李美艷,韓新彥,陳永學(xué),牛廣旭

(1邯鄲市中心醫(yī)院婦一科,邯鄲 056008;2邯鄲市中心醫(yī)院麻醉科;3邯鄲市中心醫(yī)院病理科;*通訊作者,E-mail:everlasting321@163.com)

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma,EC)是女性生殖道最常見惡性腫瘤之一,已對(duì)女性健康造成極大威脅[1]。血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry,VM)作為全新腫瘤血管結(jié)構(gòu)被證實(shí)在多種惡性腫瘤中存在[2,3]。瘦素(Leptin)是重要的脂肪因子,與EC發(fā)生密切相關(guān)[4]。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的活化與遷移,是一重要促血管生成蛋白[5]。VM、Leptin、VEGF均與EC等腫瘤的侵襲性密切相關(guān),本研究旨在探討三者單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EC的診斷價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取我院2012-01～2013-11期間診治的患者345例為研究對(duì)象：經(jīng)病理檢查為EC的患者197例、不典型增生患者85例、正常子宮內(nèi)膜患者63例，其中EC患者年齡范圍24-72歲，平均年齡(50.19±9.54)歲。197例EC患者按照平均年齡50.19歲四舍五入為50歲分組：≥50歲104例，<50歲93例；根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO 2009)手術(shù)-病理分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ-Ⅱ期170例，Ⅲ-Ⅳ期27例；組織學(xué)分化：高-中分化144例，低分化53例；肌層浸潤深度：≥1/2肌層51例，<1/2肌層146例；組織學(xué)類型：Ⅰ型155例，Ⅱ型42例；術(shù)后證實(shí)是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有轉(zhuǎn)移25例，無轉(zhuǎn)移172例。實(shí)驗(yàn)用標(biāo)本均來自于診刮及手術(shù)切除子宮的內(nèi)膜標(biāo)本，所有病例術(shù)前均未接受過放化療，未用過激素類藥物，排除有心、腦、腎重要器官功能障礙、凝血系統(tǒng)障礙、出血疾病者，EC患者均為初次手術(shù)且腫瘤均為原發(fā)。由2名高年資病理醫(yī)生復(fù)習(xí)病理切片，并選取包含腫瘤組織及非癌的內(nèi)膜組織的石蠟標(biāo)本備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果判定

采用CD34-PAS雙重染色法,檢測(cè)各內(nèi)膜組織中VM的表達(dá);免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)Leptin和VEGF蛋白的表達(dá)情況。各實(shí)驗(yàn)步驟均嚴(yán)格按相應(yīng)試劑的說明書進(jìn)行操作。CD34-PAS雙染色步驟參見文獻(xiàn)[6],存在VM結(jié)構(gòu)的判定標(biāo)準(zhǔn):由CD34染色結(jié)果陰性的腫瘤細(xì)胞構(gòu)成管腔樣結(jié)構(gòu),PAS陽性物質(zhì)(紫紅色)襯附其周圍,且未見CD34陽性的內(nèi)皮細(xì)胞,部分管腔內(nèi)可見紅細(xì)胞,即VM結(jié)構(gòu)陽性標(biāo)志為CD34-/PAS+[7]。免疫組化SP法步驟和判定評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參見文獻(xiàn)[8],Leptin蛋白陽性細(xì)胞染色為細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒;VEGF蛋白陽性染色大多數(shù)定位于癌細(xì)胞胞漿或胞膜中,陽性著色呈淡黃色至棕黃色顆粒。

試劑:PAS染色試劑盒購自美國Sigma公司,大鼠抗小鼠CD34抗體購自美國Santa Cruz公司,兔抗體Leptin多克隆抗體購自北京中山生物技術(shù)有限公司,鼠抗人VEGF單克隆抗體、免疫組織化學(xué)SP試劑盒、PBS緩沖液、DAB試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)公司。

1.3 診斷效能評(píng)價(jià)指標(biāo)

EC的診斷效能評(píng)價(jià)指標(biāo)采用靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、準(zhǔn)確度和約登指數(shù)表示(%),所用計(jì)算公式[9]如下:

靈敏度=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%

特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù))×100%

陽性預(yù)測(cè)值=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陽性例數(shù))×100%

陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%

準(zhǔn)確度=(真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù))/(參加測(cè)試總例數(shù))×100%

約登指數(shù)=(靈敏度+特異度-1)×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)軟件IBM SPSS StatisticsVersion 19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算處理,各計(jì)數(shù)資料以率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),用Pearson法和連續(xù)校正公式來計(jì)算。采用列聯(lián)系數(shù)進(jìn)行VM、Leptin、VEGF三者之間的相關(guān)性分析。各檢驗(yàn)均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 VM、Leptin、VEGF及其聯(lián)合在各組內(nèi)膜組織中表達(dá)的比較

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用CD34-PAS雙重染色和免疫組化SP法,檢測(cè)VM結(jié)構(gòu)和Leptin、VEGF蛋白單項(xiàng)檢測(cè)、兩兩配對(duì)檢測(cè)及三者聯(lián)合檢測(cè)均為同一切片標(biāo)本,在各組中的表達(dá)情況見表1。染色結(jié)果提示,CD34-PAS雙重染色:VM陽性78例,陰性119例;Leptin陽性155例,陰性42例;VEGF陽性134例,陰性63例。典型染色圖見圖1-3。其中,EC癌組的各蛋白及組合的陽性表達(dá)率均明顯高于癌前病變組及正常對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表1VM、Leptin、VEGF及其聯(lián)合在各組中陽性率比較例(%)

Table1ComparisonofpositiveratesofVM,Leptin,VEGFandtheircombinationsamongthreegroupscases(%)

組別nVMLeptinVEGFVM+LeptinVM+VEGFLeptin+VEGFVM+Leptin+VEGF正常對(duì)照組631(1.59)6(9.52)3(4.76) 7(11.11)4(6.35) 8(12.70) 9(14.29)不典型增生組854(4.71)28(32.94)18(21.18)28(32.94)20(23.53)28(32.94)28(32.94)癌組19778(39.59)155(78.68) 134(68.02) 159(80.71) 149(75.63) 161(81.73) 167(84.77) χ2*60.668105.87398.976111.805119.347113.675124.936 P0.0000.0000.0000.0000.000.0000.000

*Pearson法或連續(xù)校正公式進(jìn)行癌組與非癌組比較的卡方值

紅色箭頭指向部分即為VM管腔結(jié)構(gòu);黑色箭頭指向部分即為正常血管圖1 VM在子宮內(nèi)膜癌中CD34-PAS雙重染色 (×400)Figure 1 CD34-PAS double staining of VM in endometrial carcinoma (×400)圖2 Leptin蛋白在低分化子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá) (SP,×200)Figure 2 Expression of Leptin protein in poorly differentiated endometrial carcinoma (SP,×200)圖3 VEGF蛋白在低分化子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá) (SP,×200)Figure 3 Expression of VEGF protein in poorly differentiat-ed endometrial carcinoma (SP,×200)

2.2 VM、Leptin及VEGF與EC臨床病理特征的關(guān)系

197例EC組織中VM、Leptin及VEGF蛋白在各臨床病理參數(shù)分組中的表達(dá)情況見表2。VM結(jié)構(gòu)和Leptin、VEGF蛋白表達(dá)均與手術(shù)病理分期、組織學(xué)分化有關(guān)(均P<0.05);VM和Leptin表達(dá)還與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(均P<0.05);VM、Leptin及VEGF蛋白在其他組(年齡、肌層浸潤深度、組織學(xué)類型)中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見表2)。

2.3 VM、Leptin和VEGF在EC中的相關(guān)關(guān)系

應(yīng)用列聯(lián)系數(shù)對(duì)VM、Leptin、VEGF蛋白三者在EC中表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示VM與VEGF蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.286,P=0.001，見表3);Leptin與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.649,P=0.000，見表4);VM與Leptin呈正相關(guān)(r=0.435,P=0.000，見表5)。三者均呈正相關(guān)關(guān)系,表明三者在EC的發(fā)生、發(fā)展中具有明顯的正向協(xié)同效應(yīng)。

