李亞新 ，楊慶利 ，陳 虹 ，高 穎

（1.天津醫(yī)科大學研究生院，天津300070；2.武警甘肅總隊酒泉市支隊，酒泉735000；3.武警后勤學院生藥學和藥劑學教研室，天津300309；4.武警后勤學院附屬醫(yī)院藥材科，天津300162）

哮喘是一種常見病、多發(fā)病，與炎癥因子和免疫調(diào)節(jié)密切相關(guān)。發(fā)病率在世界范圍內(nèi)逐年增加，WHO統(tǒng)計，目前全球有3億人患有哮喘，已成為嚴重威脅公眾健康和生活質(zhì)量的主要慢性疾病之一。哮喘患者需要長期和終身用藥，因此全球具有龐大的用藥需求，但至今缺乏預后效果好的抗哮喘藥物。復方甘草軟膠囊是在傳統(tǒng)名方“當歸、貝母、苦參丸”基礎上優(yōu)化的處方。藥效學研究顯示該處方具有良好的抗哮喘作用。其中甘草具有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥之功效。軟膠囊具有生物利用度高，載藥量大，穩(wěn)定性好，易于掩蓋中藥味道等特點，故該處方工藝選用軟膠囊劑型。本文以正交試驗法進行復方甘草軟膠囊制備處方的優(yōu)化,篩選出基質(zhì)輔料之間的配比,制備出內(nèi)容物均勻、穩(wěn)定、流動性好的軟膠囊。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器 千分之一級分析天平（ME430，梅特勒-托利多儀器有限公司），EYELA冷凍干燥機（FDU-1200，上海愛朗儀器有限公司），10 mL、25 mL具塞量筒，玻璃棒，滴管，100 mL 燒杯，80、100、120目標準篩網(wǎng)（浙江上虞市五四建材儀器廠），500 mL凍干瓶，研缽，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R-124S29 B-480，瑞士布奇公司），循環(huán)水式多用真空泵（SHB-Ⅲ，鄭州長城科工貿(mào)有限公司），EYELA冷卻水循環(huán)裝置（CCA-1111，上海愛朗儀器有限公司）。

1.1.2 試藥 PEG400（聚乙二醇400，生產(chǎn)批號：2015年12月20日，天津市風船化學試劑科技有限公司）,大豆磷脂（生產(chǎn)批號：201601042，上海太偉藥業(yè)有限公司），蜂蠟（分析純，生產(chǎn)批號：20150920，天津市福晨化學試劑廠），單硬脂酸甘油酯（20140922，天津市福晨化學試劑），吐溫-80(化學純，生產(chǎn)批號：2010年10月27日，天津市風船化學試劑科技有限公司)，無水乙醇（分析純，生產(chǎn)批號：20150601，利安隆博華醫(yī)藥化學有限公司），橄欖油為市售歐麗薇蘭橄欖油，當歸揮發(fā)油由中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所提供。

1.2 方法

1.2.1 藥物干粉的制備 原料藥材粉碎經(jīng)60%的乙醇回流提取得浸膏，提取率為17.9%，取適量浸膏稱重，之后倒入凍干瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸。調(diào)整水浴鍋溫度為40℃，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀轉(zhuǎn)速為35 r/min，旋蒸至冷凝管中液滴不再落下。取下凍干瓶，靜置，待其溫度降至室溫，用封口膜將凍干瓶口密封，于冰箱中冷凍過夜。啟動LABCONCO真空冷凍干燥機，待儀器達到平衡后（凍干機的溫度降到-46℃，壓力降為10～20 pa）將待干燥的浸膏置于冷凍干燥機上。浸膏在真空、低溫的條件下干燥24 h。

1.2.2 粉碎粒度的考察 取真空冷凍干燥24 h的藥粉3份，每份5 g，用研缽研磨后，分別過80目、100目、120目標準篩網(wǎng)后加入聚乙二醇400適量，考察其混懸體系在48 h內(nèi)的穩(wěn)定性。以沉降率F為指標（F=H1/H0）

1.2.3 基質(zhì)輔料的篩選 軟膠囊應選擇合適的輔料，使藥物能夠均勻地混懸在其中，減少其沉降造成的質(zhì)量不穩(wěn)定。

1.2.3.1 沉降體積比的測定：將混懸劑裝入25 mL具塞量筒中，堵住管口，記錄初始高度H0，靜置，分別記錄 0、1、2、3、4、5 h 持續(xù) 48 h 沉降物的高度（H1），計算沉降體積比 F（F=H1/H0），繪制沉降曲線。

本試驗的分散介質(zhì)從常用橄欖油、PEG400中，以沉降體積比為考察指標，對分散介質(zhì)進行選擇。用天平稱取冷凍干燥藥粉兩份，每一份重量為5 g。量取15 mL的橄欖油和PEG400置于兩個燒杯中。將兩份藥粉分別加入兩個燒杯，用玻璃棒攪拌均勻，轉(zhuǎn)移至量筒中，記錄初始高度及不同時間點的沉降物高度。

