點的分離及拖尾情況確定正丁醇-冰醋酸-水(6∶2.2∶1)為最佳展開系統(tǒng)，見圖1。

1:混合對照品溶液;2:樣品溶液;A:正丁醇- 冰醋酸-水(4∶1 ∶5);B:正丁醇- 冰醋酸-水 (6∶2.2∶1);C:正丁醇- 冰醋酸-水(4∶2.2∶1);D:正丁醇-冰醋酸-水 (4∶3∶1);E:正醇-冰醋酸- 水 (4∶2.2∶3)

圖1不同展開系統(tǒng)的桑枝TLC圖

2.3.2 點樣量的選擇 分別將混合氨基酸對照品溶液和供試品溶液1、2、3、4、5、6 μL，點于同一硅膠G薄層板上，用含0.2%茚三酮的正丁醇-冰醋酸-水(6∶2.2∶1)為展開系統(tǒng)展開，取出晾干后，105℃加熱顯色至斑點清晰。由斑點的分離度情況可知，混合氨基酸對照品溶液和供試品溶液的最佳點樣量分別是2 μL和3 μL，見圖2。

(1～6依次為：對照品溶液1、2、3、4、5、6 μL，7～12依次為：供試品溶液1、2、3、4、5、6 μL)

圖2不同點樣量的桑枝薄層色譜圖

2.3.3不同薄層板的考察將供試品溶液3 μL 及混合對照品溶液2 μL點于不同的薄層板：硅膠G板、高效硅膠G板、硅膠GF254板、硅膠H板、聚酰胺薄膜，并分別用0.2%茚三酮的正丁醇-冰醋酸-水(6∶2.2∶1)展開劑展開，取出晾干，105℃加熱顯色至斑點清晰，由斑點的拖尾情況和分離度情況可知，硅膠G板上的效果最好，見圖3。

2.4氨基酸的定性分析分別將2 μL的13種對照品溶液和3 μL的供試品溶液，點于同一硅膠G薄層板上，用含0.2%茚三酮的正丁醇-冰醋酸-水(6∶2.2∶1) 展開劑展開，取出晾干，105℃加熱顯色至斑點清晰，桑枝提取物出現(xiàn)6個斑點，其中3個斑點的顏色和位置分別與精氨酸、纈氨酸和蘇氨酸對照品的一致，且具有相同的Rf值(Rf1=0.16，Rf3,=0.57，Rf4=0.43)，見圖4。

(A:硅膠G板;B:高效G板;C:H板; D:GF254板; E:聚酰胺薄膜; 1:對照品;2:樣品)

圖3不同薄層板的桑枝TLC圖

(0:樣品;1:精氨酸;2:賴氨酸;3:纈氨酸;4:蘇氨酸;5:苯丙氨酸;6:色氨酸;7:谷氨酸;8:天冬氨酸;9:胱氨酸;10:甘氨酸;11:絲氨酸;12:酪氨酸;13:亮氨酸)

圖4桑枝中氨基酸的TLC圖

2.5新疆10個不同產(chǎn)地桑枝中氨基酸的薄層鑒別分別吸取不同產(chǎn)地的桑枝供試品溶液3 μL和混合氨基酸對照品溶液2 μL，在同一硅膠G薄層板上點樣，用0.2%茚三酮的正丁醇-冰醋酸-水 ( 6∶2.2∶1) 展開劑展開，取出晾干，105℃加熱顯色至斑點清晰，在新疆10個不同產(chǎn)地的桑枝供試品的薄層圖譜中，在與對照品精氨酸、纈氨酸、蘇氨酸的相同位置上，均能顯現(xiàn)顏色相同的斑點，見圖5。

(1:喀什市;2:和田市;3:庫爾勒市;4:阿克蘇市;5:和田縣;6:疏勒縣;7:沙雅縣;8:莎車縣;9:洛浦縣;10:庫爾勒恰爾巴格鄉(xiāng))

圖5不同產(chǎn)地桑枝的TLC圖

3 討論

本研究對不同的展開劑、點樣量及薄層板對桑枝中精氨酸、蘇氨酸和纈氨酸的TLC分離的影響進行研究，選擇出最佳薄層分離條件為：以正丁醇-冰乙酸-水(6∶2.2∶1)為展開系統(tǒng)，茚三酮為顯色劑，混合氨基酸對照品溶液和供試品溶液的點樣量分別是2 μL和3 μL，于硅膠G薄層板上分離。結(jié)果對照品與樣品Rf值相同，斑點清晰，分離度高。此外薄層色譜圖中還有3個斑點不能確定其歸屬，還需進一步研究。試驗中對薄層色譜的顯色程序進行了優(yōu)化，直接將茚三酮顯色劑加入到展開劑中，展開完畢后，加熱顯色。該方法省去了噴霧顯色的程序，具有操作簡單，薄層面光滑完整，氨基酸斑點顯色均勻，Rf值不變等優(yōu)點。

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