2.4 單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)VM、Leptin和VEGF對(duì)EC診斷效力分析

以術(shù)后病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn),VM、Leptin和VEGF蛋白單獨(dú)檢測(cè)中陽(陰)性即為檢測(cè)陽(陰)性,兩兩聯(lián)合或三者聯(lián)合檢測(cè)中任一項(xiàng)為陽性即視為檢測(cè)陽性,兩兩配對(duì)檢測(cè)中兩者均為陰性或三者聯(lián)合檢測(cè)中三者均為陰性視為檢測(cè)陰性,診斷效力分析結(jié)果見表6。

3 討論

目前EC診斷檢查方法主要有超聲檢查、診斷性刮宮組織病理學(xué)檢查和宮腔鏡檢查,但超聲檢查的漏診率偏高;診斷性刮宮病理檢查,因?yàn)槭敲す?對(duì)于早期病變,或者位置位于兩側(cè)宮角者,容易漏診;宮腔鏡檢查易受出血、穿孔等不定因素影響。尋求更為敏感和特異的腫瘤標(biāo)志物和恰當(dāng)?shù)臋z測(cè)方式,對(duì)提高EC的診斷率將有重要意義。

3.1 VM結(jié)構(gòu)與腫瘤

經(jīng)典觀點(diǎn)認(rèn)為只有內(nèi)皮細(xì)胞才能形成血管,但VM作為除血管外供應(yīng)腫瘤生長的重要結(jié)構(gòu),在多種腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移中均發(fā)揮著重要作用,VM這一腫瘤內(nèi)管狀網(wǎng)絡(luò)模式,可能為抗腫瘤血管治療提供新的思路[10,11]。

表2VM、Leptin、VEGF與EC臨床病理特征的關(guān)系例(%)

Table2RelationshipbetweenVM,Leptin,VEGFandclinicopathologicalfeaturesofendometrialcarcinomacases(%)

臨床病理特征nVM結(jié)構(gòu)Leptin表達(dá)VEGF表達(dá)陽性χ2P陽性χ2P陽性χ2P年齡0.0580.8100.0830.7730.7040.402 ≥50歲10442(40.38)81(77.88)68(65.38) <50歲9336(38.71)74(79.57)66(70.97)手術(shù)-病理分期7.1440.0085.7880.01611.5000.001 Ⅰ-Ⅱ17061(35.88)129(75.88)108(63.53) Ⅲ-Ⅳ2717(62.96)26(96.30)26(96.30)組織學(xué)分化90.8600.00016.3230.0005.7300.017 高-中14428(19.44)103(71.53)91(63.19) 低5350(94.34)52(98.11)43(81.13)肌層浸潤深度3.7300.0530.1200.7290.0120.914 ≥1/25126(50.98)41(80.39)35(68.63) <1/214652(35.62)114(78.08)99(67.81)組織學(xué)類型0.2380.6260.1970.6570.3420.559 Ⅰ型15560(38.71)123(79.35)107(69.03) Ⅱ型4218(42.86)32(76.19)27(64.29)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9.6600.0025.1210.0240.2080.648 有2517(68.00)24(96.00)18(72.00) 無17261(35.47)131(76.16)116(67.44)