1.2.3.2 再分散性的測定：對靜置沉淀平衡后的混懸劑進行再分散性R的測定。將裝有混懸劑的刻度量筒翻轉(zhuǎn)180°，測定恢復到初制混懸劑狀態(tài)所需翻轉(zhuǎn)次數(shù)。

1.2.3.3 分散介質(zhì)用量的測定：準確稱取混有揮發(fā)油的藥粉適量，放入1 000 mL燒杯內(nèi)，分次少量地將聚乙二醇400加到燒杯內(nèi)，混合均勻。直到混懸液能從液面成45°角的藥刀上穩(wěn)定地流下為止，流動均勻連貫而不呈“小球”狀滴下，判斷出分散介質(zhì)的用量的范圍。

1.2.4 助懸劑的選擇 在制備內(nèi)容物的混懸液時，通過加入適量助懸劑可以提高分散介質(zhì)粘度，改善混懸物的均勻度，提高內(nèi)容物的穩(wěn)定性。分別以相同處方量的蜂蠟、單硬脂酸甘油酯為助懸劑，加入到處方量的聚乙二醇400中混合，水浴加熱至75℃熔融。在熔融混合液中加入處方量的凍干藥粉，用玻璃棒攪拌均勻,以沉降體積比F及再分散性R為指標，篩選助懸劑。

1.2.5 潤濕劑的選擇 分別以相同處方量的大豆卵磷脂、吐溫-80為潤濕劑，將處方量的聚乙二醇400和蜂蠟混合,水浴加熱至75℃熔融，將相同處方量的大豆卵磷脂、吐溫-80分別加入其中。于該混合液中加入處方量的凍干藥粉，用玻璃棒攪拌均勻，以沉降體積比F及再分散性R為指標，篩選潤濕劑。

1.2.6 復方甘草軟膠囊處方的優(yōu)化 根據(jù)單因素試驗結(jié)果，以藥粉與聚乙二醇400的用量比(A)、蜂蠟用量（B）、大豆磷脂用量（C）為考察因素，采用正交設計試驗L9（34）優(yōu)化復方甘草軟膠囊內(nèi)容物的最優(yōu)處方。因素水平表見表1。

表1 L9（34）因素-水平表Tab 1 Levels and factors of L9(34)

1.2.7 驗證試驗 取處方量聚乙二醇400中加入處方量的蜂蠟，75℃熱熔，然后加入處方量的凍干藥粉，攪拌均后加入大豆卵磷脂，至全部融化后，冷卻至室溫后加入揮發(fā)油部分，即得。該方法按優(yōu)選處方的比例，進行3批樣品的驗證試驗。

2 結(jié)果

2.1 藥物干粉的制備 浸膏在真空、低溫的條件下干燥24 h后，收集干燥產(chǎn)品稱重，收率為59.3%。2.2 粉碎粒度的考察 按1.2.2項下方法對粉碎粒度進行考察，結(jié)果見表2。

表2 粉碎粒度的考察(n=3)Tab 2 Observation on crushing and particle size（n=3）

由表中數(shù)據(jù)分析可得，藥粉過120目標準篩網(wǎng)時，其混懸體系的穩(wěn)定性最好。

2.3 分散介質(zhì)的選擇結(jié)果

2.3.1 沉降體積比的測定 按1.2.3.1項下方法對粉碎粒度進行考察，結(jié)果見表3。

表3 兩種分散介質(zhì)對軟膠囊內(nèi)容物流動性的影響Tab 3 Effectsoftwodispersingmediaonthefluidityofsoftcapsules

根據(jù)表3數(shù)據(jù)，兩種分散介質(zhì)中，不同時刻沉降物的高度，計算沉降體積比F（F=H1/H0），繪制沉降曲線。結(jié)果見圖1。

圖1 兩種分散介質(zhì)對軟膠囊內(nèi)容物流動性的影響Fig 1 Effects of two dispersing media on the fluidity of soft capsules

2.3.2 再分散性的測定 按1.2.3.2項下方法進行測定，比較橄欖油和聚乙二醇400的再分散性。結(jié)果為橄欖油的R為8，聚乙二醇400的R為5。

2.3.3 分散介質(zhì)的選擇結(jié)果 兩種分散介質(zhì)與藥粉均能混合均勻，流動性相當。由上述表3得出結(jié)論，以橄欖油為分散介質(zhì)的F最終為9.5/18.5=0.51，以聚乙二醇400為分散介質(zhì)的F最終為15/18.5=0.81，由上述實驗結(jié)果可見，聚乙二醇400混懸體系的穩(wěn)定性優(yōu)于橄欖油混懸體系，因此選用聚乙二醇400作為軟膠囊制劑的分散介質(zhì)。

