艾灸益氣活血法對D-半乳糖致衰老大鼠腦組織抗氧化能力的影響

郭太虎 莫明仙 趙昌金 潘文瑞 張勇 唐中生

摘要：目的研究艾灸對D-半乳糖所致衰老大鼠腦組織抗氧化能力的影響。方法雄性SD大鼠采用D-半乳糖皮下注射制備亞急性衰老大鼠模型，隨機數(shù)字表法分為模型組、艾灸組、吡拉西坦組，每組保證10只，設(shè)置正常組10只作為對照。分光光度法檢測大鼠腦組織SOD活性、MDA水平的變化。結(jié)果與正常組相比，模型組大鼠腦組織SOD活性降低，MDA水平升高。與模型組相比，艾灸組大鼠腦組織SOD活性升高，MDA水平下降。結(jié)論艾灸可通過增強衰老大鼠腦組織抗氧化能力，達到延緩衰老的目的。

關(guān)鍵詞：艾灸;衰老;腦組織;免疫功能;抗氧化能力;益氣活血法

中圖分類號：R2855? ? ?文獻標志碼：B? ? 文章編號：1007-2349（2018）05-0077-03

Effect of Qi-invigorating and Blood-activating Moxibustion Therapy on Anti-oxidative

Competence of Brain in D-galactose-induced Aging Rats

GUO Tai-hu1，MO Ming-xian1，ZHAO Chang-jin1，PAN Wen-rui1，ZHANG Yong1，TANG Zhong-sheng2（1 Class 2 of Traditional Chinese Medicine of 2014，Guiyang University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550025，China;2 Department of Anatomy，Guiyang University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550025，China）

【Abstract】Objective：To study the effect of moxibustion on the anti-oxidative capacity of brain tissue in D-galactose-induced aging rats Methods：Male SD rats were subcutaneously injected with D-galactose to establish the subacute aging rat models The 40 rats were randomly divided into the D-galactose injection group（n=10），the D-galactose injection with moxibustion group（n=10），the D-galactose injection with piracetam group（n=10）and the untreated group as control（n=10）following the random number table The spectrophotometry was applied to detect the changes of SOD activity and MDA level in the rat brains Results：Diminished SOD activity and elevated MDA level in the rat brains were shown with injection of D-galactose in contrast to the baseline in the untreated group，as moxibustion treatment was able to reverse the changes of SOD activity and MDA level Conclusion：Moxibustion therapy can attenuate the aging process by increasing anti-oxidative capacity in rat brains

【Key words】moxibustion，aging，brain tissue，immune function，anti-oxidative competence

衰老是指伴隨著年齡增長而產(chǎn)生的一系列生理和解剖學方面的變化，也是人體對內(nèi)環(huán)境和外環(huán)境適應能力逐漸減退的表現(xiàn)，是生物體在生命后期階段出現(xiàn)的全身性、進行性、多因素共同作用的循序漸進的退化過程，是生命過程的必然規(guī)律[1]。最近有學者認為，衰老不僅會增加機體患病幾率，衰老本身也可造成器官功能衰竭，甚至死亡，可以將衰老看成一類疾病。有研究表明，氧化應激、氧化損傷的積累和抗氧化能力下降導致衰老發(fā)生[1～2]。艾灸作為針灸學特殊療法之一，通過溫熱刺激穴位，可溫陽散寒，疏調(diào)經(jīng)絡(luò)，平衡陰陽，調(diào)整人體內(nèi)部機能。本實驗制備D-半乳糖所致衰老大鼠模型觀察艾灸對腦組織抗氧化能力的影響，為其臨床應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1.材料

1.1.1.實驗動物清潔級健康雄性SD大鼠，體重280～300 g，由重慶滕鑫比爾實驗動物銷售有限公司提供，許可證號：SCXK（軍）2012-0011。

1.1.2.藥物與試劑吡拉西坦（產(chǎn)品批號2160911）;艾條（貴陽市醫(yī)藥公司）;腦組織SOD、MDA檢測試劑盒（南京建成生物工程公司）。

1.1.3.儀器電子天平SL20001N，上海民橋精密科學儀器有限公司;低溫高速離心機X-22R，美國貝克曼;722S分光光度計，上海精密科學儀器有限公司;RF-5301PC熒光分光光度計，日本島津;酶標儀（680型），美國伯樂。

1.2.方法

1.2.1.造模及分組參考文獻[4]，大鼠每日定時背部皮下注射10 mg/mL的D-半乳糖溶液100 mg/kg，連續(xù)30 d，制備大鼠衰老模型。模型制作成功后，隨機分為模型組、艾灸組、吡拉西坦組、正常對照組，每組10只。

1.2.2.治療方法①艾灸組 選擇百會、膈俞、氣海、三陰交、膻中五穴，膈俞和三陰交的雙側(cè)穴位均取，參考《實驗針灸學》[5]常用動物穴位定位法及擬人對照法定位。隔日固定進行艾灸。將大鼠所選擇穴區(qū)剃毛，按順序持艾條于穴位上方05 cm 處溫和灸（以大鼠相對安靜，無劇烈掙扎、嘶叫為度），每次5 min，隔日1 次，共灸15 次[6]，灸時室內(nèi)無風。經(jīng)預實驗皮溫測試，艾灸3 min 達到最高溫度約44℃，之后維持在435℃左右。②吡拉西坦組：隔日一次，給予10 mg·kg-1吡拉西坦灌胃治療。連續(xù)15次。③正常組和模型組：隔日一次，常規(guī)飼料喂養(yǎng)，不予其他干預性資料。