表3EC中VM表達(dá)和VEGF蛋白的關(guān)系

Table3RelationshipbetweenVMexpressionandVEGFproteininendometrialcarcinoma

VMVEGF蛋白-++++++rP陰性291940310.2860.001陽性692241

表4EC中Leptin和VEGF蛋白表達(dá)的關(guān)系

Table4RelationshipbetweenLeptinandVEGFproteinexpressioninendometrialcarcinoma

Leptin蛋白VEGF蛋白-++++++rP-32110.6490.000+122300++1324327+++711844

表5EC中VM表達(dá)和Leptin的關(guān)系

Table5RelationshipbetweenVMexpressionandLeptininendometrialcarcinoma

VMLeptin蛋白-++++++rP陰性53655230.4350.000陽性013146

VM是一種不依賴于內(nèi)皮細(xì)胞的腫瘤新生血管,是近年來腫瘤血管的研究熱點(diǎn)[12],擁有VM的惡性腫瘤,更易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、生存率低[6]。梁軍等[13]指出,VM模擬內(nèi)皮細(xì)胞形成的管狀結(jié)構(gòu),血液在該結(jié)構(gòu)內(nèi)流動(dòng),為腫瘤的持續(xù)生長及轉(zhuǎn)移提供營養(yǎng)支持。為更好阻止腫瘤血供,必須對(duì)VM與腫瘤血管生成進(jìn)行聯(lián)合治療,才能起到良好療效[14]。本研究中VM結(jié)構(gòu)染色結(jié)果顯示,197例EC組織中,VM結(jié)構(gòu)陽性(VM+)78例(39.59%),VM陰性(VM-)119例(60.41%),EC組織中有78例存在符合標(biāo)準(zhǔn)的通道結(jié)構(gòu),而在不典型增生子宮內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中分別僅為4.71%和1.59%,說明EC中存在VM現(xiàn)象,EC組VM存在的概率顯著增高,在EC組較其他組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=60.668,P<0.05),這與陳純等[11]研究結(jié)果一致。

表6VM、Leptin、VEGF蛋白及其聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能比較(%)

Table6ComparisonofdiagnosticefficiencyofVM,LeptinandVEGFproteinsandtheircombineddetectionforEC(%)

檢測(cè)指標(biāo)靈敏度特異度陽性預(yù)測(cè)值陰性預(yù)測(cè)值準(zhǔn)確度約登指數(shù)VM39.5996.6293.9854.5864.0636.22Leptin78.6877.0382.0173.0877.9755.71VEGF68.0285.8186.4566.8475.6553.83VM+Leptin80.7176.3581.9674.8378.8457.06VM+VEGF75.6383.7886.1372.0979.1359.42Leptin+VEGF81.7375.6881.7375.6879.1357.40VM+Leptin+VEGF84.7775.0081.8678.7280.5859.77

陳純等[11]研究表明,口腔鱗癌中存在VM,并與腫瘤臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。王龍等[15]指出,在食管鱗狀上皮癌中VM的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。梁軍等[10]研究指出,VM的形成與EC患者年齡、組織類型無關(guān),與分期、組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤深度及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有VM的EC患者具有更高的惡性程度、侵襲性和轉(zhuǎn)移能力。本研究采用免疫組織化學(xué)和CD34-PAS雙重染色技術(shù)從蛋白質(zhì)水平研究VM結(jié)構(gòu),結(jié)果顯示,EC組織中有78例存在符合標(biāo)準(zhǔn)的通道結(jié)構(gòu),證實(shí)了EC中存在VM。EC組織中VM的形成與患者的年齡、肌層浸潤深度及組織學(xué)類型均無關(guān),而與EC手術(shù)病理分期、組織學(xué)分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。提示,具有VM的EC惡性程度高易發(fā)生轉(zhuǎn)移,隨著較晚的手術(shù)病理分期、較差的組織學(xué)分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,VM存在的概率顯著增高(P<0.05)。組織學(xué)分化程度越低及惡性程度越高的EC形成VM的能力越強(qiáng),越易發(fā)生轉(zhuǎn)移,惡性度越高,這與陳純等[11]的研究結(jié)果相一致,提示VM可能會(huì)成為診斷EC的重要指標(biāo)之一。

3.2 Leptin蛋白與腫瘤

Leptin是一種分泌型蛋白質(zhì),是第1個(gè)被發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞分泌的激素,Leptin作為肥胖基因編碼的產(chǎn)物,已證實(shí)在促進(jìn)細(xì)胞增殖和血管生成等方面具有重要作用,與婦科腫瘤、前列腺癌、胃癌等多種腫瘤的發(fā)生相關(guān)[16]。臨床流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),Leptin通過多種機(jī)制參與EC細(xì)胞的形成,高Leptin水平和EC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)[4],Leptin在卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤中均表達(dá)異常[17],Zhang等[18]對(duì)80例EC和50例正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本研究發(fā)現(xiàn),EC中Leptin的陽性表達(dá)明顯較高。