2.3.4 分散介質(zhì)用量的測定 當藥粉與聚乙二醇400的用量比在1∶1和1∶1.5之間時，混懸液能從液面成45°角的藥刀上穩(wěn)定地流下為止,流動均勻連貫而不呈“小球”狀滴下。顯示藥粉與聚乙二醇400的用量比在1∶1和1∶1.5之間具有較好的流動性。

2.4 助懸劑選擇結(jié)果 按1.2.4項下方法對助懸劑進行篩選，結(jié)果見表4。

表4 助懸劑的選擇Tab 4 Selectionofsuspendingagents

單硬脂酸甘油酯和蜂蠟均具有一定的助懸效果。蜂蠟比單硬脂酸甘油酯的助懸效果好，混合后穩(wěn)定性高，再分散性好。因此，選用蜂蠟作為助懸劑。2.5 潤濕劑的選擇 按1.2.5項下方法對潤濕劑進行篩選，結(jié)果見表5。

表5 潤濕劑的選擇Tab 5 Selectionofwettingagents

大豆卵磷脂和吐溫-80均有一定的潤濕效果。大豆卵磷脂比吐溫-80的再分散性好,內(nèi)容物穩(wěn)定性高，流動性好。因此選用大豆卵磷脂為潤濕劑。2.6 正交試驗優(yōu)化處方 按1.2.6項下表1的因素水平表進行正交設計，以不同比例制備的9組混合物，冷卻后，分別加入8%的當歸揮發(fā)油，測定其沉降比F及再分散性R。由直觀分析和方差分析可知，影響因素 A＞C＞B，其中 A1＞A2＞A3，B1＞B2＞B3，C3＞C2＞C1，最優(yōu)結(jié)果為 A1B1C3。對再分散性來說，C＞A=B，其中 A3＜A2＜A1，B3＜B1＜B2，C2＜C1＜C3。最優(yōu)結(jié)果為A3B3C2。綜合兩方面因素，試驗的最優(yōu)方案為A2B2C2。即用量比為 1∶1.25，蜂蠟用量為 2%，大豆卵磷脂用量為0.4%。見表6～8。

表6 L9(34)正交試驗結(jié)果Tab 6 ResultsoforthogonaltestL9(34)

表7 沉降比方差分析結(jié)果Tab 7 Variance analysis of sedimentation ratio

表8 再分散性方差分析結(jié)果Tab 8 Variance analysis of redispersibility

2.7 驗證試驗 結(jié)果優(yōu)選處方制備3批樣品內(nèi)容物的沉降體積比平均值為0.95，RSD為0.11%，再分散次數(shù)平均值為9次，RSD為0.13%。試驗結(jié)果驗證該處方配比適宜，重復性較好。

3 討論

3.1 本試驗選用的軟膠囊內(nèi)容物為當歸揮發(fā)油與冷凍干燥甘草提取物藥粉混合物，將揮發(fā)油和冷凍干燥藥粉與助懸劑、潤濕劑混合制成混懸劑，并進一步制成軟膠囊，防止揮發(fā)油的溢出，提高制劑穩(wěn)定性，并能掩蓋藥粉的苦味，解決患者服用困難的問題，提高患者的順應性。

3.2 在制備混合物的過程中由于需加熱，將導致?lián)]發(fā)油的損失，同時加入的揮發(fā)油量較小，因此采取了后加揮發(fā)油的方法。

3.3 對于助懸劑蜂蠟熱熔的溫度選擇上，分別比較了70℃、75℃、80℃，其中70℃熱熔時間很長（26 min），且不夠完全；80℃雖然熱熔時間非常短（5 min），但造成資源浪費。經(jīng)比較，最終選擇75℃（8 min內(nèi)熔融完全且充分）為最佳熱熔溫度。

3.4 內(nèi)容物的加入順序上，在精確稱量的聚乙二醇400中加入處方量的蜂蠟，75℃熱熔，然后加入處方量的凍干藥粉，攪拌均后加入大豆卵磷脂，至全部融化后，冷卻至室溫后加入揮發(fā)油部分。比較了蜂蠟和大豆卵磷脂的加入順序。結(jié)果顯示，先加入大豆卵磷脂，再加入蜂蠟，混合物比較粘稠，流動性不好。

以內(nèi)容物沉降比和再分散性為指標，通過單因素和正交試驗，優(yōu)選軟膠囊內(nèi)容物的最佳配方，制成的內(nèi)容物流動性好，穩(wěn)定性高，具有良好的分散性，達到了處方優(yōu)化的目的。中藥軟膠囊的研究尚處在起步階段，制備中藥軟膠囊的技術(shù)要點和現(xiàn)存問題都還需深入的探討和總結(jié)。隨著中藥軟膠囊的生產(chǎn)技術(shù)日益完善，中藥軟膠囊劑必將有一個廣闊的前景。

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