曾祖平 李彧 譚征 韓旭陽 彭冰 王宏 何薇

摘要：目的 控制復(fù)方黃連膏中雄黃的質(zhì)量。方法 對(duì)雄黃中毒性成分三氧化二砷采用古蔡氏法進(jìn)行限度檢查；對(duì)雄黃主要成分二硫化二砷利用硫酸鉀、硫酸銨和硫酸消解后采用滴定法進(jìn)行定量分析。結(jié)果 復(fù)方黃連膏中可溶性砷含量不高于15.6 μg/g，二硫化二砷含量不低于2.21 mg/g。結(jié)論 本方法簡便易行，可以有效控制制劑中雄黃的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：復(fù)方黃連膏；雄黃；三氧化二砷；二硫化二砷

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.03.015

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2018）03-0068-04

Abstract： Objective To control the quality of realgar in compound Huanglian Ointment. Methods As2O3 which is the toxic component of realgar was carried limit test by Gutzeit's test； Potassium sulfate， ammonium sulfate and sulfuric acid were used to digest， and then titration method was used to determine the content of As2S2 in compound Huanglian Ointment. Results The content of the soluble As in compound Huanglian Ointment was no higher than 15.6 μg/g. The content of As2S2 in compound Huanglian Ointment was no less than 2.21 mg/g. Conclusion The method is simple and easy， which can be applied as the quantity control method of compound Huanglian Ointment.

Keywords： compound Huanglian Ointment； realgar； As2O3； As2S2

復(fù)方黃連膏是首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑（京藥制字Z20053395），具有清熱止癢、解毒消腫止痛的功效，用于濕毒蘊(yùn)結(jié)、瘀血留滯證，證見局部紅腫瘙癢或熱痛，皮損潮紅灼熱、瘙癢，舌紅，苔黃，脈數(shù)，及膿皰病、濕疹、丹毒見上述證候。復(fù)方黃連膏由黃連、醋炙乳香、醋炙沒藥、雄黃、冰片等11味藥組成。方中雄黃是國務(wù)院《醫(yī)療用毒性藥品管理辦法》中規(guī)定的28種毒性中藥之一，具有明顯的肝、腎毒性；研究表明，無機(jī)砷可誘發(fā)人類癌癥，對(duì)人體有危害[1-2]。為此，本研究對(duì)雄黃進(jìn)行質(zhì)量控制，采用滴定法對(duì)主要成分二硫化二砷進(jìn)行含量測(cè)定，采用古蔡氏法對(duì)毒性成分三氧化二砷進(jìn)行限度檢查，為臨床安全用藥提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

分析天平（PB 203-N，METTLER TOLEDO），超聲波清洗器（SK7210HP，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），水浴鍋（SYQ-4，常州朗越儀器制造有限公司），電子調(diào)溫電熱套（DZTW，北京中儀泓瑞科技發(fā)展有限公司）。

復(fù)方黃連膏（批號(hào)120140911、20140922、20141029），首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院；雄黃，北京同仁堂，按2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）方法測(cè)定，其中二硫化二砷含量為91.66%；0.050 30 mol/L碘液、0.25 mol/L硫酸，北京世紀(jì)科博有限公司，容量分析；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 可溶性砷檢查

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的制備

稱取三氧化二砷0.132 g，置1000 mL量瓶中，加20%氫氧化鈉溶液5 mL溶解，用適量稀硫酸中和，再加稀硫酸10 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。

臨用前，精密量取貯備液10 mL，置1000 mL量瓶中，加稀硫酸10 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1 mL相當(dāng)于1 μg砷）。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備

采用古蔡氏法[3]。分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2 mL，置砷斑裝置的磨口錐形瓶中，加鹽酸5 mL、水21 mL，再加入碘化鉀試液5 mL與酸性氯化亞錫試液5滴，室溫放置10 min后，加鋅粒2 g，立即將裝有醋酸鉛棉花60 mg的導(dǎo)氣管（旋塞的頂端平面上放1片溴化汞試紙）密塞于磨口錐形瓶上，并將其置于25～40 ℃水浴中反應(yīng)45 min，取出溴化汞試紙，即得標(biāo)準(zhǔn)砷斑。

2.1.3 供試品的制備

取復(fù)方黃連膏3.20 g，共3批，精密稱定，加稀鹽酸20 mL，40 ℃水浴保溫2 h，再振搖10 min，超聲處理（350 W，53 kHz）30 min，過濾（取稀鹽酸適量濕潤定量濾紙），殘?jiān)孟←}酸洗滌2次，每次10 mL，攪拌10 min，洗液與濾液合并，置50 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 供試品測(cè)定

精密量取供試品溶液2 mL，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備并測(cè)定，結(jié)果3批復(fù)方黃連膏所顯砷斑顏色均不深于標(biāo)準(zhǔn)砷斑，表明每1 g復(fù)方黃連膏中可溶性砷含量不高于15.6 μg。

