分子量陣列基因分析儀操作心得

摘要：分子量陣列基因分析儀已在科研實(shí)驗(yàn)上使用多年，操作員積累了很多使用分子量陣列基因分析儀的經(jīng)驗(yàn)和技巧，這些實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)和操作技巧的應(yīng)用能夠有效的提高分子量陣列基因分析儀的使用效率。本文主要探討了分子量陣列基因分析儀的幾個(gè)應(yīng)用，這些操作技巧的應(yīng)用能使分子量陣列基因分析儀操作更加簡(jiǎn)單，有效。

關(guān)鍵詞：質(zhì)譜儀；點(diǎn)樣；軟件

Sequenom公司研發(fā)的分子量陣列基因分析儀已在市場(chǎng)上使用多年，在使用儀器的過(guò)程中，儀器操作員積累了大量操作經(jīng)驗(yàn)和技巧，這些操作經(jīng)驗(yàn)和技巧的應(yīng)用可以提高操作員的工作效率，使得操作員的工作更加輕松，文章中將就Sequenom公司研發(fā)的分子量陣列基因分析儀的幾個(gè)操作技巧進(jìn)行探討。在文章中儀器型號(hào)為MassARRY Analyzer 4，所使用的軟件版本為typer4.0。

1 點(diǎn)樣

MassARRY Analyzer 4分為兩部分組成，分別是點(diǎn)樣儀和質(zhì)譜儀，點(diǎn)樣儀的作用就是把前期處理好的樣品轉(zhuǎn)移到芯片上，然后在把芯片放入質(zhì)譜儀里面通過(guò)掃描而得到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1.1 清洗點(diǎn)樣儀

由于點(diǎn)樣儀所使用的點(diǎn)樣針是固定的，所以為了保持它的清潔，我們要對(duì)它進(jìn)行清洗工作，清洗工作分周洗和日洗，周洗就是每周一次把點(diǎn)樣針浸泡在NaOH中，日洗就是在每日使用前需要用100%乙醇浸泡點(diǎn)樣針。

具體操作如下：打開點(diǎn)樣儀，輸入用戶名和密碼，進(jìn)入主頁(yè)—TOOLS—SOLUTION（Drain排空機(jī)器剩余乙醇）—SOLUTION（Fill移動(dòng)點(diǎn)樣針），把儀器上的乙醇瓶取出倒入100%乙醇并放入儀器，取出新的384孔板，在板子的A1到A6，B1到B6，C1到C6，D1到D6，24個(gè)孔中加入NaOH，并把板子固定在MTP1位置。

再次進(jìn)入主頁(yè)—TOOLS—WEEKLY，這時(shí)儀器就會(huì)把點(diǎn)樣針浸泡入剛放NaOH的384孔板中進(jìn)行周洗，此過(guò)程需要10分鐘，周洗結(jié)束后顯示屏界面依舊停留在TOOLS界面，選擇DAILY，這時(shí)儀器就會(huì)把點(diǎn)樣針浸泡入乙醇中進(jìn)行日洗，此過(guò)程需要30分鐘。清洗結(jié)束后我們依然在TOOLS界面點(diǎn)擊SOLUTION（Drain排空機(jī)器剩余乙醇） —SOLUTION（Fill移動(dòng)點(diǎn)樣針），取出乙醇瓶倒入50%乙醇并放入儀器。注意：點(diǎn)樣過(guò)程中清洗點(diǎn)樣針的乙醇濃度和日洗的乙醇濃度是不一樣的。

1.2 點(diǎn)樣位置的設(shè)置

取出新的芯片放到Scout Plate位置，把處理好的樣品板放到MTP1位置，取30ul標(biāo)準(zhǔn)品加入儀器的標(biāo)樣收集孔里?；氐斤@示屏主頁(yè) →MAPPING →選384 MTP →next →選24 PIMS →next →選384 SPECTROCHIPS →netx →選1 →next →MTPs1 →next，此時(shí)就根據(jù)實(shí)際情況選擇芯片與樣品板之間的位置，選完之后點(diǎn)save，在彈的對(duì)話框Type Mapping Filename中輸入要取的名字，如“1”。

