文曉飛　馬慶慶

摘要 目的：探討遵義地區(qū)苗族、仡佬族與漢族慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布特點(diǎn)。方法：采用PCR-反向斑點(diǎn)雜交方法，對(duì)遵義地區(qū)的苗族、仡佬族與漢族慢性乙肝HBVDNA陽(yáng)性患者165例進(jìn)行HBV基因分型。結(jié)果：苗族、仡佬族各40例，80例患者的基因型分別為B型55例（68.7%），C型23例（28.8），BC混合型2例（2.5%）；漢族85例，基因型分別為B型57例（67.1%），C型25例（29.4%），Bc混合型3例（3.5%）。結(jié)論：HBV的3種基因型在遵義地區(qū)苗族、仡佬族與漢族中總體分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩者B型都占有絕對(duì)優(yōu)勢(shì)；C型基因在乙肝肝硬化、肝癌中的發(fā)病率高于B型基因。

關(guān)鍵詞 乙型肝炎病毒；基因型；苗族；仡佬族；漢族

慢性乙型肝炎感染者伴有乙肝病毒活動(dòng)性復(fù)制是發(fā)展成為進(jìn)展性肝?。ㄈ绺斡不⒏伟┑闹匾嚓P(guān)因素。本試驗(yàn)采用熒光PCR法檢測(cè)乙型肝炎病毒基因型，以了解遵義地區(qū)苗族、仡佬族與漢族HBV基因型分布情況，以及HBV基因型與臨床的關(guān)系。

資料與方法

2015年4月-2017年4月采集貴州航天醫(yī)院門診和住院慢性乙肝患者，成功進(jìn)行基因分型165例。其中苗族、仡佬族各40例，合計(jì)80例；男64例，年齡13～75歲，平均（40.6±13.7）歲；女16例，年齡15～66歲，平均（39.4±12.8）歲。漢族85例，男67例，年齡16～76歲，平均（42.5±14.6）歲；女18例，年齡14～68歲，平均（41.7±13.2）。均符合《傳染病學(xué)》慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。

主要試劑及儀器：HBV核酸PCR，HBV基因分型亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司PCR和DNA反向點(diǎn)雜交。

檢測(cè)方法：乙肝5項(xiàng)檢測(cè)、HBV標(biāo)記物檢測(cè)，嚴(yán)格采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析技術(shù)進(jìn)行操作。①HBV基因分型采用PCR和DNA反向點(diǎn)雜交：設(shè)計(jì)特異的PCR引物擴(kuò)增獲得HBV基因片段，該片段包含了所要檢測(cè)的基因型。通過PCR產(chǎn)物與設(shè)計(jì)的探針進(jìn)行特異性雜交，根據(jù)膜條特定位置顯色（藍(lán)色1與否來判斷HBV的基因型。②基因分型結(jié)果判讀：本試劑以顯色與否來進(jìn)行判斷，基因分型陣列位點(diǎn)HBV-B顯色，表明感染B基因型；以此類推為感染c基因型、D基因型；上述陣列位點(diǎn)≥2個(gè)顯色，表明混合感染對(duì)應(yīng)的基因型。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件處理，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

HBV分型結(jié)果：共獲得分型結(jié)果165例。在165標(biāo)本中，分別統(tǒng)計(jì)苗族、仡佬族與漢族男、女性各基因型，結(jié)果表明：B型、C型、BC混合型，無論在苗族、仡佬族與漢族中，男性所占比例均高于女性，兩者基因型在性別上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。將所檢測(cè)的患者年齡劃分為<30歲、30～50歲和>50歲3個(gè)時(shí)段，在165例標(biāo)本中，在<30歲的年齡段中，39例標(biāo)本中B型所占比例27/39；在30～50歲的年齡段中，89例標(biāo)本中B型所占比例60/89；>50歲的年齡段中，37例標(biāo)本中B型所占比例25/37。無論處于哪個(gè)年齡段，HBV基因分型均為B型居多。不同年齡段少數(shù)民族、漢族HBV各基因型分布情況中，發(fā)現(xiàn)年齡段在兩者間的分別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

遵義地區(qū)乙肝病毒感染者的HBV基因型與臨床疾病譜的關(guān)聯(lián)性：隨著疾病的發(fā)展，B型和C型在慢性肝炎乙型肝炎與乙肝肝硬化兩疾病間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x²=4.850，P=0.028<0.05）；B型和C型在慢性乙型肝炎與原發(fā)性肝癌兩疾病間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x²=3.954，P=0.047<0.05），表2。

討論

慢性乙型肝炎是我國(guó)危害最嚴(yán)重的一種傳染性疾病，全球因感染HBV導(dǎo)致肝衰、肝硬化、肝癌及并發(fā)癥而死亡的總?cè)藬?shù)高達(dá)57.6%。因此對(duì)HBV基因的研究顯得非常重要。HBV基因分為A、B、C、D、E、F、G、H、I等9個(gè)基因型。同一基因型又被進(jìn)一步分為不同的亞型。

本研究在165例HBV感染人群中，HBV基因分型以B基因型占多數(shù)，C基因型次之，同時(shí)有部分B基因型和c基因型混合感染，與丁靜娟等研究貴州地區(qū)HBV基因型由B、C2型構(gòu)成，且以B基因型為主，苗族患者中B型占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的基因型相符合。成功分型165例HBV感染者樣本中，苗族、仡佬族各40例，合計(jì)80例。通過對(duì)不同性別、不同年齡組HBV感染者的基因型比較，顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明性別、年齡與基因型無相關(guān)性。隨著疾病的發(fā)展，C基因型在肝硬化和原發(fā)性肝癌中所占比例增加，c型有49例，其中乙型肝炎30例（61.2%），乙肝肝硬化14例（28.6%），原發(fā)性肝癌5例（10.2%），與B型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。目前普遍認(rèn)為C型引起的炎性壞死及纖維化程度比B型更加嚴(yán)重，且C型與肝硬化和肝癌的關(guān)系更為密切，基因型c的累積生存率明顯低于B型。

貴州遵義地區(qū)苗族、仡佬族自古以來就是一個(gè)不斷向西大遷徙、進(jìn)入云貴高原的民族，交通的改善、與漢族之間的文化交流、生活習(xí)慣的改變，與漢族通婚，使不同源人群在相同環(huán)境條件下，可以朝相同方向演化而形成趨同的體質(zhì)特征。本研究對(duì)貴州遵義地區(qū)少數(shù)民族病毒基因型的分布及特點(diǎn)做研究，為遵義地區(qū)根據(jù)不同基因型、不同年齡段采取不同的乙肝防治策略措施提供了依據(jù)。endprint