2.2 二硫化二砷含量測(cè)定

2.2.1 供試品制備方法考察

2.2.1.1 去除軟膏基質(zhì)的溶劑選擇

復(fù)方黃連膏的主要基質(zhì)為凡士林，根據(jù)其溶解特性，選擇石油醚（60～90 ℃）作為溶解基質(zhì)的溶劑。取復(fù)方黃連膏約10 g，共2份，精密稱定，置于離心管中，加石油醚30 mL，60 ℃水浴加熱15 min，3000 r/min離心5 min，快速棄去上清液，底部剩余部分重復(fù)上述操作2次。最終殘?jiān)蒙倭渴兔严礈觳⑥D(zhuǎn)移至錐形瓶中，水浴加熱揮盡石油醚，放冷，加硫酸鉀2.0 g、硫酸銨5.0 g、硫酸30 mL[4-6]，電熱套中加熱至溶液澄明，放冷，緩緩加水100 mL，加熱微沸5 min，放冷。加酚酞指示劑4滴，用氫氧化鈉溶液（40→100）中和至微顯紅色后放冷，用0.25 mol/L硫酸溶液中和至褪色，加碳酸氫鈉5 g，搖勻后用0.05 mol/L碘液滴定，臨近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液3 mL，滴定至溶液顯棕褐色。每1 mL碘液相當(dāng)于5.348 mg二硫化二砷。經(jīng)計(jì)算，二硫化二砷的平均轉(zhuǎn)移率為76.29%，接近理論推算值，表明方法可行。

2.2.1.2 溶解溫度考察

加熱有利于凡士林在石油醚中的溶解。分別考察60、80 ℃水浴溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，按“2.2.1.1”項(xiàng)下方法操作，結(jié)果80 ℃水浴的平均轉(zhuǎn)移率較高于60 ℃水浴，故選擇80 ℃作為水浴溫度，見表1。

2.2.1.3 溶解次數(shù)考察

取復(fù)方黃連膏10 g，共6份，置于離心管中，精密稱定，按“2.2.1.1”項(xiàng)下方法操作，80 ℃水浴，結(jié)果溶解1次的平均轉(zhuǎn)移率高于溶解2、3次，故選擇加石油醚處理1次，見表2。

2.2.2 方法學(xué)考察

2.2.2.1 線性關(guān)系考察

分別取雄黃粉末0.013 7、0.034 0、0.062 0、0.092 0、0.120 0 g，精密稱定，分別置于錐形瓶中，加硫酸鉀2.0 g、硫酸銨5.0 g與硫酸30 mL，加熱至溶液澄明，放冷，緩緩加水50 mL，加熱5 min后放冷，加酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉（40→100）中和至微顯紅色后放冷，用0.25 mol/L硫酸溶液中和至褪色，加碳酸氫鈉5.0 g，搖勻后用0.05 mol/L碘液滴定，臨近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液3 mL，滴定至溶液顯棕褐色，見表3。以消耗碘滴定液的體積（mL）為縱坐標(biāo)，以雄黃粉末的取樣量（g）為橫坐標(biāo)，得回歸方程Y=176.8X-0.479，r=0.999 0，表明二硫化二砷取樣量在12.6～110 mg范圍內(nèi)與碘滴定液消耗體積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.2.2 空白試驗(yàn)

按處方量制備缺雄黃的陰性樣品，加30 mL石油醚，80 ℃水浴15 min，3000 r/min離心5 min，棄去上清液后按“2.2.1.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果消耗的碘滴定液（0.1 mol/L）為4滴，說明樣品中除雄黃外的其他成分對(duì)二硫化二砷的測(cè)定基本無干擾。

2.2.2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（批號(hào)20140911）樣品約10 g，精密稱定，共6份，分別加30 mL石油醚，80 ℃水浴15 min，3000 r/min離心5 min，棄去上清液后按“2.2.1.1”項(xiàng)下方法測(cè)定。結(jié)果二硫化二砷平均含量為2.714 mg/g，RSD=1.96%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.2.2.4 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批號(hào)（批號(hào)20140911）已知含量（2.714 mg/g）樣品約5 g，精密稱定，共6份，分別精密加入已知二硫化二砷含量（91.6%）的雄黃粉末約14.80 mg，置于離心管中，分別加入石油醚30 mL，80 ℃水浴15 min，3000 r/min離心5 min，棄去上清液后按“2.2.1.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果平均回收率為93.71%，RSD=1.87%，見表4。

