謝道燕，楊振國(guó)，柴建萍，周春濤，羅雁婕

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蠶桑蜜蜂研究所，云南 蒙自 661101)

朱砂葉螨(Tetranychuscinnabarinus)是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上為害比較嚴(yán)重的雜食性害螨，具有個(gè)體小、發(fā)育快、繁殖力強(qiáng)、世代周期短、適應(yīng)環(huán)境強(qiáng)、易產(chǎn)生抗藥性等特點(diǎn)，是一種較難防治的有害生物[1-2]。朱砂葉螨分布范圍廣，寄主種類多，是嚴(yán)重危害多種蔬菜、果樹、花卉等經(jīng)濟(jì)作物的常見害蟲[3-4]。蠶桑是云南省的重要經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)之一，朱砂葉螨同時(shí)也是云南桑園的主要害螨[5]。目前，化學(xué)防治仍是防治朱砂葉螨最有效的方法。我國(guó)農(nóng)藥使用技術(shù)落后，農(nóng)藥田間利用率很低，使得殺蟲殺螨劑在使用中存在大量浪費(fèi)且污染環(huán)境，并誘發(fā)害蟲產(chǎn)生很強(qiáng)的耐藥性，若藥劑選用不當(dāng)，很難達(dá)到理想的防治效果。

在對(duì)桑園內(nèi)和附近果樹等經(jīng)濟(jì)作物上的朱砂葉螨進(jìn)行防治時(shí)，在殺死害蟲害螨的同時(shí)，對(duì)其天敵也會(huì)產(chǎn)生影響，施藥不當(dāng)還會(huì)導(dǎo)致家蠶(Bombyxmori)農(nóng)藥中毒，給蠶桑養(yǎng)殖業(yè)帶來重大損失。家蠶是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲，由于長(zhǎng)期在室內(nèi)隔離飼養(yǎng)，抗逆性差，極易受到外界因素，如溫度、濕度、食物等的影響，且對(duì)藥劑極為敏感[6]。家蠶農(nóng)藥中毒事件頻發(fā)，已成為制約蠶桑業(yè)發(fā)展的主要瓶頸之一。因此，在害螨防治研究中須兼顧藥劑對(duì)家蠶的安全性問題，篩選出對(duì)朱砂葉螨成螨和螨卵高效、“保蟲”和“治蟲”協(xié)調(diào)統(tǒng)一的生態(tài)安全藥劑。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

7.5%魚藤酮乳油，廣西施樂農(nóng)化科技開發(fā)有限公司；60%乙基多殺菌素懸浮劑，美國(guó)陶氏益農(nóng)；10%四氯蟲酰胺懸浮劑，沈陽(yáng)科創(chuàng)農(nóng)化有限公司；1%苦皮藤素乳油，河南新鄉(xiāng)東風(fēng)化工有限責(zé)任公司；10%吡丙醚乳油，上海生農(nóng)生化制品有限公司；0.5%印棟素乳油，云南光明印棟產(chǎn)業(yè)開發(fā)股份有限公司；0.5%藜蘆堿可溶性液劑，邯鄲市建華植農(nóng)藥廠；1.3%苦參堿水劑，天津市恒源偉業(yè)生物科技發(fā)展有限公司。

1.2 供試螨類及家蠶

朱砂葉螨敏感種群，采自云南省蒙自市桑園內(nèi)，在(26±1)℃、相對(duì)濕度60%～80%、光暗周期14 h/10 h的室內(nèi)飼養(yǎng)數(shù)代后，用盆栽菜豆苗進(jìn)行飼養(yǎng)及擴(kuò)殖。供試的成螨直接選自豆苗上3～5日齡發(fā)育整齊的成螨，移至約12 cm2的葉蝶上以備噴藥；供試螨卵則將大小一致的10頭雌成螨挑至約12 cm2的葉蝶上，讓其產(chǎn)卵24 h，然后移除雌成螨，當(dāng)卵齡48 h后用于螨卵的活性測(cè)定。供試家蠶品種為菁松×皓月，由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所提供，選取健康的3齡起蠶作為供試對(duì)象。