本研究中Leptin蛋白染色結(jié)果顯示,197例EC組織中,Leptin陽性155例(78.68%),Leptin陰性42例(21.32%),而在不典型增生子宮內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中分別僅為32.94%和9.52%,說明EC中Leptin蛋白表達(dá)陽性的比率顯著增高,EC組較其他組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=105.873,P<0.05)。這提示高Leptin表達(dá)水平可能促進(jìn)EC的發(fā)生發(fā)展,Leptin可能促進(jìn)腫瘤增殖和抑制細(xì)胞凋亡,Leptin的檢測(cè)可能成為臨床預(yù)測(cè)EC的一個(gè)指標(biāo),有可能作為區(qū)分良惡性子宮內(nèi)膜組織的標(biāo)志。以往資料,Yuan等[19]通過免疫組化方法分析宮頸鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本資料,Leptin的陽性表達(dá)率約75%;林世龍等[20]表明,在低級(jí)別、高級(jí)別膀胱癌中,Leptin的陽性表達(dá)率分別約44%,76%;范曉琳等[16]報(bào)道,胃癌組織和癌旁組織中Leptin的表達(dá)陽性率分別約81%,59%,均與本研究一致。

范曉琳等[16]報(bào)道,Leptin在胃癌組織中的表達(dá)與腫瘤的臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),而與腫瘤位置、性別、體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤分化程度無關(guān)。林世龍等[20]研究顯示,Leptin的表達(dá)與膀胱癌的組織學(xué)分級(jí)有關(guān)。國外資料Zhang等[18]對(duì)EC和正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本研究發(fā)現(xiàn),EC中Leptin的陽性表達(dá)與EC的惡性程度、侵襲性、轉(zhuǎn)移性相關(guān)。本研究結(jié)果顯示,EC組織中Leptin的高表達(dá)與患者的年齡、肌層浸潤深度及組織學(xué)類型均無關(guān),而與EC患者的手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。表明,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Leptin的表達(dá)陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者;Leptin的表達(dá)與EC惡性程度有關(guān),Leptin蛋白高表達(dá)的EC惡性程度高易發(fā)生轉(zhuǎn)移;Leptin陽性表達(dá)會(huì)隨著EC的期別上升而增高,而且組織學(xué)分化程度越差,Leptin陽性表達(dá)將越高。提示,Leptin陽性表達(dá)與EC病情進(jìn)展有緊密聯(lián)系,這與范曉琳等[16]、林世龍等[20]的研究結(jié)果相一致,提示Leptin可能參與了EC的侵襲和遷移過程。

3.3 VEGF蛋白與腫瘤

VEGF能調(diào)節(jié)腫瘤的血管生成、生長、轉(zhuǎn)移和侵襲[21],已成為目前在腫瘤血管生成中作用最強(qiáng)的血管生成誘導(dǎo)因子[14]。近期,王淑貞等[22]研究發(fā)現(xiàn),EC組織中VEGF表達(dá)明顯高于子宮內(nèi)膜不典型增生、正常子宮內(nèi)膜患者。說明,VEGF表達(dá)與EC有著密切聯(lián)系,VEGF能刺激腫瘤血管生長,增加血管通透[22]。本實(shí)驗(yàn)VEGF蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示,197例EC患者中VEGF表達(dá)陽性(VEGF+)134例(68.02%),陰性(VEGF-)63例(31.98%),而在不典型增生子宮內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中分別僅為21.18%和4.76%,VEGF在EC組較其他組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=98.976,P<0.05),提示VEGF的高表達(dá)和EC的形成發(fā)展過程密切相關(guān)。VEGF可能是通過促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的分化,調(diào)控血管的生成,從而促進(jìn)腫瘤形成與發(fā)展[23],這預(yù)示著EC組織中VEGF的高侵襲性及易轉(zhuǎn)移性,這與王淑貞等[22]的研究結(jié)果相一致。

