李愛(ài)珍

（江西省黎川縣人民醫(yī)院藥劑科，江西 黎川 344600）

升麻別名龍眼根、窟窿牙根和周麻，屬毛莨科植物大三葉升麻、興安升麻或升麻的干燥根莖，歸于肺、脾、胃、大腸經(jīng)，有發(fā)表透疹、清熱解毒、升陽(yáng)舉陷的功效，常用于治療頭痛寒熱、喉痛、口瘡、子宮下墜等病癥。異阿魏酸作為升麻的主要活性成分，有消炎、止痛、退熱的效用，以往醫(yī)者常以異阿魏酸含量評(píng)定升麻質(zhì)量及藥效，隨著臨床研究深入，醫(yī)者發(fā)現(xiàn)不同炮制方法會(huì)影響升麻中異阿魏酸含量進(jìn)而影響藥物功效及臨床治療效果[1-2]。本文運(yùn)用HPLC法測(cè)定不同炮制方法對(duì)升麻中異阿魏酸含量的影響，進(jìn)而為后續(xù)臨床用藥提供參考。

1 儀器與藥品

1.1 儀器 安捷倫1260Ⅱ高效液相色譜儀，安捷倫四元泵1200系列，紫外吸收檢測(cè)器Agilent1100，高效液相色譜柱溫箱，安捷倫色譜柱ZORBAX Eclipse Plus C18，中草藥高速粉碎機(jī)RT-02B，Precisa 321XJ系列電子天平。

1.2 藥品 本次研究所用升麻樣品從上海扶生實(shí)業(yè)有限公司購(gòu)進(jìn)，3種炮制品均選用同批次升麻樣品所制；選擇上海士鋒生物科技有限公司生產(chǎn)的異阿魏酸（產(chǎn)品型號(hào)：B100054；CAS號(hào)：537-73-5；規(guī)格：標(biāo)準(zhǔn)品，98%；包裝20 mg）作為對(duì)照品；同時(shí)購(gòu)進(jìn)甲醇和乙腈作為色譜純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 不同炮制方法酒升麻和醋升麻樣品炮制方法相同，具體操作如下：分別選取2份100 g升麻樣品將其放置于不同陶瓷鍋內(nèi)，精取20 mL米醋和黃酒緩慢倒入陶瓷鍋內(nèi)攪拌均勻后封蓋靜置4 h，之后將配制的天麻放于炒鍋內(nèi)小火炒干取出晾涼備用。

升麻炭制作：取100 g升麻樣品放于炒鍋內(nèi)大火炒至升麻表面焦黑，灑水后待火星燃盡取出曬干備用。所有炮制工作均由同一工作人員完成，分別炮制2份酒升麻、醋升麻及升麻炭，以保證后續(xù)操作的科學(xué)性及嚴(yán)謹(jǐn)性。

2.2 對(duì)照品及供試品溶液制作 對(duì)照品溶液制備：精取異阿魏酸1 mg將其放于量瓶?jī)?nèi)加入適量10%乙醇混合配制19.64μg/mL對(duì)照品溶液待用。

供試品溶液制備：精取0.5 g升麻粉末加入25 mL 10%乙醇靜置于錐形瓶?jī)?nèi)塞緊瓶塞后稱重，加熱2.5 h自然冷卻后稱重，并添加少許乙醇以補(bǔ)充加熱及冷卻失去的溶液，過(guò)濾出溶液中的天麻后備用。

2.3 色譜條件 色譜柱：選用Diamonsil C18（150 mm×4.60 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.01%磷酸溶液（13∶87）；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：315 mm；理論塔板數(shù)：5000。

2.4 線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性考察 線性關(guān)系：精取對(duì)照品5、15、30μL，運(yùn)用色譜條件測(cè)定異阿魏酸含量并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)分析面積和異阿魏酸濃度測(cè)定線性回歸關(guān)系，進(jìn)而分析峰面積與藥物濃度的關(guān)系，本次研究結(jié)果顯示異阿魏酸含量在0.098～0.982μg呈線性關(guān)系。

精密度：精取5μg對(duì)照品連續(xù)測(cè)定5次，計(jì)算發(fā)現(xiàn)RSD=0.27%（n=5），即具有良好精密度。

穩(wěn)定性：精取5μg供試品立即測(cè)定峰面積并于1、3、6、12 h再次測(cè)定峰面積，發(fā)現(xiàn)RSD=2.00%（n=4），證實(shí)供試品均具有良好穩(wěn)定性，可用于后續(xù)研究。