2.2.3 樣品含量測(cè)定

取復(fù)方黃連膏10 g，共3批，每批3份，精密稱定，置于離心管中，加30 mL石油醚，80 ℃水浴15 min，3000 r/min離心5 min，棄去上清液，殘?jiān)蒙倭渴兔严礈觳⑥D(zhuǎn)移至錐形瓶中，水浴加熱揮盡石油醚，放冷，加硫酸鉀2.0 g、硫酸銨5.0 g、硫酸30 mL，電熱套中加熱至溶液澄明，放冷，緩緩加水100 mL，加熱微沸5 min，放冷。加酚酞指示劑4滴，用氫氧化鈉溶液（40→100）中和至微顯紅色后放冷，用0.25 mol/L硫酸溶液中和至褪色，加碳酸氫鈉5.0 g，搖勻后用0.05 mol/L碘液滴定，臨近終點(diǎn)時(shí)加淀粉指示液3 mL，滴定至溶液顯棕褐色，見表5。

由處方得知，每1 g復(fù)方黃連膏中含雄黃3.07 mg。考慮藥品制備過程中損失，假定為20%，同時(shí)考慮雄黃純度（藥典規(guī)定雄黃中二硫化二砷含量不得少于90.0%），則暫定每1 g復(fù)方黃連膏中二硫化二砷不低于2.21 mg。檢測(cè)的3批復(fù)方黃連膏均符合要求，說明雄黃原料按工藝處方基本足額投料。

3 討論

雄黃入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》（稱黃食石）。許多中藥制劑均含有雄黃，如安宮牛黃丸、牛黃解毒丸（片）、局方至寶散等。雄黃的主要成分是二硫化二砷，而所含的微量三氧化二砷（俗稱砒霜）是其毒性成分[7]。因此，有效控制含雄黃制劑中二硫化二砷和三氧化二砷的含量具有必要性。

進(jìn)行三氧化二砷限度檢查時(shí)，本研究采用2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則0822收載的可溶性砷鹽檢查方法第一法（古蔡氏法），利用無砷金屬鋅與酸反應(yīng)產(chǎn)生新生態(tài)的氫，再與樣品中微量亞砷酸鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，砷化氫遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，將其與同一條件下定量的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所產(chǎn)生的砷斑進(jìn)行比較，來判斷樣品中砷鹽的限度。與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較后，經(jīng)計(jì)算，每1 g復(fù)方黃連膏中可溶性砷鹽含量不高于15.6 μg。

進(jìn)行二硫化二砷含量測(cè)定時(shí)，首先將藥品消解，再采用滴定法測(cè)定。復(fù)方黃連膏中存在大量軟膏基質(zhì)凡士林，會(huì)干擾含量測(cè)定結(jié)果[8]，預(yù)試驗(yàn)也驗(yàn)證了這一結(jié)論，因此有必要去除軟膏基質(zhì)。根據(jù)相似相溶原理，應(yīng)選取非極性溶劑去除基質(zhì)。石油醚具有揮發(fā)快、沸點(diǎn)低且不與樣品藥物發(fā)生反應(yīng)的特點(diǎn)，故本研究選取石油醚（60～90 ℃）作為去除復(fù)方黃連膏中基質(zhì)的溶劑。

在建立二硫化二砷含量測(cè)定方法時(shí)發(fā)現(xiàn)，樣品的消解過程對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較大。起初按藥典方法加入消解過程所需試劑量，結(jié)果反應(yīng)不徹底，測(cè)定結(jié)果偏低；而后參考文獻(xiàn)方法加大了試劑用量，反應(yīng)基本完全，方法學(xué)考察結(jié)果表明所建立的方法可行。

參考文獻(xiàn)：

[1] 裴月湖，徐文峰，陳剛，等.基于代謝組學(xué)的中藥解毒作用的研究中藥對(duì)硫化砷引起的肝腎毒性的解毒作用[C]//中國藥學(xué)會(huì).全國中藥與天然藥物高峰論壇暨第十三屆全國中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集.杭州，2013：27.

[2] 周超凡，林育華.傳統(tǒng)中藥雄黃應(yīng)用概況及其安全性[J].藥物不良反應(yīng)雜志，2008，10（2）：104-109.

[3] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：四部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：102.

[4] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：336.

[5] 吳輝彬，陳志成，王曉云，等.牛黃清心丸（局方）中朱砂和雄黃的含量測(cè)定[J].中國藥業(yè)，2012，21（14）：44-46.

[6] 耿素枝，張喜.滴定法測(cè)定蒙藥筋骨風(fēng)痛膏中二硫化二砷的含量[J].中外醫(yī)療，2011，30（33）：134-135.

[7] 張偉，余伯陽，寇俊萍，等.雄黃活性物質(zhì)的毒效相關(guān)性初步研究[J].中國天然藥物，2004，2（2）：123-125.

[8] 石天松.軟膏劑藥品含量測(cè)定方法的現(xiàn)狀[J].右江醫(yī)學(xué)，2004，32（3）：280-281.

（收稿日期：2017-09-26）

（修回日期：2017-10-17；編輯：陳靜）