王龍等[15]結(jié)果顯示,VEGF的表達(dá)與食管癌的臨床分期有關(guān)。王淑貞等[22]研究同樣證實(shí),VEGF陽性表達(dá)率在不同臨床分期中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與年齡和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示,EC組織中VEGF的高表達(dá)與患者的年齡、肌層浸潤深度、組織學(xué)類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān),而與EC患者的手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分化程度均密切相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。說明,VEGF陽性表達(dá)會(huì)隨著EC的臨床分期增加而增高,會(huì)隨腫瘤惡性程度的增高而增強(qiáng),VEGF表達(dá)與EC病情進(jìn)展有著緊密的聯(lián)系,可能成為判斷EC預(yù)后的指標(biāo),這與王淑貞等[22]的研究結(jié)果大體一致,但組織學(xué)分化因素的不太一致,這可能由于本研究病例數(shù)相對(duì)較少,有必要在以后的診斷治療過程中收集更多的病例,展開更深入的研究。

3.4 EC中VM、Leptin和VEGF蛋白三者之間的相關(guān)關(guān)系

國內(nèi)廖丹等[14]研究發(fā)現(xiàn),VEGF在EC中的VM形成過程中發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用。劉林枝等[4]報(bào)道,Leptin參與EC的細(xì)胞增殖、血管生成、凋亡抑制等過程,Leptin發(fā)揮類似于生長因子的作用。范曉琳等[16]也指出,Leptin是血管生成的刺激因子,可通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖促進(jìn)新生血管形成。和倩倩等[24]研究也顯示,在血管內(nèi)皮細(xì)胞上存在Leptin受體,Leptin可直接或間接作用于其受體,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖或上調(diào)VEGF表達(dá),最終促進(jìn)血管生成。國外,Misztal-Dethloff等[25]的研究表明,Leptin通過VEGF等內(nèi)源性血管內(nèi)皮刺激因子促進(jìn)血管生成。本研究VM、Leptin、VEGF蛋白的相關(guān)性結(jié)果顯示,VEGF陽性表達(dá)情況與VM結(jié)構(gòu)陽性呈正相關(guān),存在VM的EC中VEGF表達(dá)水平更高。Leptin與VEGF蛋白陽性表達(dá)呈正相關(guān);VM與Leptin呈正相關(guān),VM結(jié)構(gòu)陽性、Leptin蛋白高表達(dá)、VEGF蛋白高表達(dá)的病例具有更高的臨床分期和更差的組織學(xué)分化,也更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,這與上述報(bào)道相一致。存在VM結(jié)構(gòu)的EC侵襲性和轉(zhuǎn)移能力更強(qiáng),Leptin蛋白及VEGF蛋白能較好地誘導(dǎo)血管新生,與EC病情進(jìn)展聯(lián)系緊密,提示三者可能在EC的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用,參與了EC腫瘤的增殖,可作為EC診斷的標(biāo)志物,有望為尋求EC腫瘤檢測(cè)排查的新方法提供理論依據(jù)。

3.5 VM、Leptin和VEGF蛋白對(duì)EC的診斷

曹慶生等[26]在研究中指出,免疫組化染色方法能夠明顯提高術(shù)中腫瘤診斷準(zhǔn)確率,具有準(zhǔn)確率高、快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì),可解決癌癥患者診斷困難,誤診、漏診率高的問題,適合推廣。龔圣勇等[27]研究表明,多種免疫標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)是提高病理診斷準(zhǔn)確性的有效方法。本文研究了VM、Leptin和VEGF蛋白單項(xiàng)、兩兩配對(duì)及三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EC的診斷價(jià)值,結(jié)果顯示,各蛋白進(jìn)行單項(xiàng)檢測(cè)時(shí),Leptin的靈敏度(78.68%)高于VEGF(68.02%)和VM(39.59%),Leptin較其他腫瘤標(biāo)志物具有較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。進(jìn)一步兩兩聯(lián)合分別檢測(cè),觀察靈敏度、準(zhǔn)確度和約登指數(shù):VM+Leptin(80.71%,78.84%,57.06%)、VM+VEGF(75.63%,79.13%,59.42%)、Leptin+VEGF(81.73%,79.13%,57.40%),較單項(xiàng)檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確度及約登指數(shù)均有明顯升高。VM+Leptin+VEGF三指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)診斷效能達(dá)到本實(shí)驗(yàn)觀察組最高:靈敏度84.77%,特異度75.00%,準(zhǔn)確度80.58%,約登指數(shù)59.77%,除特異度略有下降外靈敏度、準(zhǔn)確度和約登指數(shù)均高于各單項(xiàng)及兩兩配對(duì)EC檢測(cè)的診斷效能,表明三者聯(lián)合檢測(cè)在EC診斷中更有優(yōu)勢(shì)?？梢?診斷EC的效力方面三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)優(yōu)于單項(xiàng)及兩兩配對(duì)檢測(cè),可提高EC的診斷準(zhǔn)確性,且有助于判斷EC患者嚴(yán)重程度。VM、Leptin和VEGF蛋白的聯(lián)合檢測(cè)能更有效地鑒別子宮內(nèi)膜良惡性腫瘤,尤其是在EC的早期診斷篩查、術(shù)前評(píng)估及術(shù)后監(jiān)測(cè)方面。三者具有一致性、協(xié)同性和互補(bǔ)性,可作為EC術(shù)后隨診監(jiān)測(cè)重要指標(biāo)。

