韓宏曉，趙秋華，盛中華，孫安幫，馬福余，朱順根，張 敏，周光勝，張紅飛

（ 上海市閔行區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，上海201109）

蜱屬蜱螨亞綱、蜱亞目，是一類吸食脊椎動物血液的媒介昆蟲。蜱在吸血過程中能獲得和傳播病原體，引發(fā)各種嚴重的自然疫源性疾病及人獸共患病[1]。蜱地理分布廣泛，氣候適應(yīng)性強，多種病原體經(jīng)蜱傳播，其中包括細菌（土拉弗朗西斯菌等）、病毒（森林腦炎病毒、克里米亞-剛果出血熱病毒、發(fā)熱伴血小板綜合征病毒等）、螺旋體（伯氏疏螺旋體等）、立克次氏體（斑點熱立克次體、無形體等）、原蟲（巴貝西蟲等）以及支原體和衣原體等[2,3]。蜱傳病原體種類繁多，但寵物犬被確診感染發(fā)病報道較少。因此，我們選取我國寵物蜱與蜱傳病原體調(diào)查報道中涉及的3種主要蜱傳病原體（螺旋體、犬埃立克體、嗜吞噬細胞無漿體）作為我們研究對象[4-7]。

隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展和人民生活水平的提高，犬作為一種伴侶動物日益成為人們生活的一部分。上海市為國際化大都市，閔行地處上海市郊，居住人口密集，寵物犬基數(shù)大，管理面臨很大挑戰(zhàn)。多年來，閔行地區(qū)雖有寵物犬人獸共患病的調(diào)查報道，但對寵物犬的蜱和蜱傳病原體未有全面整體的調(diào)查。因此，本研究對上海市閔行地區(qū)寵物犬體表的媒介蜱寄生情況和潛在的蜱傳病原體進行了初步調(diào)查，為評估閔行地區(qū)蜱傳病原體帶來的公共衛(wèi)生風(fēng)險提供參考。

1 材料與方法

1.1 蜱的采集和種類鑒定 2016年1月～12月在上海市閔行區(qū)寵物醫(yī)院隨機選取外觀健康無明顯發(fā)病癥狀的寵物犬作為調(diào)查對象，共檢查2763只寵物犬，其中57只犬體表共捕獲蜱蟲183只。將收集的犬體表寄生的蜱蟲形態(tài)特征進行鑒定[8]，以確定蜱的種類。

1.2 寵物犬血液樣本收集 2016年1月～2017年2月在上海市閔行區(qū)寵物醫(yī)院，隨機采集外觀健康，無明顯發(fā)病癥狀的寵物犬392份犬血液樣本，保存于EDTA抗凝管中備用。

1.3 蜱標本和血液樣本基因組DNA抽提 蜱標本經(jīng)液氮研磨后，按基因組DNA抽提試劑盒（DNeasy Tissue Kit, Qiagen）說明書操作提??；犬血液樣本采用試劑盒（QIAmp DNA Blood Mini Kit , Qiagen）提取基因組DNA。

1.4 PCR擴增鑒定蜱傳病原體 根據(jù)文獻報道[9-11]合成特定的引物，檢測病原特異性靶基因。PCR引物序列及參考文獻詳見表1。使用HotStartTaq（TAKARA）進行PCR擴增，PCR擴增體系50 μL，其中包含10×PCR Buffer 5 μL、HotStarTaq0.5 μL、dNTPs 4 μL、上下游引物各1 μL。PCR擴增結(jié)束，使用1.5%凝膠電泳鑒定擴增反應(yīng)片段。

表1 本研究鑒定的特異性靶基因、PCR引物序列及參考文獻Table 1 Target genes and primer sequences used for detected pathogens in this study

2 結(jié)果與討論

2.1 寵物犬體表蜱寄生情況 經(jīng)過形態(tài)學(xué)鑒定，寵物犬體表寄生的蜱種為血紅扇頭蜱（rhipicephalus sanguineus，R. sanuineus）。如表2所示，寵物犬帶蜱率（帶蜱率%=帶蜱犬數(shù)/總檢查犬數(shù)×100%）為2.06%，帶蜱指數(shù)（帶蜱指數(shù)=蜱總數(shù)/總檢查犬數(shù)）為0.066。前期有研究報道表明，上海市范圍內(nèi)寵物犬體表寄生的蜱種為血紅扇頭蜱和長角血蜱，帶蜱率為1.2%，平均帶蜱指數(shù)為0.09[12]。由此，表明本次調(diào)查結(jié)果與前期研究報道基本吻合。

2.2 蜱和血液樣品中病原體的檢測及鑒定 通過PCR擴增和凝膠電泳鑒定，發(fā)現(xiàn)蜱和血液樣品中均檢出犬埃立克體（Ehrlichia canis，E. canis），而螺旋體（Borrelia.spp）和噬吞噬細胞無漿體（Anaplasma phagocytophilum，A. phagocytophilum）未有檢出（表3）。犬埃立克體（E. canis）在蜱和血液樣品檢出率分別為0.5%和2.29%，血液樣品檢出率高于蜱標本。

本調(diào)查結(jié)果表明，上海市閔行地區(qū)寵物犬體表寄生的蜱種類為血紅扇頭蜱，參加調(diào)查的寵物犬體表蜱和血液樣本有蜱傳病原體犬埃立克體，提示我們寵物犬體表蜱及攜帶的病原體對居民的健康與公共衛(wèi)生安全有一定的隱患。萊姆病是由伯氏疏螺旋體（Borrelia burgdo-rferisensolato）引起的感染性疾病，在部分病人中能引起慢性疾病，本單位在2006年度和2007年度對閔行區(qū)寵物犬的主要人獸共患病進行篩查中，發(fā)現(xiàn)分別有4.1%和5.4%的萊姆病血清學(xué)陽性，但在本次調(diào)查中螺旋體未有檢出，這說明隨著居民健康意識的增強和文明養(yǎng)犬的推行，螺旋體在寵物犬群體中的感染率已經(jīng)顯著降低。犬埃立克體病是由犬埃立克體感染引起的犬敗血性傳染病，相關(guān)病例在國內(nèi)多次報道，值得注意的是犬埃立克體亦可感染人并致病[13]，在我們的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)有2.29%寵物犬攜帶犬埃立克體，這需引起我們的重視。犬嗜吞噬細胞無形體病是由嗜吞噬細胞無形體引起的新發(fā)蜱傳人獸共患病，嚴重威脅人畜健康，在本次研究的蜱和血液樣品中均未檢出噬吞嗜細胞無漿體，在今后的蜱傳病原體監(jiān)測中仍需加強關(guān)注。

本研究初步明確了上海市閔行區(qū)寵物犬體表蜱和蜱傳病原體的情況，將幫助我們制定科學(xué)合理的防控措施，更好地保障公共衛(wèi)生安全。

表2 上海市閔行區(qū)寵物犬體表寄生蜱情況Table 2 Statistics of ticks parasitizing on the bodies of pet dogs

表3 蜱及寵物犬血液樣本病原檢測Table 3 Detected pathogens in ticks and blood samples

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