1.3 殺螨活性測(cè)定

參照聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)推薦的葉片殘毒法[7]并加以改進(jìn)，測(cè)定采用葉碟噴霧法，噴霧器具為Burkard 標(biāo)準(zhǔn)型Potter噴霧塔，噴霧量為1.0 mL藥液，噴霧壓強(qiáng)20 kPa，沉降時(shí)間10 s。將供試藥劑用蒸餾水分別稀釋成所需的6個(gè)濃度梯度(表1)，以蒸餾水為對(duì)照。每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30頭害螨，噴藥后，置于同等條件下飼養(yǎng)48 h后調(diào)查成螨的死、活蟲數(shù)，并計(jì)算出毒力回歸方程。施藥72 h后調(diào)查螨卵的孵化情況，以未孵化卵為死卵，統(tǒng)計(jì)死亡率。

表18種殺蟲劑對(duì)朱砂葉螨的測(cè)試濃度

Table1Test concentration of 8 insecticides againstTetranychuscinnabarinus

藥劑Insecticide濃度Concentration/(mg·L-1)魚藤酮Rotenone1500，7500，3750，1875，9375，4688乙基多殺菌素Spinetoram800，400，200，100，50，25四氯蟲酰胺SYP?90801333，6667，3333，1667，8333，4167苦皮藤素Celangulin3333，1667，8333，4167，2083，1042吡丙醚Pyriproxyfen4000，2000，1000，5000，2500，1250印棟素Azadirachtin1667，8333，4167，2083，1042，05210藜蘆堿Veratridine100，500，250，125，0625，0313苦參堿Matrine3467，1733，8667，4333，2167，1083

1.4 家蠶的急性毒性測(cè)定

在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用食下毒葉法測(cè)定不同藥劑對(duì)家蠶的急性毒性。將殺蟲劑用蒸餾水分別稀釋成6個(gè)等比系列濃度(表2)，以蒸餾水處理為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次，每個(gè)重復(fù)30頭3齡起蠶。從桑樹上采集展開的第2、第3張健康葉，擦凈葉面上的灰塵等附著物，去除葉柄后，將桑葉切成細(xì)條狀待用。每個(gè)重復(fù)稱取5 g桑葉，用5 mL供試藥液噴灑拌勻，晾干后放入飼養(yǎng)盒內(nèi)，置于(26±1)℃、相對(duì)濕度70%～75%、光暗周期14 h/10 h的飼養(yǎng)室內(nèi)飼養(yǎng)，觀察添食毒葉48 h后的中毒死蠶數(shù)和中毒癥狀。按照中華人民共和國(guó)國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局發(fā)布的《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》，以半數(shù)致死濃度(LC50)的數(shù)值劃分為4個(gè)毒性等級(jí)(toxicity grade，TG)：低毒性，LC50>200 mg·L-1；中等毒性，20 mg·L

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

2 結(jié)果與分析

2.1 8種殺蟲劑的殺螨活性

由表3可知：8種殺蟲劑處理48 h后對(duì)朱砂葉螨成螨的毒殺活性由高到低依次為印棟素>苦參堿>魚藤酮>苦皮藤素>藜蘆堿>乙基多殺菌素>四氯蟲酰胺>吡丙醚，LC50值分別為0.213、0.659、1.621、13.014、16.548、70.300、686.035和1 246.269 mg·L-1；8種殺蟲劑處理72 h后對(duì)朱砂葉螨螨卵的毒殺活性由高到低依次為苦皮藤素>印棟素>藜蘆堿>魚藤酮>苦參堿>四氯蟲酰胺>乙基多殺菌素>吡丙醚，LC50值分別為0.254、3.497、13.564、21.936、35.030、88.517、145.249和629.729 mg·L-1。魚藤酮、印棟素、苦參堿、苦皮藤素、藜蘆堿對(duì)朱砂葉螨的成螨和螨卵均具有較高的毒殺活性。