重復(fù)性：分別精取5份5μg升麻樣品嚴(yán)格按照供試品溶液制作方法配制溶液并測(cè)定所制樣品溶液中異阿魏酸含量，實(shí)踐發(fā)現(xiàn)所制備供試品溶液平均異阿魏酸含量為2.79μg/mg，RSD=1.70%（n=5），證實(shí)制作供試品溶液具有良好重復(fù)性。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn) 分別選取3份已測(cè)定異阿魏酸含量的20 mg升麻炭、20 mg醋升麻、20 mg酒升麻，按照供試品溶液制備方法制作供試品，制備完成后分別取10μL樣品測(cè)定溶液內(nèi)含有異阿魏酸含量，與對(duì)照品溶液內(nèi)異阿魏酸含量對(duì)比計(jì)算回收率發(fā)現(xiàn)其回收率分別為99.6%，RSD=1.90%（n=3）；101.2%，RSD=1.93%（n=3）；100.5%，RSD=1.91%（n=3）。

2.6 樣品中異阿魏酸含量測(cè)定 精取10μL對(duì)照品和供試品溶液運(yùn)用安捷倫1260Ⅱ高效液相色譜儀于相同色譜條件下測(cè)定對(duì)照品和供試品溶液中異阿魏酸含量。本次研究所有測(cè)定結(jié)果均一式兩份，以保證研究的科學(xué)性及可行性。

3 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，升麻生品中異阿魏酸測(cè)定含量為0.24%，酒升麻中異阿魏酸測(cè)定含量0.27%，醋升麻中異阿魏酸測(cè)定含量0.31%，升麻炭中異阿魏酸測(cè)定含量為0.41%，即阿魏酸含量升麻生品〈酒升麻〈醋升麻〈升麻炭。

4 討論

升麻始載于《名醫(yī)別錄》，作為臨床常用中藥材，根據(jù)產(chǎn)地分布可分為關(guān)升麻、興安升麻、川升麻，多于秋季采挖根莖，去除泥沙，曬至八九成干后去須根即可用以臨床醫(yī)療。研究發(fā)現(xiàn)，升麻中含有有機(jī)酸類、三萜類及呋喃色原酮類等物質(zhì)，異阿魏酸作為升麻中有機(jī)酸重要組成部分，其含量直接影響升麻藥物活性，近年有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)不同炮制方法直接影響升麻制品中異阿魏酸含量及其藥物功效，筆者分析升麻生品、酒升麻、醋升麻和升麻炭中異阿魏酸含量發(fā)現(xiàn)，升麻生品〈酒升麻〈醋升麻〈升麻炭，即升麻炭中異阿魏酸含量最高，而升麻生品中異阿魏酸含量最低，證實(shí)不同炮制方法會(huì)影響異阿魏酸含量。

升麻可有效抗擊結(jié)核桿菌、金黃色葡萄球菌、卡他球菌，升麻提取物有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗驚厥、抑制血小板聚集的功效，同時(shí)可抑制氯乙酰膽堿、組織胺和氯化鋇誘發(fā)的腸管痙攣，降低血壓，減緩心率，該藥中含有的異阿魏酸在抗炎、解毒、鎮(zhèn)痛中具有良好效用，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)異阿魏酸多以化合物形式存在，在炮制過(guò)程中易水解，進(jìn)而影響藥物中異阿魏酸含量。異阿魏酸別名3-羥基-4-甲氧基肉桂酸，作為無(wú)色晶體，多從毛莨科植物三大升麻、興安升麻、升麻干燥根莖中提取所得，需避光低溫保存，若長(zhǎng)期暴露于空氣中會(huì)降低藥物含量，同時(shí)該品具有良好降血糖效果，當(dāng)前醫(yī)者提煉該藥物并將其應(yīng)用于糖尿病患者的治療中，取得良好療效。

HPLC法較之傳統(tǒng)液相色譜法簡(jiǎn)便易操作且具有良好穩(wěn)定性，筆者借助反相高效液相色譜法可快速測(cè)定樣品中異阿魏酸含量，有學(xué)者指出HPLC法分離測(cè)定藥物含量?jī)H需30 min即可，可有效縮短測(cè)定時(shí)間，獲取準(zhǔn)確數(shù)據(jù)[3]。馬桂娟[4]用固相萃取HPLC法測(cè)定保健食品中阿魏酸含量，以最大程度發(fā)揮其簡(jiǎn)便、高效、便捷、精準(zhǔn)的優(yōu)勢(shì)。李洋[5]運(yùn)用反相高效液相色譜法測(cè)定不同炮制方法對(duì)升麻中異阿魏酸含量的影響，證實(shí)不同炮制方法會(huì)影響升麻樣品中異阿魏酸含量?？傊?，不同炮制方法會(huì)影響升麻中異阿魏酸含量。