VM、Leptin和VEGF蛋白的表達(dá)各自獨(dú)立,各腫瘤標(biāo)記物單獨(dú)檢測(cè)診斷EC的效力均是有限的,聯(lián)合檢測(cè)三者較各自單獨(dú)檢測(cè)能獲得更多的信息,一方面可以支持EC診斷,彌補(bǔ)單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的不足與局限;另一方面可篩選出更敏感的腫瘤標(biāo)志物,進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),在判斷療效和提示復(fù)發(fā)方面有積極作用?；诖诉M(jìn)行下步設(shè)想,EC術(shù)中可在觀察冰凍切片的同時(shí)進(jìn)行VM、Leptin和VEGF蛋白相關(guān)染色檢測(cè),操作流程參照[26]方法,鏡下觀察并與術(shù)后常規(guī)切片的免疫組化結(jié)果對(duì)比,以期聯(lián)合檢測(cè)為術(shù)中EC的診斷提供準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的實(shí)驗(yàn)方法。

概言之,VM、Leptin和VEGF蛋白的檢測(cè)均可用于EC的輔助診斷和輔助評(píng)估EC患者病情,三者在腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移過程中存在相關(guān)及正向協(xié)同作用,三者均對(duì)EC具有重要作用,是腫瘤發(fā)展中較為重要的生物學(xué)蛋白及因子,可為腫瘤診斷及治療提供依據(jù)。三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)有效地鑒別子宮內(nèi)膜良惡性腫瘤和提高EC的早期診斷均具有重要臨床價(jià)值和意義,有可能成為EC臨床診斷和預(yù)測(cè)的參考指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)：

[1] 顧勝藍(lán),王玉東.子宮內(nèi)膜癌免疫逃逸的研究進(jìn)展[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志,2018,19(1):85-86.

[2] Qi L, Song W, Liu Z,etal. Wnt3a promotes the vasculogenic mimicry formation of colon cancer via Wnt/β-Catenin signaling[J]. Int J Mol Sci,2015, 16(8):18564-18579.

[3] 孫清華,尹格平,陳銘,等.子宮內(nèi)膜癌中血管生成擬態(tài)及基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)情況研究[J].中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志:電子版,2016,12(1):29-34.

[4] 劉林枝,王小慧,尚晨光,等.瘦素及瘦素受體與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2017,26(9):704-706.

[5] 賈志凌,楊永昌,張淑艷,等.血管內(nèi)皮生長因子診斷多種惡性腫瘤臨床價(jià)值[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2015,29(7):701-705.

[6] 高賽楠,張玉泉,蘇敏,等.CGB5對(duì)卵巢癌OVCAR-3細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成的影響[J].腫瘤防治研究,2016,43(9):733-737.

[7] Gong L, Zhang W, Zhou J,etal. Prognostic value of HIFs expression in head and neck cancer: a systematic review[J]. PLoS One, 2013, 8(9): e75094.