2.2 8種殺蟲劑對(duì)家蠶的毒力及其中毒癥狀

由表4可知：吡丙醚對(duì)3齡起蠶的急性毒性較低，LC50為134.168 mg·L-1，屬于中毒級(jí)；苦皮藤素、藜蘆堿和四氯蟲酰胺對(duì)3齡起蠶的急性毒性較高， LC50分別為7.133、1.388、9.480 mg·L-1，屬于高毒級(jí)；魚藤酮、乙基多殺菌素、印棟素、苦參堿對(duì)3齡起蠶的急性毒性高，LC50分別為0.104、0.078、0.081和0.070 mg·L-1，屬于劇毒級(jí)。從安全性系數(shù)可知，供試的8種殺蟲劑對(duì)家蠶均屬于高風(fēng)險(xiǎn)型。飼喂含有上述8種殺蟲劑中任一種的桑葉后，3齡起蠶都表現(xiàn)出吐液、拒食、側(cè)翻、體縮和膨胸的癥狀。但不同殺蟲劑也會(huì)誘發(fā)一些各異的中毒癥狀：魚藤酮，中毒癥狀“S”型多、“C”型少，脫肛，頭部伸長(zhǎng)，亂爬；乙基多殺菌素，“S”型少、“C”型多，頭部擺動(dòng)并伸長(zhǎng)，身體失水；吡丙醚，“C”型少，擺頭，亂爬；苦皮藤素，“S”型少、“C”型多，低頭，體發(fā)黑；藜蘆堿，“S”型少、“C”型多，體發(fā)青，尾翹；四氯蟲酰胺，“S”型多、“C”型少，頭部伸長(zhǎng)，失水；印棟素，“S”型少、“C”型多，脫肛，頭部伸長(zhǎng)，失水；苦參堿，“S”型多、“C”型少，頭部伸長(zhǎng)，體褐色。

表28種殺蟲劑對(duì)3齡家蠶的測(cè)試濃度

Table2Test concentration of 8 insecticide toBombyxmori

藥劑Insecticide濃度Concentration/(mg·L-1)魚藤酮Rotenone2344，1172，05860，02930，01465，007325乙基多殺菌素Spinetoram6250，3125，1563，07810，03910，01950四氯蟲酰胺SYP?90802083，1042，05210，02600，01300，006500苦皮藤素Celangulin1333，6667，3333，1667，08330，04165吡丙醚Pyriproxyfen4000，2000，1000，5000，2500，1250印棟素Azadirachtin0313，0156，00780，00390，00195，000975藜蘆堿Veratridine5000，2500，1250，06250，03130，01565苦參堿Matrine0271，0135，00680，00304，00170，000850

表38種殺蟲劑對(duì)朱砂葉螨成螨及螨卵的毒力

Table3Toxicities of eight insecticides againstTetranychuscinnabrinusadults and eggs

殺蟲劑Insecticide螨態(tài)Instar回歸方程RegressionequationLC50值及95%置信限LC50and95%confidentlimit/(mg·L-1)χ2P相對(duì)毒力Relativetoxicity魚藤酮卵Eggsy=-1383+1031x21936(11622～37838)14179000728708Rotenone成蟲Adultsy=-0496+2362x1621(0311～2755)09250921768827乙基多殺菌素卵Eggsy=-2113+0977x145249(75539～290262)1173100194336Spinetoram成蟲Adultsy=-2262+1225x70300(16206～143046)18050000117728四氯蟲酰胺卵Eggsy=-1777+0913x88517(65804～131794)697401377114SYP9080成蟲Adultsy=-2169+0765x686035(248044～13058812)102909051817苦皮藤素卵Eggsy=-0442-0743x0254(0073～0499)559702312479248Celangulin成蟲Adultsy=-2333+2093x13014(2774～55038)23820000095764印棟素卵Eggsy=-0829+1524x3497(2141～5452)199310001180077Azadirachtin成蟲Adultsy=2008+2992x0213(0032～0339)022009945851028藜蘆堿卵Eggsy=-1445+1276x13564(7079～185164)15899000346426Veratridine成蟲Adultsy=-1623+1332x16548(10435～48542)2540063775312苦參堿卵Eggsy=-1877+1215x35030(26426～52589)4836030517977Matrine成蟲Adultsy=0827+4560x0659(0061～0886)051009721891152吡丙醚卵Eggsy=-3787+1353x629729(468397～988269)644601681000Pyriproxyfen成蟲Adultsy=-2743+0886x1246269(584750～6924907)179707731000

