周函鈺 余平 吳國清

浙江省立同德醫(yī)院 浙江 杭州 310012

酒萸肉與熟地黃是臨床常用的中藥，本文從煎液層面觀察酒萸肉-熟地黃（簡稱“酒萸肉-地黃”）中馬錢苷、莫諾苷含量變化，研究其配伍的優(yōu)勢。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品：酒萸肉（河南省宛西制藥股份有限公司，批號：1200051）；熟地黃（衡州南孔中藥有限公司飲片廠，批號：130515）；馬錢苷（批號111640-200604）購于中國藥品生物制品檢驗(yàn)所；莫諾苷購于鼎瑞化工（上海）有限公司（批號為25406-64-8，HPLC歸一化測定純度≥98%）；乙腈（色譜純）與甲醇（分析純）均購自江蘇漢邦科技有限公司；所有實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材：梅特勒XS-105電子分析天平(METTLER，TOLEDO)；梅特勒AL-204電子天平(METTLER，TOLEDO)；DZF-6050真空干燥箱(上海一恒有限公司)；DHG-9240A電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒有限公司)，YBIA真空恒溫干燥箱（天津光學(xué)儀器廠）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海梅悉儀器有限公司）；98-I-B電子控溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司）；島津LC-20AT高效液相色譜儀；LC solution色譜工作站。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱：Inertsil ODS-SP C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為：乙腈：水=15：85，流速：1ml/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣體積：10μl。

2.2 配伍水煎液與單煎酒萸肉中馬錢苷與莫諾苷的比較：分述如下。

2.2.1 酒萸肉單煎液供試品制備：取酒萸肉50g，加10倍量水浸泡1h，置500ml雙頸圓底燒瓶中回流提取，沸騰計(jì)時，每隔15min從其中取10ml提取液，稱定重量，用熱水迅速補(bǔ)足損失的重量，至180min為止。精密吸取水煎液各1ml，置水浴上蒸干，加入適量甲醇溶解，離心，定量轉(zhuǎn)移到5ml容量瓶，少量多次轉(zhuǎn)移，定容，即作為測定馬錢苷、莫諾苷供試品。

2.2.2 酒萸肉-地黃供試品制備：分別取地黃100g、酒萸肉50g，加10倍量水浸泡1h，置1500ml雙頸圓底燒瓶中進(jìn)行回流提取，至沸騰開始計(jì)時，每隔15min從其中取10ml提取液，稱定重量，用熱水迅速補(bǔ)足損失的重量，至180min為止。煎煮各時間點(diǎn)得到的水煎液，精密吸取1ml，置水浴上蒸干，加入適量甲醇溶解，離心，定量轉(zhuǎn)移到5ml容量瓶，少量多次轉(zhuǎn)移，定容，即作為測定馬錢苷、莫諾苷供試品。

2.2.3 酒萸肉、地黃單煎、混煎液制備：取酒萸肉50g、地黃100g，加10倍量水浸泡1h，圓底燒瓶中進(jìn)行回流提取，至沸騰開始計(jì)時，煎煮1h。取酒萸肉水煎液100ml，地黃水煎液200ml，煎煮1h。取酒萸肉水煎液10ml，地黃水煎液20ml，物理混合（2份），取1份物理混合液再煎煮1h。精密吸取酒萸肉水煎液，酒萸肉-地黃配伍煎液，酒萸肉-地黃物理混合煎液、酒萸肉-地黃物理混合再煎煮煎液1ml，置水浴上蒸干，加入適量甲醇溶解，離心，定量轉(zhuǎn)移到5ml容量瓶，少量多次轉(zhuǎn)移，定容，即為供試品。

2.3 固形物的比較：將2.2項(xiàng)下得到提取液3000r/min離心，從中精密量取5ml，精密稱定，置恒重的蒸發(fā)皿中，濃縮、干燥至恒重，稱量，得固形物重量。

2.4 結(jié)果：按照中國藥典方法，測定酒萸肉-地黃配伍水煎液中活性成分的含量，見圖1～6，表1～2。

圖1 莫諾苷、馬錢苷對照品的HPLC圖譜

圖2 酒萸肉單煎液不同時間HPLC圖譜

圖3 酒萸肉-地黃配伍不同時間點(diǎn)HPLC圖譜

圖4 酒萸肉單煎液、酒萸肉-地黃配伍對比HPLC圖譜

表1 酒萸肉、酒萸肉-地黃煎液中馬錢苷、莫諾苷含量

圖5 酒萸肉、藥對水煎液中馬錢苷和莫諾苷的煎出曲線

圖6 各樣品中馬錢苷和莫諾苷的溶出率HPLC圖譜

表2 各樣品中馬錢苷和莫諾苷的含量

2.5 酒萸肉-地黃配伍水煎液中固形物的比較：將2.2項(xiàng)下得到提取液3000r/min離心，從中精密量取5ml，精密稱定，置恒重的蒸發(fā)皿中，濃縮、干燥至恒重，稱量，計(jì)算煎出率，見圖7。

圖7 酒萸肉、酒萸肉-地黃配伍不同時間點(diǎn)的固形物

3 討論

本文從水煎液來觀察酒萸肉-地黃配伍后活性成分變化，研究了酒萸肉與地黃配伍時馬錢苷、莫諾苷的變化規(guī)律。采用先對單味藥材進(jìn)行煎煮，然后對單煎液進(jìn)行配伍的思路可以消除藥材共煎過程中酒萸肉組分和熟地組分之間的相互作用。按照經(jīng)典配伍（酒萸肉：地黃=1：2），酒萸肉單煎液中馬錢苷含量為0.2945mg/ml，莫諾苷含量為0.7015mg/ml；與地黃配伍后，馬錢苷含量為0.3615mg/ml，莫諾苷含量為1.0380mg/ml。提示酒萸肉-地黃配伍具有協(xié)同煎出的作用，有利于酒萸肉中有效組分的溶出。中藥臨床用藥的特點(diǎn)之一就是復(fù)方配伍，探討中藥配伍過程中成分的變化，為深入研究中藥作用機(jī)理，加速中藥現(xiàn)代化提供了一條新的思路。