[8] 李美艷.HE4、OPN及uPA檢測(cè)對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者診斷的臨床意義[J].國際腫瘤學(xué)雜志,2017,44(5):351-355.

[9] 郝長宏,田永會(huì),劉正玲,等.子宮內(nèi)膜異位癥患者血清CA125、HE4、EMAb的表達(dá)及其臨床意義[J].實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2014,30(11):855-857.

[10] 梁軍,苗蕊,邢慧敏.血管生成擬態(tài)在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義[J].中國腫瘤臨床,2015,42(23):1124-1127.

[11] 陳純,趙小朋,吳宇翎,等.舌鱗狀細(xì)胞癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化與血管生成擬態(tài)的關(guān)系及意義[J].中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志:電子版,2016,10(3):161-165.

[12] 周芳芳,陳冰.食管鱗癌組織中Slug、Vimentin、E-cadherin與血管生成擬態(tài)的表達(dá)及意義[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2017,48(2):144-148.

[13] 梁軍,楊波,吳小華.腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD117在上皮性卵巢癌血管生成擬態(tài)中的表達(dá)及意義[J].腫瘤,2016,36(1):70-76.

[14] 廖丹,鄧亞麗,禹正揚(yáng),等.子宮內(nèi)膜癌血管生成擬態(tài)與VEGF、COX-2表達(dá)的意義[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2015,14(17):1418-1421.

[15] 王龍,戴天陽.VEGF和VM對(duì)食管鱗狀上皮癌血液供應(yīng)的影響及臨床意義[J].重慶醫(yī)學(xué),2014,43(11):1380-1382.

[16] 范曉琳,張鵬飛,王靜,等.瘦素系統(tǒng)在胃癌組織表達(dá)及與臨床病理特征關(guān)系[J].青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,52(2):223-225.

[17] El-Masry OS,Al-Sakkaf K,Brown BL,etal. Differential crosstalk between the AMPK and PI3K/Akt pathways in breast cancer cells of differing genotypes: Leptin inhibits the effectiveness of AMPK activation[J]. Oncol Rep,2015,34(4): 1675-1680.

[18] Zhang Y, Liu L, Li C,etal. Correlation analysis between the expressions of leptin and its receptor (ObR) and clinicopathology in endometrial cancer[J]. Cancer Biomark,2014,14(5):353-359.

[19] Yuan Y, Zhang J, Cai L, e t al. Leptin induces cell proliferation and reduces cell apoptosis by activating c-myc in cervical cancer[J]. Oncol Reports, 2013, 25(6): 90-94.

[20] 林世龍,楊國良,張連華,等.瘦素在非肌層浸潤性膀胱癌中的表達(dá)及其意義[J].腫瘤學(xué)雜志,2014,20(2):131-134.

[21] 米小芳,姜霞,鄭繪霞,等.RACK1和VEGF蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2017,48(5):458-461.

[22] 王淑貞,王秋紅.HIF-1α和VEGF在子宮內(nèi)膜癌中的臨床表達(dá)及相關(guān)性[J].實(shí)用癌癥雜志,2017,32(4):536-538.

[23] 王玎,李志英,羅飛,等.子宮內(nèi)膜癌患者組織中COX-2蛋白及VEGF的表達(dá)及臨床意義[J].中國老年學(xué)雜志,2016,36(10):2418-2420.

[24] 和倩倩,石琨.脂肪因子與子宮內(nèi)膜癌的研究進(jìn)展[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2014,28(5):428-430.

[25] Misztal-Dethloff B, Stepien H, Komorowski J. Effect of leptin on proliferative activity and vascular endothelial growth factor (VEGF) secretion from cultured endothelial cells HECa10 in vitro[J]. Endocr Regul, 2004, 38(4): 161-166.

[26] 曹慶生,楊寶友,李志超.聯(lián)合檢測(cè)CT、CEA對(duì)術(shù)中診斷甲狀腺髓樣癌的意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,24(1):36-39.

[27] 龔圣勇,肖陽,宋芳,等.Galectin-3、CK19、CD56和TPO聯(lián)合檢測(cè)鑒別甲狀腺乳頭狀癌與良性乳頭狀增生[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2015,24(5):388-392.