相對(duì)毒力在計(jì)算時(shí)以殺螨劑吡丙醚對(duì)成螨或螨卵的相對(duì)毒力為1，將某殺蟲劑對(duì)成螨或螨卵的LC50除以吡丙醚相應(yīng)螨態(tài)的LC50即得到某殺蟲劑的相對(duì)毒力。

The relative toxicity of pyriproxyfen againstT.cinnabrinusadults or eggs was set as 1， and relative toxicity of other insecticide was calculated as its LC50divided by the corresponding LC50of pyriproxyfen.

表48種殺蟲劑對(duì)家蠶3齡起蠶的急性毒性

Table4Acute toxicities of eight insecticides to 3rdinstar newly exuviated larvae ofBombyxmori

殺蟲劑Insecticide回歸方程RegressionequationLC50值及95%置信限LC50and95%confidentlimit/(mg·L-1)χ2P安全性系數(shù)Safetyfactor毒性等級(jí)Relativetoxicity吡丙醚Pyriproxyfeny=-17378+8168x134168(106496～172652)972700450108中毒Moderatepoisoning苦皮藤素Celanguliny=-2200+2578x7133(4308～16690)2671100000548高毒Highlytoxic黎蘆堿Veratridiney=-0712+4994x1388(1246～1549)223306930084高毒Highlytoxic四氯蟲酰胺SYP9080y=5779-5916x9480(7319～40439)015309970014高毒Highlytoxic魚藤酮Rotenoney=5816+5906x0104(0059～0167)1785600010064劇毒Extremelytoxic乙基多殺菌素Spinetoramy=1634+1472x0078(000～0219)1168200200001劇毒Extremelytoxic印棟素Azadirachtiny=8564+7838x0081(0072～0090)043009800380劇毒Extremelytoxic苦參堿Matriney=8281+7180x0070(0061～0080)078709780106劇毒Extremelytoxic

安全性系數(shù)=家蠶的LC50/害螨成蟲的LC50?！?為高風(fēng)險(xiǎn)，>1為低風(fēng)險(xiǎn)。

Safety factor (SF) was calculated asBombyxmoriLC50divided by mite LC50. SF≤1 indicated high risk， while， SF>1 indicated low risk.

3 討論

植物源農(nóng)藥具有高效性和持效性，對(duì)環(huán)境污染較小，且不容易使害蟲產(chǎn)生抗藥性[9]。如印棟素對(duì)昆蟲的作用機(jī)制主要是擾亂昆蟲的內(nèi)分泌活動(dòng)，從而干擾昆蟲的正常發(fā)育進(jìn)程[10]。1%苦皮藤素具有驅(qū)避、拒食、胃毒及觸殺作用。王剛等[11]應(yīng)用5種生物農(nóng)藥對(duì)蘋果葉螨開展室內(nèi)和田間防效試驗(yàn)，證明5種藥劑對(duì)蘋果葉螨均有較高的致死性和防效，其中，1%苦皮藤素乳油室內(nèi)毒性最高，田間防效在第7天時(shí)可達(dá)到91.28%，具有持效期長(zhǎng)、殺螨譜廣、螨卵兼治的特點(diǎn)，同時(shí)對(duì)鱗翅目、同翅目也有較好的防效。吡丙醚屬苯醚類殺蟲劑，是一種保幼激素類型的幾丁質(zhì)合成抑制劑，具有強(qiáng)烈的殺卵活性，同時(shí)具有內(nèi)吸作用，光穩(wěn)定性好，用量少，活性高，持效期長(zhǎng)，對(duì)作物安全，被用于水果、蔬菜、棉花和觀賞植物上白粉虱和介殼蟲防治，以及公共衛(wèi)生中蚊蠅控制和動(dòng)物保健[12]。本試驗(yàn)表明，供試的8種殺蟲劑對(duì)朱砂葉螨成螨和螨卵的毒殺活性存在差異，魚藤酮、印棟素、苦參堿、苦皮藤素、藜蘆堿對(duì)朱砂葉螨的成螨和螨卵的毒殺活性較高，其他藥劑的毒力較低。