1.2.3.腦組織生化指標測定取-70℃冰箱保存腦組織加入適量裂解液進行組織勻漿。4℃，12000rpm 離心20min，取上清液測定腦組織超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）濃度。具體操作按試劑盒說明書進行。蛋白定量用考馬斯亮藍法。

1.24統(tǒng)計學分析定量數(shù)據(jù)以（x±s）表示，采用SPSS160統(tǒng)計軟件分析，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析，2組間均數(shù)的比較采用LSD 法。

2結(jié)果

21艾灸對衰老大鼠腦組織SOD活性的影響與正常組比較，模型組大鼠腦組織SOD活性明顯降低（P<001）。與模型組相比，艾灸組大鼠腦組織SOD活性明顯升高（P<001）。（表1）艾灸組和吡拉西坦組相比較無意義。表明艾灸可通過提升腦組織SOD活性，發(fā)揮其抗衰老作用。

22艾灸對衰老大鼠腦組織MDA水平的影響與正常組比較，模型組大鼠腦組織MDA水平增高，有顯著性差異（P<001）。與模型組比較，艾灸組大鼠腦組織MDA水平下降，差異顯著（P<005）。（表1）艾灸組和吡拉西坦組相比較無意義。表明艾灸可通過下調(diào)腦組織SOD活性，發(fā)揮其抗衰老作用。

3 討論

衰老的確切機制目前還不清楚，存在自由基、端粒、細胞凋亡等多種學說，其中自由基學說認為氧化損傷的積累和氧化防御機能的下降在衰老過程中起關(guān)鍵作用[7]。自由基是一類具有高度活性的物質(zhì)，可以在細胞代謝過程中直接或間接地發(fā)揮強氧化作用，如發(fā)生紊亂，體內(nèi)產(chǎn)生的自由基及其誘導的氧化反應會使細胞發(fā)生變性、壞死，從而引起機體的衰老和疾病的發(fā)生[8]。隨著年齡的增長，自由基的消長逐漸失衡，多余的自由基會持續(xù)的與生物大分子作用，產(chǎn)生細胞毒性和不可逆性損傷[9]。超氧化物歧化酶（SOD）廣泛地存在于機體內(nèi)，是抗衰老、抗腫瘤等重要的金屬酶，具有保護組織免受自由基損傷的作用，其活性和含量，隨年齡增長而降低，與物種壽命呈正相關(guān)，反映了機體清楚氧自由基的能力，與衰老有著密切的聯(lián)系。MDA是脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物，可反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度，是細胞自由基損傷程度的指標之一[10～11]。MDA含量高低反映氧自由基水平和過氧化反應的強度和速率，是了解自由基導致機體組織、細胞損傷程度的重要指標[12]。本實驗中，模型大鼠出現(xiàn)衰老現(xiàn)象，腦組織SOD活性降低，氧化產(chǎn)物MDA水平升高，表明了模型制作是成功的，說明腦組織抗氧化能力下降。

艾灸療法作為中醫(yī)學的重要組成部分，是我國傳統(tǒng)的治療方法之一。《靈樞·官能》載“針所不及，灸之所宜”;《醫(yī)學入門·針灸》載“藥之不及。針之不到，必須灸之”。艾灸被認為在健康條件下可以增強免疫力，在疾病狀態(tài)下可抑制異常免疫反應[13]。艾灸通過熱成績、艾焦油和燃燒時產(chǎn)生的芳香化合物抑制過氧化物和自由基的產(chǎn)生[14]，部分成分清除DPPH自由基能力比常見抗氧化劑要強[15]。

中醫(yī)認為，氣行則血行，血行則髓生，氣血調(diào)和，百病不生。衰老多屬本虛標實，氣滯血瘀。氣虛則神失所養(yǎng)，瘀血則可隨經(jīng)脈流行入腦，與精髓錯雜，致使清竅受蒙，靈機呆鈍而出現(xiàn)神識不清，表情癡呆諸癥。基于此，本研究選取百會、膈俞（雙）、氣海、三陰交（雙）、膻中組成益氣活血方。百會穴屬督脈，位于巔頂，“頭者神之居”為“精明之府”，且督脈總督一身之陽，有開竅醒神、回陽固脫。膈俞穴能開胸通膈可治療氣滯血瘀。氣海穴可培補元氣。三陰交穴屬足太陰脾經(jīng)，是足厥陰肝經(jīng)、足太陰脾經(jīng)、足少陰腎經(jīng)的交會處，可健脾益氣，調(diào)補肝腎。膻中穴屬任脈，為氣會，可理肺氣、通乳絡(luò)。五穴組合，共奏益氣活血之功。

基于艾灸的抗衰老理論和益氣活血法，我們以艾灸為治療方法，選取百會、膈俞（雙）、氣海、三陰交（雙）、膻中為施治穴位，以衰老大鼠作為研究對象，研究了艾灸益氣活血法對亞急性衰老大鼠腦組織抗氧化能力的變化。結(jié)果表明，艾灸后衰老大鼠腦組織SOA活性升高，MDA水平下降。因此初步認為，艾灸益氣活血法可通過增強衰老大鼠腦組織抗氧化能力，達到延緩衰老的目的。

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