1.3 儀器點(diǎn)樣參數(shù)的設(shè)置

再次回到顯示屏主頁(yè) →METHODS，在Mapping File這里點(diǎn)OPEN，彈出的對(duì)話框選擇“1”即剛剛建立的Type Mapping Filename，Analysis這欄選volume check，SpectroCHIPs選1。在頁(yè)面最下方點(diǎn)擊cleaning，進(jìn)入cleaning界面，Cleaning Sequence欄里rinse，dry（rinse），wash，dry（wash），4個(gè)選項(xiàng)都選上。頁(yè)面下方點(diǎn)擊aspirate/dispense，operation欄里選擇analyte&calibrant，Saveback。

1.4 點(diǎn)樣操作

顯示屏主頁(yè) →TRANSFER，點(diǎn)擊屏幕右上方的open，選擇“1” →ok，點(diǎn)擊右下方的step，此時(shí)點(diǎn)樣針會(huì)把樣品點(diǎn)到芯片上一次，然后我們可以根據(jù)點(diǎn)樣針上方自帶的攝像頭看到點(diǎn)樣量的大小，點(diǎn)樣量的大小可以根據(jù)在METHODS →aspirate/dispense頁(yè)面里的dispense settings攔下dispense speed數(shù)值大小調(diào)節(jié)。數(shù)值越大，點(diǎn)樣量越大，反之越小。點(diǎn)樣量沒(méi)問(wèn)題后就在TRANSFER界面上直接點(diǎn)右下方的run就可以完成全部點(diǎn)樣操作了。

2 質(zhì)譜儀的使用

（1）打開連接質(zhì)譜儀的電腦，點(diǎn)擊star →All Programs → Sequenom → Typer 4.0.20 → Typer 4.0.20，此時(shí)彈出MassARRAY Typer對(duì)話框，點(diǎn)擊Assay Editor輸入服務(wù)器名稱，用戶名和密碼，單擊Connect。在出現(xiàn)的對(duì)話框里導(dǎo)入所做實(shí)驗(yàn)的位點(diǎn)信息。

（2）在MassARRAY Typer對(duì)話框上，點(diǎn)擊Plate Editor，在出現(xiàn)的對(duì)話框里建立樣品板的名字，位點(diǎn)信息，樣品信息→save。

（3）打開ChpLinker軟件，選中此次實(shí)驗(yàn)的樣品板名，在Chip Barcode欄輸入芯片名→Add→Create。

（4）打開MassARRAY Anlyzer 4軟件，Mass Spectrometer Controls→Automatic Run Setup→Chip 1（Chip 2）選擇此次實(shí)驗(yàn)的芯片名→Stat Autorun，此時(shí)儀器就自動(dòng)運(yùn)行，我們就只要等結(jié)果出來(lái)就好了。

總結(jié)起來(lái)，分子量陣列基因分析儀利用飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)核酸樣本進(jìn)行高精度定性、定量分析，無(wú)需借助熒光染料等替代標(biāo)記物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果精確、靈敏、特異性強(qiáng)。高分辨率排除非特異性背景信號(hào)干擾 相比于其他方法，在絕對(duì)定量方面具有更高的精確度技術(shù)是全球唯一利用高精度質(zhì)譜技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行分析的系統(tǒng) MassARRAY技術(shù)通量大且靈活，單張芯片完成個(gè)生物樣本的高通量篩查，適合數(shù)百個(gè)位點(diǎn)，數(shù)千數(shù)萬(wàn)生物樣本的分析實(shí)驗(yàn)，在通量方面更加靈活，成本更低。

作者簡(jiǎn)介：楊峰平（1982），男，漢族，上海金山人，實(shí)驗(yàn)師，主要從事實(shí)驗(yàn)技術(shù)與實(shí)驗(yàn)儀器操作方面工作。