采用急性毒性評(píng)價(jià)農(nóng)藥對(duì)有益生物的安全性，具有試驗(yàn)時(shí)間短、工作量小，能在短期內(nèi)(24或48 h)得到結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)。但農(nóng)藥在田間使用后，受光照、溫度、降雨等綜合因子的影響會(huì)發(fā)生降解，毒性降低，因而急性毒性評(píng)價(jià)也具有一定的局限性。陳偉國(guó)等[13]認(rèn)為，不能把農(nóng)藥對(duì)家蠶的急性毒性作為劃分農(nóng)藥對(duì)家蠶風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)的唯一依據(jù)。本試驗(yàn)中，印棟素、苦參堿對(duì)家蠶表現(xiàn)為劇毒，吡丙醚對(duì)家蠶表現(xiàn)為中毒，這與孫海燕等[14]和吳明榮[15]試驗(yàn)結(jié)果一致。陳偉國(guó)等[13]的報(bào)道表明，家蠶對(duì)0.5%印棟素乳油極敏感，但中毒后至死亡一般需3～5 d，對(duì)家蠶的毒性作用比較緩慢，用800、1 200、1 800、2 700倍印棟素乳油稀釋液噴施桑樹，間隔30 d后采葉養(yǎng)蠶，3齡幼蟲的死亡率在50%以上。周春濤等[16]的田間試驗(yàn)結(jié)果表明，0.3%印棟素乳油和1.3%苦參堿水劑對(duì)家蠶的殘毒性低，在推薦濃度范圍內(nèi)的安全間隔期為11 d。2%苦參堿水劑稀釋2 000、1 500、1 000倍噴施桑樹后，對(duì)家蠶的安全間隔期分別為4、8、32 h，安全間隔期后的桑葉對(duì)家蠶的生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)繭量無不良影響[17]。本試驗(yàn)表明，植物源農(nóng)藥印棟素、苦參堿對(duì)家蠶的急性毒性表現(xiàn)為劇毒，苦皮藤素為高毒，與部分研究[18-22]的結(jié)論不一致。主要原因可能是不同廠家所添加的助劑、溶劑，甚至加工流程不同，另外也不排除藥劑中含有其他未標(biāo)明的有效成分的情況。

綜上，在防治桑園害蟲時(shí)，關(guān)鍵因素是防效和對(duì)家蠶的安全性，須兼顧兩者關(guān)系，根據(jù)養(yǎng)蠶布局和防治需要確定合適的藥劑品種。同一品種不同廠家的藥劑之間試驗(yàn)結(jié)果有差異，這種情況在農(nóng)藥毒力測(cè)定中時(shí)常發(fā)生。農(nóng)藥的毒性與其使用后的危害性是2個(gè)既有聯(lián)系又有區(qū)別的概念[23]，正確評(píng)價(jià)農(nóng)藥對(duì)家蠶的安全性不能單用其對(duì)家蠶的毒性作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，還應(yīng)考慮農(nóng)藥在田間的使用情況和環(huán)境條件等因素的綜合影響[24]。限于室內(nèi)測(cè)定結(jié)果，就殺螨而言，可選擇魚藤酮、印棟素、苦參堿、苦皮藤素、藜蘆堿等藥劑進(jìn)行桑園害螨防治。就家蠶的安全性而言，須進(jìn)行田間慢性毒性測(cè)定，并采摘施藥后不同間隔期的桑葉飼喂家蠶，觀察其殘留毒性，以進(jìn)一步明確藥劑對(duì)家蠶的安全間隔期。

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