一種新的對(duì)1-H-1,2,4-三氮唑的高效液相色譜定量分析方法

(四川省化學(xué)工業(yè)研究設(shè)計(jì)院，四川成都，610041)

1-H-1,2,4-三氮唑是一種含氮雜環(huán)化合物，作為染料、醫(yī)藥、農(nóng)藥工業(yè)的重要中間體，在多種化工合成工藝中具有重要作用。三氮唑的常用分析方法有滴定法、氣譜分析法和液譜分析法。液譜法相較于前兩種方法具有易于操作和重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。但由于三氮唑極性較強(qiáng)，極易溶于水，在傳統(tǒng)反相色譜中，保留時(shí)間太短，當(dāng)樣品中有其他強(qiáng)極性雜質(zhì)時(shí)，就給定量分析帶來很大難度。

親水作用色譜(HILIC)，是上世紀(jì)九十年代開始發(fā)展的一種色譜技術(shù)，用來改善在反相色譜中強(qiáng)極性和親水性物質(zhì)保留時(shí)間較短、分離能力較差的問題。該技術(shù)利用強(qiáng)極性的固定相和高比例有機(jī)相的流動(dòng)相，來達(dá)到此目的。因此，針對(duì)三氮唑分析工作中遇到的問題，我們嘗試采用HILIC色譜柱來解決。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

高效液相色譜儀：Agilent 1100，紫外檢測(cè)器；色譜柱：博納艾杰爾 Venusil HILIC, 4.6×250mm,5μm不銹鋼柱；紫外分光光度計(jì)：島津UV-1800；天平：Mettler Toledo AL204-IC。

1.2 試劑

水：二次蒸餾水；乙腈：色譜純；三氮唑標(biāo)品：99%；試樣：三氮唑(本單位)。

1.3 分析條件

流動(dòng)相：乙腈:水 = 90:10 (V/V)；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：196nm；進(jìn)樣體積：20μL；保留時(shí)間：5.0min左右。

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 吸收波長(zhǎng)的選擇

用UV-1800紫外分光光度計(jì)掃描三氮唑標(biāo)準(zhǔn)品溶液，掃描范圍在190-290nm。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取三氮唑標(biāo)樣一定量(精確至0.0001g)于50mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容，混合均勻后作為標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

1.4.3 試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取三氮唑樣品一定量(精確至0.0001g)于50mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容，混合均勻后作為試樣溶液備用。

1.4.4 測(cè)定

在前述條件下，待基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入標(biāo)樣溶液，待相鄰兩針峰面積變化<1.0%，開始按標(biāo)樣、試樣、試樣、標(biāo)樣的順序進(jìn)樣。

以下為三氮唑標(biāo)樣及樣品的液譜圖(圖1、2)。

圖1 三氮唑標(biāo)樣

圖2 三氮唑樣品

1.4.5 計(jì)算

將測(cè)得的兩針試樣以及前后兩針標(biāo)樣中三氮唑峰面積分別平均，試樣中三氮唑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計(jì)算：

X=A2·m1·PA1·m2×100%

式中：A1：標(biāo)樣三氮唑峰面積平均值；A2：樣品三氮唑峰面積平均值；m1：所稱取的標(biāo)樣三氮唑質(zhì)量；m2：所稱取的樣品三氮唑質(zhì)量；P：標(biāo)樣中的三氮唑質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收波長(zhǎng)的確定

通過紫外掃描，發(fā)現(xiàn)在波長(zhǎng)為196nm時(shí)，三氮唑有最強(qiáng)吸收，且可能含有的雜質(zhì)甲酰胺在此波長(zhǎng)下也有較強(qiáng)吸收，因此選定196nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相的確定

為確保三氮唑與雜質(zhì)顯著分離，選擇不同比例的乙腈+水作為流動(dòng)相進(jìn)行分離。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動(dòng)相為乙腈:水=90:10(V/V)時(shí)，分離效果理想，基線平穩(wěn)，因此選擇該比例為最佳流動(dòng)相。

2.3 分析方法的線性相關(guān)性

稱取不同質(zhì)量的三氮唑標(biāo)準(zhǔn)品于6個(gè)50mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容，混勻。在前定條件下分別進(jìn)行測(cè)定，以三氮唑進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以三氮唑峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線性關(guān)系曲線如圖3，線性方程：y=343426x+1112.2，決定系數(shù)為r2=0.9991，相關(guān)系數(shù)為r=0.9995。

圖3 三氮唑線性關(guān)系曲線圖

2.4 方法精密度

分5次取同一批樣品稱量，采用前定條件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1。該方法測(cè)定三氮唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.22，變異系數(shù)為0.25%。證明該方法精密度良好。

表1 三氮唑精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 方法準(zhǔn)確度

在已測(cè)得質(zhì)量分?jǐn)?shù)的三氮唑試樣中，加入不同量的三氮唑標(biāo)準(zhǔn)品，配成5個(gè)已知樣，在前定液譜條件下，定量分析、計(jì)算結(jié)果如表2，測(cè)得三氮唑平均回收率為97.57%，說明該方法準(zhǔn)確度良好。

3 結(jié)論

如上所述，該方法測(cè)定三氮唑質(zhì)量分?jǐn)?shù)，簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性、分離效果滿足檢驗(yàn)要求，相比原有反相液譜方法，更適用于企業(yè)質(zhì)量檢驗(yàn)。

表2 三氮唑準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果